和厚朴酚的提取及增强多黏菌素对mcr-1阳性菌的抗菌作用研究

发布时间：2021-10-21 19:29

　　质粒介导的多黏菌素抗性基因mcr-1在多药耐药肠杆菌科细菌中的发现,迅速引起全球各个国家政府和科学家的高度关注,这导致多黏菌素作为治疗严重耐药革兰氏阴性肠杆菌感染的“最后防线”作用极大降低。因此,临床上急需解决携带mcr-1基因的多药耐药菌感染问题。本研究旨在通过实验室建立的MCR-1耐药酶抑制剂筛选平台筛选出一种MCR-1活性抑制剂以恢复多黏菌素对多药耐药肠杆菌科细菌的抗菌活性,并成功筛选获得天然化合物和厚朴酚,其作为MCR-1的活性抑制剂可显著恢复多黏菌素类抗生素的体内外抗菌活性。通过棋盘法MIC试验发现和厚朴酚浓度在16μg/mL时可显著恢复多黏菌素对MCR-1阳性大肠杆菌、沙门氏菌以及肺炎克雷伯的抑菌作用,当和厚朴酚的浓度≥16μg/mL时,其最小抑菌浓度试验的分级抑菌浓度指数FICI均小于0.5（0.09±0.00至0.27±0.06）。此外,和厚朴酚与多黏菌素在MCR-1阴性耐多黏菌素革兰氏阴性肠杆菌科菌株中也具有显著的协同作用。通过生长曲线试验验证了和厚朴酚在使用浓度条件下对MCR-1阳性肠杆菌菌株的生长无显著影响。通过细胞毒性试验发现,和厚朴酚浓度低于32μg/mL时,... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩写词注释表
引言
第一篇 文献综述
    第1章 多黏菌素研究现状
        1.1 多黏菌素的临床使用状况
        1.2 多黏菌素的抗菌机制
            1.2.1 核糖体结合
            1.2.2 细胞呼吸
            1.2.3 细胞分裂
            1.2.4 Ex Portal结构
        1.3 多黏菌素的耐药机制
            1.3.1 LPS的类脂A修饰
            1.3.2 压力反应
            1.3.3 多黏菌素外排泵
            1.3.4 质粒介导的抗性
    第2章 MCR-1 介导的多黏菌素耐药性
        2.1 MCR-1 的发现及传播情况
        2.2 MCR-1 介导的多黏菌素耐药机制
        2.3 MCR-1 产生的危害
    第3章 和厚朴酚研究现状
        3.1 和厚朴酚的药理学作用研究现状
            3.1.1 抗肿瘤作用
            3.1.2 抗氧化作用
            3.1.3 免疫效应
            3.1.4 抗病毒活性
            3.1.5 和厚朴酚对心脏和肝细胞的保护作用
            3.1.6 神经生物学效应
            3.1.7 抗菌活性
        3.2 和厚朴酚的毒理学研究现状
        3.3 厚朴中和厚朴酚的提取纯化工艺研究现状
第二篇 研究内容
    第1章 和厚朴酚抗MCR-1 活性的发现
        1.1 试验材料
            1.1.1 试验菌株和试剂
            1.1.2 设备仪器
        1.2 试验方法
            1.2.1 MCR-1 载体构建
            1.2.2 肉汤微量稀释棋盘法
            1.2.3 生长曲线
            1.2.4 时间-杀菌曲线
            1.2.5 琼脂扩散试验
            1.2.6 细胞毒性试验
            1.2.7 统计学分析
        1.3 试验结果
            1.3.1 和厚朴酚可有效恢复多黏菌素的抗菌活性
            1.3.2 和厚朴酚对产MCR-1 耐药菌抗菌活性较低
            1.3.3 和厚朴酚联用多黏菌素对产MCR-1 耐药菌呈现明显的杀菌作用
            1.3.4 和厚朴酚对宿主细胞无细胞毒性作用
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第2章 和厚朴酚抑制MCR-1 活性的作用机制
        2.1 试验材料
            2.1.1 试验试剂
            2.1.2 设备仪器
        2.2 试验方法
            2.2.1 蛋白免疫印迹试验
            2.2.2 分子动力学模拟
            2.2.3 MCR-1 氨基酸定点突变
            2.2.4 FICI测定
        2.3 试验结果
            2.3.1 和厚朴酚不影响MCR-1 的表达
            2.3.2 和厚朴酚抑制MCR-1 活性机制分析
            2.3.3 和厚朴酚对MCR-1 抑制作用机制的确证
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第3章 和厚朴酚联用多黏菌素对产MCR-1耐药菌感染小鼠模型的实验治疗学研究
        3.1 试验材料
            3.1.1 试验动物和试剂
            3.1.2 设备仪器
        3.2 试验方法
            3.2.1 小鼠全身感染模型建立及其实验治疗学研究
            3.2.2 小鼠肌肉感染模型建立及其实验治疗学研究
            3.2.3 小鼠肺炎模型建立及其实验治疗学研究
            3.2.4 统计学分析
        3.3 试验结果
            3.3.1 和厚朴酚联用多粘菌素有效降低大肠杆菌小鼠全身感染的死亡率
            3.3.2 和厚朴酚联用多粘菌素有效降低感染小鼠肌肉菌落定植
            3.3.3 和厚朴酚联用多粘菌素有效缓解小鼠肺炎的病理性损伤作用
        3.4 讨论
        3.5 小结
    第4章 厚朴中和厚朴酚提取工艺研究
        4.1 试验材料
            4.1.1 试验试剂
            4.1.2 设备仪器
        4.2 试验方法
            4.2.1 提取溶媒筛选
            4.2.2 溶解度考察
            4.2.3 提取工艺研究
            4.2.4 减压浓缩温度考察
            4.2.5 样品制备
        4.3 试验结果
            4.3.1 溶解度考察
            4.3.2 提取工艺研究
            4.3.3 减压浓缩温度考察
            4.3.4 浓缩液的制备及转移率测定
        4.4 讨论
        4.5 小结
    第5章 含量方法学验证及初步药效学考察
        5.1 试验材料
            5.1.1 试验试剂
            5.1.2 设备仪器
        5.2 试验方法
            5.2.1 含量测定方法
            5.2.2 含量测定方法学验证
            5.2.3 厚朴提取物恢复多黏菌素抗菌活性分析
        5.3 试验结果
            5.3.1 供试品溶液稳定性考察
            5.3.2 系统适应性试验
            5.3.3 专属性考察
            5.3.4 精密度
            5.3.5 线性与范围
            5.3.6 回收率
            5.3.7 厚朴提取物有效恢复多黏菌素对产MCR-1 耐药菌的抗菌活性
        5.4 讨论
        5.5 小结
结论
参考文献
导师简介
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]厚朴酚与和厚朴酚溶解度的测定及其分离[J]. 苏德辉,周敏,唐新宗,崔春雨,刘盛,韦万兴.  广西大学学报(自然科学版). 2012(06)
[2]Honokiol induces apoptosis through p53-independent pathway in human colorectal cell line RKO[J]. Tao Wang Fei Chen Zhe Chen Yi-Feng Wu Xiao-Li Xu Shu Zheng Xun Hu Cancer Institute,Second Hospital of Medicine College of Zhejiang University,Hangzhou 310009,Zhejiang Province,ChinaWu,Life Science College of Zhejiang University,Hangzhou 310009,Zhejiang Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2004(15)



本文编号：3449587