大熊猫源大肠杆菌耐药性检测及质粒介导耐药基因的研究

发布时间：2021-10-22 06:38

　　近年来,关于大熊猫细菌性疾病的报道逐渐增多,大熊猫细菌性疾病治疗手段主要为抗生素,在抗生素使用过程中细菌可能产生耐药性,细菌耐药性将对大熊猫细菌疾病治疗带来影响。因此本研究将大肠杆菌常作为耐药性的指示菌株来调查大熊猫源细菌的耐药性,研究大熊猫细菌耐药现状,为临床合理用药提供指导。1.大熊猫源大肠杆菌的分离鉴定及O血清型鉴定从四川地区采集大熊猫粪便、生殖道拭子和呼吸道拭子,分离鉴定出149株大肠杆菌；并使用玻板凝集试验对分离鉴定的大肠杆菌进行了血清鉴定。结果显示,149株大肠杆菌中有144株（144/149,96.64%）血清型得以鉴定,共覆盖了57种血清型,优势血清型为O18、O60、O54、O130、O17、O99、O101、O107所占比例分别是6.71%、6.04%、4.7%、4.7%、3.36%、3.36%、3.36%、3.36%,共54株,优势血清型占定型菌株的37.5%。同一地域血清型种类繁多,不同地域血清型差异较大,不同地域优势血清型存在差异；不同年龄阶段大肠杆菌血清型分布情况也不同。2.大熊猫大肠杆菌耐药情况采用肉汤微量稀释法,对分离鉴定的149株大肠杆菌进行了18种抗... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略词
第一章 文献综述
    1 大肠埃希氏菌病概述
        1.1 大肠杆菌病原学
        1.2 大熊猫大肠杆菌病
        1.3 大熊猫大肠杆菌血清型的流行情况
    2 大熊猫大肠杆菌耐药现状
    3 大肠杆菌细菌耐药机理
        3.1 生物化学机制
            3.1.1 灭活酶或钝化酶的产生
            3.1.2 细菌主动外排机制
            3.1.3 抗生素作用靶位的改变
            3.1.4 改变细菌细胞膜的通透性
            3.1.5 细菌生物被膜的形成
            3.1.6 代谢途径或代谢状态改变
        3.2 细菌耐药产生的遗传学机制
            3.2.1 基因突变
            3.2.2 细菌间耐药基因转移
    4 大肠杆菌耐药基因流行情况
    5 研究目的和意义
第二章 大熊猫源大肠杆菌分离鉴定、血清型鉴定
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 样本
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要溶液和试剂配制
            1.1.4 主要仪器
        1.2 方法
            1.2.1 大肠杆菌分离培养
            1.2.2 大肠杆菌生化鉴定
            1.2.3 大肠杆菌血清型鉴定
    2 结果与分析
        2.1 大肠杆菌分离鉴定
        2.2 大熊猫源大肠杆菌血清型鉴定
            2.2.1 149株大熊猫源大肠杆菌血清型鉴定
            2.2.2 不同地域大熊猫大肠杆菌O血清型分布
            2.2.3 不同年龄阶段和不同样品类型大肠杆菌O血清型分布
    3 讨论
        3.1 大熊猫源大肠杆菌的分离鉴定
        3.2 大熊猫源大肠杆菌血清型鉴定
        3.3 不同地域大熊猫大肠杆菌O血清型分布
第三章 大熊猫源大肠杆菌的耐药性检测
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌株
            1.1.2 抗菌药物与试剂
            1.1.3 溶液配制
            1.1.4 主要耗材
            1.1.5 主要仪器
        1.2 方法
            1.2.1 抗菌药液的配制及稀释
            1.2.2 菌种接种及稀释
            1.2.3 大肠杆菌药物敏感试验
            1.2.4 结果判断
            1.2.5 数据分析
    2 结果与分析
        2.1 大熊猫大肠杆菌对18种抗菌药物的药敏试验
        2.2 149株大熊猫大肠杆菌对18种抗菌药物的耐药性
        2.3 不同年龄阶段大熊猫大肠杆菌对18种抗菌药物的耐药分析
        2.4 不同地域大熊猫大肠杆菌对18种抗菌药物的耐药分析
        2.5 大熊猫源大肠杆菌对18种抗菌药物的多重耐药性分析
    3 讨论
第四章 大熊猫源大肠杆菌中质粒介导四环素和β-内酰胺类相关耐药基因检测
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 试验菌株
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 培养基和缓冲液配制
            1.1.4 主要仪器
        1.2 方法
            1.2.1 引物设计与合成
            1.2.2 大肠杆菌质粒提取
            1.2.3 PCR扩增耐药基因
            1.2.4 耐药基因PCR产物T克隆
            1.2.5 目的片段测定和序列分析
    2 结果与分析
        2.1 质粒图谱
        2.2 耐药基因的PCR检测及测序结果
        2.3 不同地域分离菌株耐药基因检测
        2.4 不同年龄阶段分离菌株耐药基因检测
        2.5 大肠杆菌O血清型与耐药表型、耐药基因型的相关性
    3 讨论
第五章 大肠杆菌耐药基因水平传播机制的初步研究
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌株
            1.1.2 培养基及溶液配制
            1.1.3 主要仪器
        1.2 方法
            1.2.1 质粒结合试验
            1.2.2 结合转移子的PCR鉴定及MIC测定
    2 结果
    3 讨论
结论与创新
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]亚抑菌浓度头孢西丁体外诱导大肠埃希菌耐药转移[J]. 韩珍,林日文,李静.  医学理论与实践. 2012(23)
[2]2011年中国CHINET细菌耐药性监测[J]. 胡付品,朱德妹,汪复,蒋晓飞,杨青,徐英春,张小江,孙自镛,陈中举,王传清,王爱敏,倪语星,孙景勇,俞云松,林洁,单斌,杜艳,徐元宏,沈继录,张泓,孔菁,卓超,苏丹虹,张朝霞,季萍,胡云建,艾效曼,黄文祥,贾蓓,魏莲花,吴玲.  中国感染与化疗杂志. 2012(05)
[3]大熊猫肠道大肠杆菌的分离、鉴定及其耐药性分析[J]. 李蓓,李旭林,郭丽娟,龙梅,郭放,何雪梅,罗燕,邹立扣.  西南农业学报. 2012(03)
[4]发情期大熊猫阴道分泌物细菌分析[J]. 刘燕,丁楠,李林海,赵京,夏茂华,原蕾,张成林,刘学峰.  野生动物. 2012(01)
[5]规模化猪场大肠杆菌β-内酰胺类药物耐药性检测及其超广谱β-内酰胺酶调查[J]. 田国宝,王红宁,张安云,张毅,杨鑫,徐昌文.  中国预防兽医学报. 2011(10)
[6]2010年中国CHINET细菌耐药性监测[J]. 朱德妹,汪复,胡付品,蒋晓飞,倪语星,孙景勇,徐英春,张小江,胡云健,艾效曼,俞云松,杨青,孙自镛,陈中举,贾蓓,黄文祥,卓超,苏丹虹,魏莲花,吴玲,张朝霞,季萍,王传清,王爱敏,张泓,孔菁,徐元宏,沈继录,单斌,杜艳.  中国感染与化疗杂志. 2011(05)
[7]亚抑菌浓度三代头孢菌素对耐药质粒接合转移的影响[J]. 方晔,李向阳,杨锦红,李方去.  中国卫生检验杂志. 2011(09)
[8]800株不同动物源大肠杆菌的耐药性监测[J]. 赖婧,刘洋,汪宇,秦上尚,李岩,吴聪明.  中国兽医杂志. 2011(04)
[9]98株鸭源致病性大肠杆菌氨基糖苷类耐药基因型与耐药表型的比较[J]. 于学辉,黄兰,杨晓农,刘群.  畜牧兽医学报. 2010(12)
[10]宠物源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因流行性检测[J]. 朱恒乾,廖晓萍,陈朝喜,王秀梅,孙坚,孙迎,李亮,张美君,刘雅红.  中国农业科学. 2010(16)



本文编号：3450572