奶牛血清和牛奶中胰蛋白酶和糜蛋白酶检测方法改良

发布时间：2021-10-22 23:09

　　胰蛋白酶在临床上主要用于抗炎消肿以及改善炎症部位在内的全身性血液循环,有益于缓解药物的吸收。糜蛋白酶可将炎症部位纤维蛋白的凝结物分解,从而加快伤口愈合。胰蛋白酶和糜蛋白酶都有分解蛋白质功能,两者同时作用可将蛋白质分解为小分子的多肽以及氨基酸。同时胰蛋白酶和糜蛋白酶组成的混合酶对引起奶牛乳房炎的主要革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌等都有比较明显的抑菌效果,这两种酶均可用于奶牛乳房炎的治疗。因此,有必要在血清和牛奶中建立胰蛋白酶和糜蛋白酶的检测方法,以便于临床药代动力学的研究。胰蛋白酶和糜蛋白酶可将底物分解为对硝基苯胺（p-NA）,p-NA在405 nm波长下有吸收,因此通过检测检测底物的消光值,计算得出酶活。为了提高复合酶在血清和牛奶中检出的敏感性和准确性,本试验在现有胰蛋白酶在奶牛血清和牛奶中活性检测方法的基础上进行了改良。经过改良的检测方法结果显示,在0～0.4 nmol/μL范围内,胰蛋白酶的吸光度值与浓度呈现良好的线性关系,回归方程Y=0.023X-0.0038,R²= 0.9996;以信噪比S/N = 3为标准,在血清中最低检测限浓度为15 ng/mL,平均回收... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略符号
上篇 文献综述
    引言
    第一章 胰蛋白酶、糜蛋白酶及复合酶制剂研究进展
        1 胰蛋白酶的研究进展
            1.1 胰蛋白酶的化学组成与性质
            1.2 胰蛋白酶的生产工艺
                1.2.1 浸取
                1.2.2 分级盐析、结晶
                1.2.3 溶解、分级盐析
                1.2.4 活化
                1.2.5 除钙、盐析、透析、冻干
            1.3 胰蛋白酶的药理作用
            1.4 胰蛋白酶的毒性
            1.5 胰蛋白酶的临床应用
        2 糜蛋白酶的研究进展
            2.1 糜蛋白酶的化学组成与性质
            2.2 糜蛋白酶的生产工艺
                2.2.1 绞碎、提取
                2.2.2 分级盐析、结晶
                2.2.3 活化、盐析、结晶
                2.2.4 透析、灭菌、干燥
            2.3 糜蛋白酶的药理作用
            2.4 糜蛋白酶的毒性
            2.5 糜蛋白酶的临床应用
        3 其它酶制剂在畜牧生产中的研究进展
            3.1 酶制剂在饲料中的作用
                3.1.1 直接分解营养物质,提高饲料的利用率
                3.1.2 补充内源酶不足,激活分泌消化功能
                3.1.3 消除抗营养因子,改善消化机能
                3.1.4 提高植酸磷的利用率
                3.1.5 消化道成分位点转移
            3.2 酶制剂在畜牧业生产中的应用效果
                3.2.1 在蛋鸡生产中的应用效果
                3.2.2 在肉鸡生产中的应用效果
                3.2.3 在断奶仔猪生产上的应用效果
                3.2.4 在肥育猪生产中的应用效果
                3.2.5 在奶牛中的应用效果
                3.2.6 在肉牛生产中的应用效果
                3.2.7 在养羊生产中的应用效果
            3.3 酶的研究目的及其意义
        4 胰蛋白酶和糜蛋白酶的检测方法
            4.1 胰蛋白酶的检测方法
            4.2 糜蛋白酶的检测方法
    参考文献
下篇 检测方法研究
    第二章 奶牛血清和牛奶中胰蛋白酶检测方法改良
        1 材料与方法
            1.1 主要试剂
            1.2 主要仪器设备
            1.3 胰蛋白酶活性检测主要溶液配制
                1.3.1 p-NA标准液的配制
                1.3.2 待测样品的制备
                1.3.3 反应(底物)混合体系制备
                1.3.4 盐酸(pH3)的配制
        2 结果
            2.1 胰蛋白酶试剂盒检测方法
            2.2 方法学建立
                2.2.1 标准曲线的绘制
                2.2.2 样品检测浓度的确定
                2.2.3 样品的处理
                2.2.4 特异性
                2.2.5 定量限和检测限
                2.2.6 添加回收率
                2.2.7 精密度
        3 讨论
        参考文献
    第三章 奶牛血清和牛奶中糜蛋白酶检测方法改良
        1 材料与方法
            1.1 主要试剂
            1.2 主要仪器设备
            1.3 糜蛋白酶活性检测主要溶液配制
                1.3.1 糜蛋白酶在血清中标准液的制备
                1.3.2 糜蛋白酶在牛奶中标准液的制备
                1.3.3 盐酸溶液(pH3)的制备
        2 结果
            2.1 糜蛋白酶检测方法
                2.1.1 检测原理
                2.1.2 检测过程
                2.1.3 计算公式
            2.2 方法学建立
                2.2.1 标准曲线的绘制
                2.2.2 样品检测浓度的确定
                2.2.3 样品的处理
                2.2.4 特异性
                2.2.5 定量限和检测限
                2.2.6 添加回收率实验
                2.2.7 精密度
        3 讨论
        参考文献
全文总结
致谢



本文编号：3452003