PCV2感染相关的猪CD74基因的分子特征与功能初步研究

发布时间：2021-10-23 03:18

　　猪圆环病毒病是由猪圆环病毒Ⅱ型（Porcine Circovirus type2, PCV2）引起的一种免疫抑制性疾病。上世纪90年代暴发以来,该病给全世界养猪业造成了巨大的经济损失。PCV2可以调节多种信号通路,从而参与细胞免疫应答、炎症反应和细胞凋亡。据证实,PCV2能激活p38MAPK和NF-κB信号通路,同时改变细胞内细胞因子的表达。人CD74是一种表达于多种抗原递呈细胞的跨膜糖蛋白,主要参与抗原递呈和免疫应答。近来的研究显示,CD74分子也可以作为一种辅助的信号分子发挥作用。如作为巨噬细胞移动抑制因子MIF的特异性受体参与MIF的信号转导,或直接参与滤泡B细胞的成熟和边缘B细胞的聚集,以及在幽门螺杆菌感染过程中作为胃上皮细胞表面受体促进IL-8表达。CD74分子在复杂的免疫机制中通过调节多种信号通路参与各种疾病的发生。尽管已经证实人CD74能诱导NF-κB信号途径的激活,但猪CD74在PCV2致病中的作用还未被研究。本研究发现猪CD74主要表达于巨噬细胞系,且能被LPS、Poly（I:C）和PCV2诱导表达；证实了猪CD74能促进1κBα降解和p65核转位从而激活NF-κB;... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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目录
摘要
Abstract
缩略语表（Abbreviation)
1 文献综述
    1.1 猪圆环病毒病概述
    1.2 PCV2的病毒特征
    1.3 PCV2的流行病学及危害
        1.3.1 地理分布
        1.3.2 易感动物
        1.3.3 传播途径
    1.4 PCV2的致病机理
    1.5 PCV2感染PK-15细胞对信号通路的调节和细胞因子的影响
    1.6 NF-κB
        1.6.1 NF-κB家族
        1.6.2 NF-κB家族在免疫细胞中的功能
        1.6.3 由IκB和IKKs介导的NF-κB激活
        1.6.4 NF-κB对免疫应答和炎性因子的影响
    1.7 CD74基因
        1.7.1 CD74基因分子结构
        1.7.2 CD74分子功能研究
        1.7.3 猪CD74基因研究进展
2 研究目的与意义
3 材料与方法
    3.1 实验材料
        3.1.1 菌株、质粒、细胞和病毒
        3.1.2 主要试剂和试剂盒
        3.1.3 培养基和主要试剂的配置
        3.1.4 实验仪器和器械
        3.1.5 实验动物
        3.1.6 分子生物学分析软件
    3.2 实验方法
        3.2.1 重组质粒的构建
        3.2.2 原核蛋白的表达、纯化以及检测
        3.2.3 鼠多克隆抗体的制备
        3.2.4 真核重组质粒的转染及检测
        3.2.5 CD74蛋白的亚细胞定位
        3.2.6 双荧光素酶报告实验
        3.2.7 相对定量PCR检测CD74基因及各种细胞因子的mRNA水平
        3.2.8 数据分析
4 结果与分析
    4.1 猪CD74的序列分析
    4.2 CD74的系统进化树
    4.3 PCV2感染对PK-15细胞CD74基因表达的影响
    4.4 LPS和Poly(I：C)刺激PK-15细胞CD74基因的表达
    4.5 CD74基因的组织特异性分布
    4.6 重组质粒pET-32a-CD74和pcDNA3.1-CD74的构建与鉴定
    4.7 CD74蛋白的纯化和Western Blot检测
    4.8 CD74蛋白多克隆抗体的制备
    4.9 CD74蛋白真核表达的检测
    4.10 CD74蛋白的亚细胞定位
    4.11 双荧光素酶试剂盒检测猪CD74对NF-κB信号通路的作用
    4.12 Western Blot检测猪CD74对IκB表达以及p65核转位的影响
    4.13 Real-Time PCR检测CD74对IL-6,IL-8和COX-2表达的影响
    4.14 猪CD74与PCV2互作对NF-κB信号通路的影响
5 讨论
    5.1 LPS和poly (I：C)刺激对CD74基因表达的影响
    5.2 猪CD74的组织特异性分布
    5.3 PCV2对CD74基因表达的影响
    5.4 猪CD74的亚细胞定位
    5.5 猪CD74激活NF-κB信号通路
    5.6 猪CD74对IL-6、IL-8和COX-2表达的影响
6 小结
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]CD74 and macrophage migration inhibitory factor as therapeutic targets in gastric cancer[J]. Ying-Xia Zheng,Ting-Ting Rong,Xiang-Liang Yuan,YanHui Ma,Zhi-Hao Wang,Li-Song Shen,Department of Laboratory Medicine,Xinhua Hospital,Shanghai Jiao Tong University School of Medicine,Shanghai 200092,China Ming Yang,Long Cui,Department of Anorectal Surgery,Xinhua Hospital,Shanghai Jiao Tong University School of Medicine,Shanghai 200092,China.  World Journal of Gastroenterology. 2012(18)
[2]CD74 in antigen presentation,inflammation,and cancers of the gastrointestinal tract[J]. Ellen J Beswick,Victor E Reyes.  World Journal of Gastroenterology. 2009(23)
[3]树突状细胞[J]. 唐军民,张薇.  解剖学报. 1993(03)



本文编号：3452369