基于NS4蛋白的蓝舌病病毒间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用
发布时间：2021-10-23 15:05
旨在建立蓝舌病病毒（BTV）血清学ELISA抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的BTV NS4重组蛋白为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种BTV重组NS4蛋白的间接ELISA抗体检测方法。SDS-PAGE结果显示,获得大小约52 ku的NS4重组融合蛋白,主要在上清中存在,Western blot显示,纯化后的重组蛋白具有良好的抗原性。通过方阵试验进行了ELISA反应条件优化,确定了重组蛋白抗原最佳包被量为3.0μg·孔-1;血清最佳稀释倍数为1∶200,酶标二抗最佳工作浓度为1∶4 000,临界值分别为0.29和0.35。上述以NS4蛋白作为包被抗原建立的BTV抗体间接ELISA方法检测敏感性可达1∶1 600;批内和批间重复性变异系数均小于10%;检测76份重庆地区牛群血清样品,阳性符合率为98%,阴性符合率为100%。本研究建立的间接ELISA方法为临床BTV血清抗体检测及BTV血清流行病学调查奠定了基础。
【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(12)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
重组质粒酶切鉴定（A）及重组融合蛋白SDS-PAGE分析（B)
图1 重组质粒酶切鉴定（A）及重组融合蛋白SDS-PAGE分析（B)表1 方阵法确定NS4蛋白包被量与血清稀释度(OD450 nm)Table 1 Determination of NS4 protein coating and serum dilution by square matrix method(OD450 nm) 抗原量/(μg·mL-1)Amount of antigen 阳性血清Positive serum 阴性血清Negative serum 空白对照Blank control 1∶50 1∶100 1∶200 1∶400 1∶50 1∶100 1∶200 1∶400 6.000 0 1.252 3 1.023 5 0.924 5 0.695 4 0.120 9 0.084 1 0.061 2 0.040 9 0.034 2 3.000 0 1.180 8 0.985 2 0.852 9 0.512 9 0.075 7 0.061 4 0.042 9 0.031 9 0.031 9 1.500 0 1.040 8 0.897 6 0.752 6 0.485 6 0.069 8 0.075 4 0.042 8 0.031 4 0.041 8 0.750 0 0.826 4 0.685 6 0.591 7 0.258 9 0.058 7 0.054 7 0.049 2 0.030 6 0.031 4 0.375 0 0.562 4 0.421 6 0.280 1 0.165 9 0.051 6 0.048 7 0.047 6 0.032 8 0.021 0 0.187 5 0.354 8 0.285 6 0.156 3 0.103 9 0.042 1 0.040 3 0.041 3 0.031 0 0.021 3
【参考文献】：
期刊论文
[1]Ⅰ型蓝舌病毒NS4基因的克隆及序列分析[J]. 赵瑶,徐栋,马三立,马鲜平,王芝英,张德志,李前勇,谢成华,杨发辉,易华山. 西南大学学报(自然科学版). 2020(09)
[2]蓝舌病毒结构与组装机制研究进展[J]. 易华山,赵瑶,马鲜平,王芝英,张德志,李前勇,左福元. 家畜生态学报. 2020(07)
[3]病毒性疾病对奶牛繁殖力的重要影响[J]. D.Claire Wathes,Chike F.Oguejiofor,Carole Thomas,Zhangrui Cheng. Engineering. 2020(01)
[4]蓝舌病病毒4型特异性竞争ELISA检测方法的建立[J]. 李佳璇,臧明鑫,谢双羽,姜艳平,崔文,徐义刚,刘敏,乔薪瑗,王丽,周晗,李一经,唐丽杰. 生物工程学报. 2017(08)
[5]蓝舌病病毒7型毒株的分离与分子鉴定[J]. 吕敏娜,杨恒,孙铭飞,李娟,林栩慧,张健騑,廖申权,戚南山,吴彩艳,李华春,陈琴苓. 畜牧兽医学报. 2017(07)
[6]蓝舌病病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立[J]. 苗海生,李乐,廖德芳,朱建波,寇美龄,杨永钦,孙强,李华春. 中国预防兽医学报. 2015(03)
[7]蓝舌病病毒阻断ELISA抗体检测方法的建立[J]. 苗海生,李乐,朱建波,肖雷,廖德芳,王金萍,李华春. 中国预防兽医学报. 2014(02)
[8]以合成肽为抗原建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测ELISA试剂盒[J]. 杨继飞,杨苏珍,杨艳艳,职爱民,赵东,郅玉宝,邢广旭,邓瑞广,柴书军,张改平. 中国农业科学. 2010(06)
[9]应用套入式聚合酶链反应（Nested-PCR）检测蓝舌病病毒的研究[J]. 马洪超,孙淑芳,陶茂辉,尹燕博,郭福生,龚振华,蔡丽娟,蒋正军,丁有胜,黄运生,陈书琨. 畜牧兽医学报. 2000(02)
本文编号：3453403
【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(12)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
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重组质粒酶切鉴定（A）及重组融合蛋白SDS-PAGE分析（B)
图1 重组质粒酶切鉴定（A）及重组融合蛋白SDS-PAGE分析（B)表1 方阵法确定NS4蛋白包被量与血清稀释度(OD450 nm)Table 1 Determination of NS4 protein coating and serum dilution by square matrix method(OD450 nm) 抗原量/(μg·mL-1)Amount of antigen 阳性血清Positive serum 阴性血清Negative serum 空白对照Blank control 1∶50 1∶100 1∶200 1∶400 1∶50 1∶100 1∶200 1∶400 6.000 0 1.252 3 1.023 5 0.924 5 0.695 4 0.120 9 0.084 1 0.061 2 0.040 9 0.034 2 3.000 0 1.180 8 0.985 2 0.852 9 0.512 9 0.075 7 0.061 4 0.042 9 0.031 9 0.031 9 1.500 0 1.040 8 0.897 6 0.752 6 0.485 6 0.069 8 0.075 4 0.042 8 0.031 4 0.041 8 0.750 0 0.826 4 0.685 6 0.591 7 0.258 9 0.058 7 0.054 7 0.049 2 0.030 6 0.031 4 0.375 0 0.562 4 0.421 6 0.280 1 0.165 9 0.051 6 0.048 7 0.047 6 0.032 8 0.021 0 0.187 5 0.354 8 0.285 6 0.156 3 0.103 9 0.042 1 0.040 3 0.041 3 0.031 0 0.021 3
【参考文献】：
期刊论文
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[2]蓝舌病毒结构与组装机制研究进展[J]. 易华山,赵瑶,马鲜平,王芝英,张德志,李前勇,左福元. 家畜生态学报. 2020(07)
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[4]蓝舌病病毒4型特异性竞争ELISA检测方法的建立[J]. 李佳璇,臧明鑫,谢双羽,姜艳平,崔文,徐义刚,刘敏,乔薪瑗,王丽,周晗,李一经,唐丽杰. 生物工程学报. 2017(08)
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[9]应用套入式聚合酶链反应（Nested-PCR）检测蓝舌病病毒的研究[J]. 马洪超,孙淑芳,陶茂辉,尹燕博,郭福生,龚振华,蔡丽娟,蒋正军,丁有胜,黄运生,陈书琨. 畜牧兽医学报. 2000(02)
本文编号：3453403
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