猪GBP1、GBP2基因的克隆及其对PRRSV和PRV增殖的影响
发布时间：2021-10-23 21:05
干扰素诱导的GBPs又称p65GTPase,属于干扰素诱导的GTPase超家族,是一种重要的干扰素刺激基因（ISGs）。GBPs最早发现于1979年,Gupta发现经IFN-y刺激后,人的成纤维细胞可以产生一种67kDa的蛋白。GBP蛋白与Mx蛋白同属GTPase家族。自1979年被发现以后,后续的研究中陆续发现干扰素诱导的GBPs家族在调控细胞增殖和抵抗病原体感染方面具有重要作用。目前对干扰素诱导的GBPs家族的研究主要集中在人和小鼠上,大量实验证实了干扰素诱导的GBPs家族具有抵抗病毒感染的作用,但具体机制尚不明晰。目前对猪源GBPs生物学功能的研究并不多,仅有猪源GBPs可以显著抑制鼠伤寒沙门氏杆菌增殖的报道,猪源GBPs是否有抑制病毒增殖的作用目前尚无报道。PRRSV和PRV引发的疾病给世界养猪业带来巨大经济损失。本研究以猪源干扰素诱导的鸟苷酸结合蛋白家族中GBP1和GBP2两个成员为研究对象,研究猪GBPs对PRRSV和PRV增殖的影响,以及PRRSV和PRV感染对GBPs表达的影响,主要研究内容如下：1.猪GBP1和GBP2基因的扩增和序列分析从PK-15细胞中克隆了猪GB...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
目录
摘要
Abstract
缩咯语表(Abbreviation)
1 文献综述
1.1 抗病毒天然免疫
1.2 干扰素的抗病毒作用
1.3 干扰素诱导的鸟苷酸结合蛋白家族(GBPs)简介
1.3.1 干扰素诱导的GTPase家族
1.3.2 干扰素诱导的鸟苷酸结合蛋白家族(GBPs)研究现状
1.4 PRRSV简介
1.5 PRV简介
2 研究目的与意义
3 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 菌株、细胞、毒株、载体
3.1.2 主要试剂及试剂盒
3.1.3 其他试剂的配制方法
3.1.4 分子生物学分析软件
3.2 实验方法
3.2.1 PRRSV和PRV的增殖
3.2.2 目的基因的克隆和载体构建
3.2.3 瞬时转染传代细胞
3.2.4 Western Blot检测目的蛋白在真核细胞中的表达
3.2.5 IFA检测目的蛋白的表达及细胞定位
3.2.6 病毒空斑实验
3.2.7 荧光定量
3.2.8 统计学方法
4 结果和分析
4.1 猪GBP1和GBP2基因克隆,鉴定及序列分析
4.1.1 猪GBP1和GBP2基因RT-PCR扩增与克隆
4.1.2 猪GBP1和GBP2基因序列分析
4.2 猪GBP1和GBP2基因的真核表达及Western Blot鉴定分析
4.3 猪GBP1和GBP2蛋白的亚细胞定位
4.4 猪GBP1和GBP2蛋白与PRRSV的相互作用
4.5 猪GBP1和GBP2蛋白与PRV的相互作用
5 讨论与结论
5.1 讨论
5.2 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]高致病性猪蓝耳病病毒（PRRSV）的分子生物学研究进展[J]. 吕春花,马晓艳,美热木古丽. 新疆畜牧业. 2009(05)
[2]DNA的识别分子及其识别模式[J]. 张伟娟,徐洁杰,徐薇,熊思东. 自然科学进展. 2008(06)
[3]猪繁殖与呼吸综合症病毒生物学特性[J]. 韩银涛,苏柏光. 畜牧兽医杂志. 2008(01)
[4]我国伪狂犬病流行现状及新特点[J]. 邓仕伟,汪勇,薛春芳. 动物医学进展. 2006(09)
[5]天然免疫与获得性免疫的进化关系[J]. 刘燕明. 免疫学杂志. 2001(S1)
[6]猪繁殖与呼吸综合征病毒形态学特征[J]. 李成,李六金,谷守林,蔡虹,姜焕宏,赵世君,张海,李秦. 畜牧兽医学报. 2001(06)
[7]猪繁殖与呼吸综合征及其在我国的现状与对策[J]. 蔡雪晖,柴文君,翁长江,刘光清,郭宝清. 中国预防兽医学报. 2000(S1)
[8]PRRS免疫防制面临的困惑与未来[J]. 仇华吉,童光志. 中国兽医学报. 2000(01)
[9]伪狂犬病流行现状及我国应采取的防制措施[J]. 童光志,陈焕春. 中国兽医学报. 1999(01)
[10]从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J]. 郭宝清,陈章水,刘文兴,崔益洙. 中国畜禽传染病. 1996(02)
博士论文
[1]伪狂犬病毒和猪传染性胃肠炎病毒诱导β干扰素产生的分子机制研究[D]. 谢立兰.华中农业大学 2011
[2]MITA介导的细胞抗病毒反应信号转导及其调节机制[D]. 钟波.武汉大学 2010
[3]伪狂犬病毒IE180和EP0基因的表达调控[D]. 郭洪.华中农业大学 2008
硕士论文
[1]猪干扰素刺激基因ISG20的克隆、真核表达及其对PRRSV增殖的影响[D]. 李燕.华中农业大学 2010
本文编号：3453914
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
目录
摘要
Abstract
缩咯语表(Abbreviation)
1 文献综述
1.1 抗病毒天然免疫
1.2 干扰素的抗病毒作用
1.3 干扰素诱导的鸟苷酸结合蛋白家族(GBPs)简介
1.3.1 干扰素诱导的GTPase家族
1.3.2 干扰素诱导的鸟苷酸结合蛋白家族(GBPs)研究现状
1.4 PRRSV简介
1.5 PRV简介
2 研究目的与意义
3 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 菌株、细胞、毒株、载体
3.1.2 主要试剂及试剂盒
3.1.3 其他试剂的配制方法
3.1.4 分子生物学分析软件
3.2 实验方法
3.2.1 PRRSV和PRV的增殖
3.2.2 目的基因的克隆和载体构建
3.2.3 瞬时转染传代细胞
3.2.4 Western Blot检测目的蛋白在真核细胞中的表达
3.2.5 IFA检测目的蛋白的表达及细胞定位
3.2.6 病毒空斑实验
3.2.7 荧光定量
3.2.8 统计学方法
4 结果和分析
4.1 猪GBP1和GBP2基因克隆,鉴定及序列分析
4.1.1 猪GBP1和GBP2基因RT-PCR扩增与克隆
4.1.2 猪GBP1和GBP2基因序列分析
4.2 猪GBP1和GBP2基因的真核表达及Western Blot鉴定分析
4.3 猪GBP1和GBP2蛋白的亚细胞定位
4.4 猪GBP1和GBP2蛋白与PRRSV的相互作用
4.5 猪GBP1和GBP2蛋白与PRV的相互作用
5 讨论与结论
5.1 讨论
5.2 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]高致病性猪蓝耳病病毒（PRRSV）的分子生物学研究进展[J]. 吕春花,马晓艳,美热木古丽. 新疆畜牧业. 2009(05)
[2]DNA的识别分子及其识别模式[J]. 张伟娟,徐洁杰,徐薇,熊思东. 自然科学进展. 2008(06)
[3]猪繁殖与呼吸综合症病毒生物学特性[J]. 韩银涛,苏柏光. 畜牧兽医杂志. 2008(01)
[4]我国伪狂犬病流行现状及新特点[J]. 邓仕伟,汪勇,薛春芳. 动物医学进展. 2006(09)
[5]天然免疫与获得性免疫的进化关系[J]. 刘燕明. 免疫学杂志. 2001(S1)
[6]猪繁殖与呼吸综合征病毒形态学特征[J]. 李成,李六金,谷守林,蔡虹,姜焕宏,赵世君,张海,李秦. 畜牧兽医学报. 2001(06)
[7]猪繁殖与呼吸综合征及其在我国的现状与对策[J]. 蔡雪晖,柴文君,翁长江,刘光清,郭宝清. 中国预防兽医学报. 2000(S1)
[8]PRRS免疫防制面临的困惑与未来[J]. 仇华吉,童光志. 中国兽医学报. 2000(01)
[9]伪狂犬病流行现状及我国应采取的防制措施[J]. 童光志,陈焕春. 中国兽医学报. 1999(01)
[10]从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J]. 郭宝清,陈章水,刘文兴,崔益洙. 中国畜禽传染病. 1996(02)
博士论文
[1]伪狂犬病毒和猪传染性胃肠炎病毒诱导β干扰素产生的分子机制研究[D]. 谢立兰.华中农业大学 2011
[2]MITA介导的细胞抗病毒反应信号转导及其调节机制[D]. 钟波.武汉大学 2010
[3]伪狂犬病毒IE180和EP0基因的表达调控[D]. 郭洪.华中农业大学 2008
硕士论文
[1]猪干扰素刺激基因ISG20的克隆、真核表达及其对PRRSV增殖的影响[D]. 李燕.华中农业大学 2010
本文编号：3453914
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3453914.html
