DHAV-3 VP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
发布时间：2021-10-24 08:13
鸭病毒性肝炎（DVH）是由鸭肝炎病毒（DHV）引起的雏鸭病死率较高的急性、致死性传染病。目前我国流行的DVH病原主要是鸭甲型肝炎病毒（DHAV）,该病毒有3个血清型,分别为DHAV-1,DHAV-2及DHAV-3。在我国主要流行的是DHAV-1和DHAV-3,因为市面上还没有研制成功成品的疫苗,并且国内外都有出现病毒变异株的报道,所以DVH不能得到有效控制,给我国养鸭业带来巨大的损失。本研究利用实验室保存的有His标签pET-30a-VP1-1-221aa质粒为模板,设计无His标签pET-30a-VP1-1-221aa的引物,并利用原核表达系统制备无His标签VP1-1-221aa蛋白作为免疫原,对BALB/c小鼠进行免疫,将骨髓瘤SP2/0细胞与免疫小鼠的脾细胞进行融合,以有His标签VP1-1-221aa蛋白作为检测原,利用建立好的I-ELISA方法进行检测,经过五次亚克隆筛选,结果获得2株（2E11,4F3）能够稳定分泌抗DHAV-3 VP1蛋白的阳性杂交瘤细胞。单抗亚类鉴定的结果显示2E11株单抗为IgG1型,4F3株为IgG2a型,用获得的2株杂交瘤细胞制备单抗腹水并测效价...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
编码无His标签DHAV-3-VP1-1-221aa基因片段的PCR扩增结果
的无 His 标签 Rosetta-pET-30a-VP1 His 标签 Rosetta-pET-30a-VP1-1-2etta-pET-30a-VP1-1-221aa 菌体超声沉s tag Rosetta-pET-30a-VP1-1-221aa b induced by IPTG;3.Without His tag R tag Rosetta-pET-30a-VP1-1-221aa ce His 标签 VP1-1-221aa 重组蛋白sion of VP1-1-221aa recombinan
1:10001:10001:20001:20002.2040.1481.9770.132.100.0941.9210.0981.9060.0711.5220.05510101:40001:40001:80001:80001:160001:160001.0810.0921.9580.1521.5150.1120.7590.071.8560.0971.1770.0760.780.061.250.061.0250.05000000杂交瘤细胞株筛选及亚克隆好的 I-ELISA 方法对细胞上清进行两次检测，并对两次检测均为克隆，经过五次亚克隆筛选后，得到 2 株能够稳定分泌 DHAV-3瘤细胞株，分别命名为 4F3 和 2E11。图 3-6 为显微镜下观察到的以及亚克隆阳性单个细胞团的状态。
【参考文献】：
期刊论文
[1]基因C型鸭甲肝病毒单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[J]. 程方明,张焕容,洪杰,王远微,岳华,汤承. 中国预防兽医学报. 2014(04)
[2]应用RT-PCR方法检测鸭病毒性肝炎新型和I型病毒[J]. 柴顺秀,马花,韩英,赵隆寿. 家畜生态学报. 2013(11)
[3]鸭肝炎病毒分子流行病学分析[J]. 袁率珍,范书才,李虹,姜畔,张兵. 中国预防兽医学报. 2010(11)
[4]鸭甲肝病毒的分子生物学研究进展[J]. 张大丙. 中国兽医杂志. 2010(03)
[5]2007～2009年华南地区鸭肝炎病毒流行病学调查及分离株的VP1基因变异分析[J]. 何冉娅,于淼,张玉玲,张得玉,曹宗喜,张桂红. 中国动物传染病学报. 2010(01)
[6]Ⅰ型鸭肝炎病毒概述[J]. 范卫国,杜佳慧,曹瑞兵,陈溥言. 动物医学进展. 2009(11)
[7]基因C型鸭肝炎病毒的分离和鉴定[J]. 潘梦,付余,王笑言,徐永亮,温纳相,王丽艳,张大丙. 中国兽医杂志. 2009(03)
[8]中药金丝桃素口服液治疗鸭病毒性肝炎的试验研究[J]. 周广生. 中国畜牧兽医. 2008(12)
[9]中药蟾甘口服液对鸭病毒性肝炎的治疗试验[J]. 周广生,刘俊栋. 黑龙江畜牧兽医. 2008(11)
[10]Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立[J]. 程安春,汪铭书,信洪一,陈海军,杨苗,郭宇飞,朱德康,贾仁勇,袁桂萍,陈孝跃. 中国兽医科学. 2007(01)
硕士论文
[1]鸭1型甲肝病毒亚型VP3蛋白间接ELISA方法的建立及其单克隆抗体的制备[D]. 黄剑梅.江西农业大学 2016
[2]同时识别1和3型鸭甲肝病毒的单抗及胶体金试纸条研究[D]. 杨旸.四川农业大学 2016
[3]DHAV-3山东分离株P1基因序列分析及单克隆抗体的制备[D]. 夏琳琳.山东农业大学 2015
[4]鸭甲肝病毒1型和3型VP1蛋白中和性线性抗原表位的精确定位[D]. 张瑞华.山东农业大学 2013
[5]鸭甲肝病毒3型山东分离株的分离鉴定及VP1基因的序列分析[D]. 徐倩.山东农业大学 2013
[6]鸭甲肝病毒1型一个保守的中和性线性B细胞表位的确定[D]. 周国梅.山东农业大学 2012
[7]鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备及ELISA病毒检测方法的建立[D]. 姜畔.中国兽医药品监察所 2011
[8]Ⅰ型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备[D]. 李晓军.中国农业科学院 2011
[9]I型鸭肝炎病毒VP1蛋白的表达纯化及单克隆抗体的制备[D]. 张婷婷.东北农业大学 2011
[10]DHV-Ⅰ单克隆抗体的制备与胶体金试纸条的研制[D]. 辛英豪.山东农业大学 2010
本文编号：3454922
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
编码无His标签DHAV-3-VP1-1-221aa基因片段的PCR扩增结果
的无 His 标签 Rosetta-pET-30a-VP1 His 标签 Rosetta-pET-30a-VP1-1-2etta-pET-30a-VP1-1-221aa 菌体超声沉s tag Rosetta-pET-30a-VP1-1-221aa b induced by IPTG;3.Without His tag R tag Rosetta-pET-30a-VP1-1-221aa ce His 标签 VP1-1-221aa 重组蛋白sion of VP1-1-221aa recombinan
1:10001:10001:20001:20002.2040.1481.9770.132.100.0941.9210.0981.9060.0711.5220.05510101:40001:40001:80001:80001:160001:160001.0810.0921.9580.1521.5150.1120.7590.071.8560.0971.1770.0760.780.061.250.061.0250.05000000杂交瘤细胞株筛选及亚克隆好的 I-ELISA 方法对细胞上清进行两次检测，并对两次检测均为克隆，经过五次亚克隆筛选后，得到 2 株能够稳定分泌 DHAV-3瘤细胞株，分别命名为 4F3 和 2E11。图 3-6 为显微镜下观察到的以及亚克隆阳性单个细胞团的状态。
【参考文献】：
期刊论文
[1]基因C型鸭甲肝病毒单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[J]. 程方明,张焕容,洪杰,王远微,岳华,汤承. 中国预防兽医学报. 2014(04)
[2]应用RT-PCR方法检测鸭病毒性肝炎新型和I型病毒[J]. 柴顺秀,马花,韩英,赵隆寿. 家畜生态学报. 2013(11)
[3]鸭肝炎病毒分子流行病学分析[J]. 袁率珍,范书才,李虹,姜畔,张兵. 中国预防兽医学报. 2010(11)
[4]鸭甲肝病毒的分子生物学研究进展[J]. 张大丙. 中国兽医杂志. 2010(03)
[5]2007～2009年华南地区鸭肝炎病毒流行病学调查及分离株的VP1基因变异分析[J]. 何冉娅,于淼,张玉玲,张得玉,曹宗喜,张桂红. 中国动物传染病学报. 2010(01)
[6]Ⅰ型鸭肝炎病毒概述[J]. 范卫国,杜佳慧,曹瑞兵,陈溥言. 动物医学进展. 2009(11)
[7]基因C型鸭肝炎病毒的分离和鉴定[J]. 潘梦,付余,王笑言,徐永亮,温纳相,王丽艳,张大丙. 中国兽医杂志. 2009(03)
[8]中药金丝桃素口服液治疗鸭病毒性肝炎的试验研究[J]. 周广生. 中国畜牧兽医. 2008(12)
[9]中药蟾甘口服液对鸭病毒性肝炎的治疗试验[J]. 周广生,刘俊栋. 黑龙江畜牧兽医. 2008(11)
[10]Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立[J]. 程安春,汪铭书,信洪一,陈海军,杨苗,郭宇飞,朱德康,贾仁勇,袁桂萍,陈孝跃. 中国兽医科学. 2007(01)
硕士论文
[1]鸭1型甲肝病毒亚型VP3蛋白间接ELISA方法的建立及其单克隆抗体的制备[D]. 黄剑梅.江西农业大学 2016
[2]同时识别1和3型鸭甲肝病毒的单抗及胶体金试纸条研究[D]. 杨旸.四川农业大学 2016
[3]DHAV-3山东分离株P1基因序列分析及单克隆抗体的制备[D]. 夏琳琳.山东农业大学 2015
[4]鸭甲肝病毒1型和3型VP1蛋白中和性线性抗原表位的精确定位[D]. 张瑞华.山东农业大学 2013
[5]鸭甲肝病毒3型山东分离株的分离鉴定及VP1基因的序列分析[D]. 徐倩.山东农业大学 2013
[6]鸭甲肝病毒1型一个保守的中和性线性B细胞表位的确定[D]. 周国梅.山东农业大学 2012
[7]鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备及ELISA病毒检测方法的建立[D]. 姜畔.中国兽医药品监察所 2011
[8]Ⅰ型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备[D]. 李晓军.中国农业科学院 2011
[9]I型鸭肝炎病毒VP1蛋白的表达纯化及单克隆抗体的制备[D]. 张婷婷.东北农业大学 2011
[10]DHV-Ⅰ单克隆抗体的制备与胶体金试纸条的研制[D]. 辛英豪.山东农业大学 2010
本文编号：3454922
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