滩羊肌内前体脂肪细胞的分离培养及分化相关基因的表达规律研究

发布时间：2021-10-25 11:46

　　研究旨在建立滩羊肌内前体脂肪细胞的体外培养体系,并探讨其在诱导分化过程中成脂关键基因的表达规律。采集10日龄滩羊背最长肌组织,用Ⅱ型胶原酶消化分离肌内前体脂肪细胞,进行细胞的原代、传代培养和形态学观察,继而对获得的细胞进行诱导分化和油红O染色鉴定。同时,采用qRT-PCR检测参与前体脂肪细胞成脂分化的关键基因PPARγ、C/EBPα、FAS、aP2、LPL mRNA在诱导第0、2、4、6、8 d的表达水平变化。结果表明:（1）滩羊原代肌内前体脂肪细胞在分离后约4 h时开始贴壁,贴壁的细胞呈现为小梭形与不规则三角形。经过传代后,细胞成分均一并且贴壁良好,呈现成纤维细胞样形态;细胞传代第2～6 d为指数生长期,其生长曲线近似"S"形;（2）细胞诱导分化第8天时,油红O染色呈红色,细胞具有前体脂肪细胞的典型特征;（3）PPARγ和FAS的表达水平在第6天时最高,随着诱导时间增长PPARγ表达先升高后降低,FAS表达先降低后升高再降低;C/EBPα、aP2和LPL的表达量在第4 d最高,随着诱导分化时间增长,C/EBPα和LPL表达先升高后降低,aP2表达先升高后降低再升高。 

【文章来源】：家畜生态学报. 2020,41(11)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验动物与主要试剂
    1.2 滩羊肌内前体脂肪细胞分离培养
    1.3 滩羊肌内前体脂肪细胞传代培养
    1.4 滩羊肌内前体脂肪细胞生长曲线的测定
    1.5 滩羊肌内前体脂肪细胞诱导分化
    1.6 油红O染色鉴定及脂肪含量的测定
    1.7 引物设计及合成
    1.8 实时荧光定量PCR
    1.9 数据处理
2 结果与分析
    2.1 前体脂肪细胞的形态学观察
    2.2 诱导分化及油红O染色鉴定
    2.3 生长曲线
    2.4 脂肪含量测定
    2.5 脂肪相关基因表达检测
3 讨 论
    3.1 肌内前体脂肪细胞分离培养
    3.2 肌内前体脂肪细胞生长曲线
    3.3 肌内前体脂肪细胞的诱导分化及鉴定
    3.4 肌内前体脂肪细胞成脂分化关键基因时序表达
4 结 论


【参考文献】：
期刊论文
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[3]猪肌源性前体脂肪细胞的分离培养和成脂诱导分化研究[J]. 张宁芳,成志敏,乐宝玉,秦本源,王媛媛,王鹤洁,高鹏飞,郭晓红,李步高,曹果清.  畜牧兽医学报. 2018(12)
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[7]从江香猪肌内和皮下脂肪前体细胞分化过程中相关基因的表达[J]. 孙成娟,许厚强,赵佳福,陈伟,周迪,张青青.  农业生物技术学报. 2017(12)
[8]微载体浓度与细胞接种密度对ST细胞生长的影响[J]. 陈以衡,陶姝宇,刘旭平,谭文松.  生物技术通报. 2016(04)



本文编号：3457332