GGTA1、GGTA1/β4GalNT2不同基因型敲除猪免疫原性检测
发布时间：2021-10-25 12:00
免疫排斥反应是限制异种器官移植的主要因素,本研究以获得α-1,3-半乳糖基转移酶基因（α-1,3-galactosyltransferase, GGTA1）敲除的巴马小型猪（Sus scrofa）和GGTA1、β1,4 N-乙酰半乳糖胺转移酶（β1, 4N-acetylgalactosaminyl transferase,β4GalNT2）双基因敲除的巴马小型猪为基础,筛选低免疫原性群体。通过分离获得的不同基因型猪外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）与过异硫氰酸荧光素标记的植物凝集素（fluorescein isothiocyanate-griffonia simplicifolia isolectin B4, FITC-GSIB4）和双花扁豆凝集素（fluorescein isothiocyanate conjugated Dolichos bliflorus agglutinin, FITC-DBA）共孵育,检测GGTA1基因和β4GalNT2基因的表达情况;检测血液生理、生化指标,评估GGTA1/β4GalNT2双基因敲...
【文章来源】：农业生物技术学报. 2020,28(09)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
荧光显微镜下不同类型细胞GSIB4染色结果(Bar=100μm)
荧光显微镜下不同类型细胞DBA染色结果(Bar=100μm)
ABO人血型系统血清共孵育实验中不同血型血清与基因修饰猪PBMC孵育结果发现AB型血清的Ig G结合量最低，AB型血清排除了抗A、抗B凝集素的影响，说明异种器官移植实验适合用于AB血型受体，后续血清孵育实验使用AB血型血清可以进一步排除凝集素的影响因素；相比A、B型血清，O型血清Ig G结合量降低，可能受到猪的AO血型系统的影响和人O型血清中抗A、抗B凝集素的影响，在后续的相关实验中O型血清不适用于血清孵育实验(Yamamoto et al.,2001;PadlerKaravani,Varki,2011;Dall"Olio et al.,2014)。人的AB型血清共孵育实验发现WT巴马猪Ig G结合量最高，说明WT巴马猪作为异种器官移植供体排斥剧烈，免疫原性高；通过基因编辑后GGTA1/β-4Gal NT2双基因敲除的巴马猪Ig G结合量显著下降，相关研究报道了β4Gal NT2基因敲除免疫原性进一步降低，可能存在杂合敲除猪的免疫原性进一步降低的现象(Serafini-Cessi et al.,1986;Dall"Olio et al.,2014;Zhang et al.,2018;Byrne et al.,2018;Takahiro et al.,2019)。但本研究中存在基因敲除样本量少、不同巴马猪的免疫原性个体差异和巴马小型猪AO血型系统等因素的影响，后续应继续扩大样本量和针对不同巴马小型猪的血型系统进行相关研究。图4 不同血型的平均免疫荧光强度
【参考文献】：
期刊论文
[1]GGTA1/β4GalNT2双基因敲除近交系五指山小型猪的建立[J]. 李楚,任雪洋,李琳,厉小雪,金永,张曼玲,刘晓蕊,熊强,张立宁,王盈,李荣凤,杨海元,冯书堂,戴一凡. 南京医科大学学报(自然科学版). 2019(06)
[2]异种器官移植免疫生物学研究进展[J]. 宋宗培,郭蝶,蔡志明,牟丽莎. 器官移植. 2018(03)
[3]猪肺异种移植的研究进展与发展方向[J]. 周明,邓阳阳,戴一凡,蔡志明,牟丽莎. 器官移植. 2017(06)
[4]CRISPR/Cas9介导的β4GalNT2基因敲除猪制备[J]. 唐雨婷,高景波,龙川,杜敏杰,黄林华,潘登科,杜晓华. 农业生物技术学报. 2017(10)
[5]神经细胞异种移植的研究进展[J]. 张青,周翠冰,戴一凡,蔡志明,牟丽莎. 器官移植. 2017(04)
[6]绿色荧光蛋白在α-1,3半乳糖基转移酶敲除猪组织器官的表达分析[J]. 李智方,冯冲,纪慧丽,石宁宁,宋小凤,赵勤丽,龙川,潘登科,杨小淦. 遗传. 2015(12)
[7]基因修饰猪作为异种器官移植供体的研究进展[J]. 李文玲,鲍磊,肖磊. 中国细胞生物学学报. 2014(09)
[8]猪体外受精胚胎、孤雌激活胚胎以及体细胞核移植胚胎的体外培养[J]. 张运海,潘登科,孙国杰,孙秀柱,李燕,戴蕴平,李宁. 中国农业科学. 2007(03)
[9]异种器官移植的研究进展[J]. 胡岩松,袁彦平. 实验动物科学与管理. 2001(03)
本文编号：3457357
【文章来源】：农业生物技术学报. 2020,28(09)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
荧光显微镜下不同类型细胞GSIB4染色结果(Bar=100μm)
荧光显微镜下不同类型细胞DBA染色结果(Bar=100μm)
ABO人血型系统血清共孵育实验中不同血型血清与基因修饰猪PBMC孵育结果发现AB型血清的Ig G结合量最低，AB型血清排除了抗A、抗B凝集素的影响，说明异种器官移植实验适合用于AB血型受体，后续血清孵育实验使用AB血型血清可以进一步排除凝集素的影响因素；相比A、B型血清，O型血清Ig G结合量降低，可能受到猪的AO血型系统的影响和人O型血清中抗A、抗B凝集素的影响，在后续的相关实验中O型血清不适用于血清孵育实验(Yamamoto et al.,2001;PadlerKaravani,Varki,2011;Dall"Olio et al.,2014)。人的AB型血清共孵育实验发现WT巴马猪Ig G结合量最高，说明WT巴马猪作为异种器官移植供体排斥剧烈，免疫原性高；通过基因编辑后GGTA1/β-4Gal NT2双基因敲除的巴马猪Ig G结合量显著下降，相关研究报道了β4Gal NT2基因敲除免疫原性进一步降低，可能存在杂合敲除猪的免疫原性进一步降低的现象(Serafini-Cessi et al.,1986;Dall"Olio et al.,2014;Zhang et al.,2018;Byrne et al.,2018;Takahiro et al.,2019)。但本研究中存在基因敲除样本量少、不同巴马猪的免疫原性个体差异和巴马小型猪AO血型系统等因素的影响，后续应继续扩大样本量和针对不同巴马小型猪的血型系统进行相关研究。图4 不同血型的平均免疫荧光强度
【参考文献】：
期刊论文
[1]GGTA1/β4GalNT2双基因敲除近交系五指山小型猪的建立[J]. 李楚,任雪洋,李琳,厉小雪,金永,张曼玲,刘晓蕊,熊强,张立宁,王盈,李荣凤,杨海元,冯书堂,戴一凡. 南京医科大学学报(自然科学版). 2019(06)
[2]异种器官移植免疫生物学研究进展[J]. 宋宗培,郭蝶,蔡志明,牟丽莎. 器官移植. 2018(03)
[3]猪肺异种移植的研究进展与发展方向[J]. 周明,邓阳阳,戴一凡,蔡志明,牟丽莎. 器官移植. 2017(06)
[4]CRISPR/Cas9介导的β4GalNT2基因敲除猪制备[J]. 唐雨婷,高景波,龙川,杜敏杰,黄林华,潘登科,杜晓华. 农业生物技术学报. 2017(10)
[5]神经细胞异种移植的研究进展[J]. 张青,周翠冰,戴一凡,蔡志明,牟丽莎. 器官移植. 2017(04)
[6]绿色荧光蛋白在α-1,3半乳糖基转移酶敲除猪组织器官的表达分析[J]. 李智方,冯冲,纪慧丽,石宁宁,宋小凤,赵勤丽,龙川,潘登科,杨小淦. 遗传. 2015(12)
[7]基因修饰猪作为异种器官移植供体的研究进展[J]. 李文玲,鲍磊,肖磊. 中国细胞生物学学报. 2014(09)
[8]猪体外受精胚胎、孤雌激活胚胎以及体细胞核移植胚胎的体外培养[J]. 张运海,潘登科,孙国杰,孙秀柱,李燕,戴蕴平,李宁. 中国农业科学. 2007(03)
[9]异种器官移植的研究进展[J]. 胡岩松,袁彦平. 实验动物科学与管理. 2001(03)
本文编号：3457357
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