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基于QIAxcel电泳系统的鼠传疾病多病原检测方法的建立、评估和应用

发布时间:2021-10-25 15:23
  背景鼠传疾病是一类由鼠或鼠体寄生虫传播引起的危害人畜健康的重要传染病。鼠类能给人畜传播多种细菌、病毒、病原虫和立克次体等病原体,造成巨大的经济损失和安全隐患。及时准确地检测、鉴定病原体是鼠传疾病疫情防治的关键。传统检测方法如分离培养法、血清学检测法等检测通量小,灵敏度低,而以实时荧光定量PCR法(Real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR)和基因芯片法为代表的核酸分子检测技术虽然提高了检测灵敏度,实现了多重病原检测,但qPCR法因报告基因光谱重叠限制了被检病原种类数;基因芯片法价格昂贵,操作复杂,不利于推广使用。因此,急需建立一种灵敏、简便、高通量的鼠传病原体检测方法。目的本研究旨在建立一种基于QIAxcel毛细管电泳系统的鼠传疾病病原体多重PCR检测方法,将实现在单管中同时检测恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)、嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum,Ap)、莫氏立克次体(Rickettsia typhi,Rt)、土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis,F... 

【文章来源】:山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】:70 页

【学位级别】:硕士

【文章目录】:
摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 文献综述 鼠传疾病检测技术研究现状
    1. 鼠传疾病流行概况
    2. 实验室检测技术
        2.1. 分离培养法
        2.2. 血清学检测法
        2.3. 核酸分子检测技术
第二章 多重PCR检测体系的建立与优化
    1. 引言
        1.1. 研究目的与意义
        1.2. 研究内容及技术路线
    2. 实验材料
        2.1. 质粒与菌株核酸
        2.2. 实验引物
        2.3. 实验试剂
        2.4. 实验软件
        2.5. 实验仪器
    3. 实验方法
        3.1. 筛选特异基因
        3.2. 引物设计与验证
        3.3. 单重PCR检测体系的建立
        3.4. 多重PCR检测体系的建立与优化
        3.5. 多重PCR检测体系特异性检测
        3.6. 多重PCR检测体系灵敏度检测
    4. 结果
        4.1. 特异基因筛选
        4.2. 引物设计与验证
        4.3. 多重PCR检测体系的建立与优化
        4.4. 多重PCR检测体系特异性检测
        4.5. 多重PCR检测体系灵敏度检测
    5. 讨论
第三章 多重PCR检测体系的初步应用
    1. 引言
    2. 模拟样品的检测
        2.1. 实验材料
        2.2. 实验方法
        2.3. 结果
    3. 野外鼠脾样品的检测
        3.1. 实验材料
        3.2. 实验方法
        3.3. 结果
    4. 讨论
总结
附录1
附录2
参考文献
致谢
学位论文评阅及答辩情况表


【参考文献】:
期刊论文
[1]广西地区部分口岸鼠传疾病病原体调查[J]. 叶海波,万道正,许佳,云小云,张晓龙,覃凤葵,陈健超,方勇,姚李四.  中国媒介生物学及控制杂志. 2017(04)
[2]安徽地区家畜嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因检测和序列分析[J]. 史永林,王誓闻,胡万富,张永根,刘红,曹明华,张丽娟.  安徽预防医学杂志. 2013(05)
[3]9种蜱媒病原体xMAP悬浮芯片高通量检测方法的建立[J]. 王旺,杨宇,王静,赵婷婷,孙肖红,刘丽娟.  中国媒介生物学及控制杂志. 2013(05)
[4]犬钩端螺旋体病及其防控措施[J]. 齐海霞,张海云,张宛婧,唐艳荣,郭睿,王萌.  中国畜牧兽医文摘. 2013(09)
[5]2008—2011年北京市平谷区恙虫病流行病学分析[J]. 张立芹,丁连革,窦向峰,孙瑛,田丽丽,薛慧,刘志强.  职业与健康. 2013(18)
[6]Q热贝纳柯克斯体SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 贾广乐,王晓楠,廖娟红,林祥梅.  中国畜牧兽医. 2013(07)
[7]北京市门头沟区小型兽类群落构成及鼠疫监测[J]. 李龙建,曹殿起,刘英,褚民尉,刘喜房,徐艳广.  中国媒介生物学及控制杂志. 2013(03)
[8]新型液相芯片复合检测5种鼠传病原体方法的建立[J]. 王旺,杨宇,王静,赵婷婷.  中国国境卫生检疫杂志. 2013(02)
[9]TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测恙虫病东方体方法的建立[J]. 付秀萍,贺金荣,张景山,王景泉.  中国媒介生物学及控制杂志. 2012(02)
[10]鼠传播疾病及鼠类的防制概述[J]. 赵玉强,程鹏,公茂庆,侯博文.  中国病原生物学杂志. 2010(05)

硕士论文
[1]七种立克次体甄别检测基因芯片的研制[D]. 李灵云.河南中医学院 2015



本文编号:3457677

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