猪脑心肌炎病毒2A蛋白的原核表达与纯化

发布时间：2021-10-25 16:10

　　本试验对猪脑心肌炎病毒（encephalomyocarditis virus,EMCV）2A蛋白进行原核表达和纯化。采用大肠杆菌原核表达系统,将EMCV 2A基因插入原核表达载体pET-28a-sumo中构建重组原核表达质粒pET28a-EMCV-2A,经PCR和测序鉴定无误。将重组原核表达质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,超声破碎后,2A蛋白的表达主要以包涵体形式存在。通过优化蛋白表达条件,使目的蛋白能够实现可溶性表达。利用磁珠纯化方法对重组蛋白进行纯化,并以SDS-PAGE和Western blotting进行双重鉴定。结果显示,本试验成功构建2A的重组表达质粒;重组蛋白分子质量约为25 ku,与预期大小一致;IPTG浓度1.0 mmol/L、16℃低温诱导16 h为最佳诱导条件,约有50%的蛋白呈现可溶性表达;纯化后获得2A重组蛋白。本试验通过对EMCV 2A蛋白的原核表达及纯化,成功获得纯度较高的EMCV 2A蛋白,为进一步阐明EMCV的分子致病机制以及研发基因疫苗和抗病毒药物奠定基础。 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(11)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

2A蛋白纯化结果

将抗His-tag抗体作为一抗,HRP标记山羊抗小鼠IgG作为二抗,对纯化2A蛋白进行Western blotting分析。在检测结果中25 ku处出现目的条带,空载体对照无蛋白条带(图7)。3 讨 论

PCR鉴定构建的pET28a-EMCV-2A重组质粒,经1.5%琼脂糖凝胶电泳,在471 bp处出现目的基因条带(图1),与预期基因片段大小相符。2.2 诱导表达与可溶性分析


本文编号：3457748