火鸡组织滴虫荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

发布时间：2021-10-26 01:48

　　为建立火鸡组织滴虫的检测方法,本研究采用PCR扩增火鸡组织滴虫的18S rRNA基因片段,构建质粒标准品作为模板,建立火鸡组织滴虫的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,并进行了初步临床应用。结果显示:所建立的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法Cq值与质粒标准品在4.6×10⁶拷贝/μL～4.6×10¹⁰拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9939,斜率为-3.32;该方法对弓形虫、柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、犬巴贝斯虫等常见原虫基因组DNA无扩增,对质粒标准品的检测下限可达4.6×10²拷贝/μL,组内和组间变异系数分别为0.09%～0.33%和0.08%～0.21%,敏感性、特异性和重复性均较好。该方法对147份临床疑似火鸡组织滴虫感染样品的虫体总检出率高于普通PCR方法,其中对靶器官肝脏和盲肠的检出率（71.4%、66.7%）明显高于普通PCR方法的检出率（57.1%、52.4%）。本研究建立的火鸡组织滴虫SYBR Green I荧光定量PCR检测方法为临床开展组织滴虫病的诊断... 

【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(10)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

重组质粒的酶切鉴定结果

根据检测结果建立荧光定量PCR的标准曲线（图2A）与熔解曲线（图2B）。结果显示当质粒浓度为4.6×106拷贝/μL～4.6×1010拷贝/μL时，其与Cq值的线性关系最佳（图2）。Cq值和标准品拷贝数（q）之间的线性关系表达式：Cq=-3.32log10(q)+58.19,R2=0.9939,Error=0.369,E=2.001。2.4 特异性试验结果

特异性试验结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]黄羽肉鸡实验性感染火鸡组织滴虫后体内虫体的动态分布[J]. 孔令明,禚振男,郭平,曲昌宝,王子静,刘丹丹,陶建平,许金俊.  中国预防兽医学报. 2019(07)
[2]组织滴虫病诊断技术的研究进展[J]. 曲昌宝,刘聪,郭平,李聪,张祖航,陶建平,许金俊.  中国病原生物学杂志. 2013(04)
[3]鸡组织滴虫病PCR病原学诊断方法的建立[J]. 曲昌宝,王尚尚,侯照峰,宿世杰,刘丹丹,曹李琴,陶建平,许金俊.  中国预防兽医学报. 2013(02)

硕士论文
[1]禽组织滴虫病流行病学调查及其分子生物学诊断方法的建立与应用[D]. 曲昌宝.扬州大学 2014



本文编号：3458585