绒山羊绒毛周期相关microRNA及其靶基因的研究

发布时间：2021-10-27 01:43

　　内蒙古绒山羊是自治区地方优质资源品种,绒毛生产性能是内蒙古绒山羊的重要经济性状。影响绒毛生长的因素有很多,而褪黑激素、miRNA是其中两个非常重要的因素。近年来,关于褪黑激素影响绒山羊绒毛生长的研究发现,持续埋植褪黑素可促进羊绒提前进入生长期,诱发2次生绒并在分子水平改变了很多绒毛生长相关基因的表达,而对于mi RNA这一重要毛发生长调控因子的研究未见详细报道。因此,本研究以mi RNA为介导,通过microRNA靶基因指纹图谱、实时荧光定量PCR、RNA-seq等试验手段,建立外源褪黑激素、miRNA及其靶基因的关系,进一步从分子水平上的解析褪黑激素促进绒毛生长的机理,为提高绒毛产量和品质提供理论依据。主要研究结果如下：1、microRNA靶基因指纹图谱（MTFP）方法的建立建立了一种实验性获得miRNA靶基因的新方法（microRNA Targets Finger Print, MTFP）。该方法在设定上游种子序列的互补序列和下游锚定序列的基础上添加特殊接头,通过反转录和特殊二步PCR将microRNA的靶基因扩增；扩增后的microRNA靶基因在聚丙烯酰胺凝胶电泳中检测其片段大小... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：128 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 引言
    1.1 皮肤及毛囊的结构组成
        1.1.1 皮肤的结构组成
        1.1.2 毛囊的结构组成
    1.2 毛囊形态发生及周期性生长
        1.2.1 毛囊形态发生
        1.2.2 毛囊周期性生长
    1.3 影响皮肤毛囊发育的因素
        1.3.1 褪黑激素(Melatonin,MT)
        1.3.2 microRNA与动物皮毛发育
        1.3.3 microRNA靶基因的研究
    1.4 本研究目的和意义
2 研究一 microRNA靶基因指纹图谱(MTFP)方法的建立
    2.1 引言
    2.2 试验技术路线
    2.3 材料和方法
        2.3.1 材料
        2.3.2 方法
    2.4 结果与分析
        2.4.1 miR-203革巴基因检测
        2.4.2 皮肤样品miR-203靶基因的检测分析
        2.4.3 序列比对
        2.4.4 实时定量结果
    2.5 讨论
    2.6 小结
3 研究二 褪黑激素影响miRNA及其靶基因的研究
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 结果与分析
        3.3.1 血液中MT的变化
        3.3.2 皮肤组织总RNA及小RNA提取
        3.3.3 miRNA荧光定量体系的建立
        3.3.4 荧光定量PCR产物的检测
        3.3.5 绒毛生长相关miRNA在不同试验皮肤组织中的表达
        3.3.6 埋植组和对照组内各miRNA相关性变化
        3.3.7 miRNA靶基因电泳检测结果
        3.3.8 miRNA靶基因测序结果
    3.4 讨论
    3.5 小结
4 研究三 埋植组与对照组10月皮肤组织转录组文库构建及测序分析
    4.1 引言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 试验材料
        4.2.2 试验方法
    4.3 结果与分析
        4.3.1 cDNA文库质检结果
        4.3.2 RNA-Seq测序结果,de novo组装
        4.3.3 差异表达序列的筛选
        4.3.4 绒毛相关4个pathway在10月埋植组与对照组表达情况
        4.3.5 差异基因的GO、KEGG富集分析
    4.4 讨论
    4.5 小结
5 研究四 褪黑激素介导miRNA靶基因的研究
    5.1 引言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 试验数据及软件
        5.2.2 方法
    5.3 结果与分析
        5.3.1 miRNA靶基因预测结果
        5.3.2 候选miRNA靶基因
    5.4 讨论
    5.5 小结
6 总体结论
致谢
参考文献
附图
附表
附录
作者简介



本文编号：3460621