梅花鹿PDGFA基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达
发布时间：2021-10-28 21:18
血小板衍生生长因子A（PDGFA）为血小板衍生生长因子之一,可由多种细胞产生。其可与细胞膜表面高度特异受体PDGFRA结合,从而激活PDGF/PDGFR通路,发挥相应的生物学效应。现有研究表明PDGFA蛋白在多种癌细胞的增殖和迁移过程中起重要作用。鹿茸的快速生长和再生是自然界绝无仅有的,也因此成为理想的再生生物学研究对象。对它快速增殖的研究也可能成为临床治疗肿瘤的新切入点。本研究根据Genbank中牛的基因序列,设计了梅花鹿PDGFA基因的同源引物,并在引物两端分别加入酶切位点（HindⅢ、BamH Ⅰ）。采用RT-PCR技术获得了梅花鹿鹿茸组织PDGFA基因cDNA序列,通过对测序结果分析发现,获得的PDGFA基因cDNA序列长663bp,编码196个氨基酸。经对比发现梅花鹿PDGFA蛋白与白尾鹿、家牛、山羊同源性较高,分别为98%、97%、96%,证明成功克隆了梅花鹿的PDGFA基因。本试验构建pEGFP-C1-PDGFA重组质粒,用pEGFP-C1-PDGFA真核表达载和pEGFP-C1空载体分别瞬时转染293T细胞,并在荧光显微镜下观察,可见大量绿色荧光,转染效率为60%-70...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]雌雄驯鹿茸顶端茸皮组织PDGFA基因克隆及表达分析[J]. 韩磊,韩若冰,王强辉,翟健程,李和平. 黑龙江畜牧兽医. 2020(01)
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[3]脂质体和慢病毒介导P75神经生长因子受体及神经生长因子转染骨髓间充质干细胞的效果比较[J]. 朱伦井,贝朝涌,段江涛,彭称飞,马跃刚,王宁,陈俊毅. 中国组织工程研究. 2019(21)
[4]MAPK/ERK信号通路参与褪黑素对阿尔茨海默病大鼠小脑的神经保护作用[J]. 刘亭,毕竟,王盼,任丽莉,张露允,隋汝波. 中国药理学通报. 2019(03)
[5]Twist通过ERK通路对体外鼻咽癌细胞血管生成的影响[J]. 孙旭鸯,陈湧. 中国病理生理杂志. 2019(02)
[6]活血散结方药物血浆对PDGF干预下兔视网膜色素上皮细胞增殖相关因子及ERK1/2信号转导通路的影响[J]. 刘晓清,彭俊,张又玮,谭涵宇,李建超,吴权龙,彭清华. 中国中医药信息杂志. 2019(02)
[7]介导疼痛中枢敏化探讨安肠汤对肝郁脾虚型IBS-D大鼠pPKCγ和ERK1在脊髓背角表达[J]. 黄适,王松,林福旭,刘鹏,林春李,雷力民,赵海燕,黄婷. 中华中医药学刊. 2019(02)
[8]脂质体介导转染犬肾上皮细胞的方法改进与优化[J]. 柴百惠,绳秀珍,唐小千,邢婧,战文斌. 中国海洋大学学报(自然科学版). 2018(S2)
[9]半夏泻心汤对PLGC大鼠胃黏膜P13k/Akt/m TOR通路的影响及其防治研究[J]. 彭雪靖,刘洁. 湖南中医杂志. 2018(10)
[10]东北狍PDGFA基因cDNA克隆及表达分析[J]. 崔薇,苗震,张强,高悦禹,夏彦玲. 黑龙江畜牧兽医. 2018(19)
博士论文
[1]Shc3通过激活MEK/ERK影响肝细胞肝癌增殖和转移的研究[D]. 刘赟.天津医科大学 2018
[2]TRPC3调控PLCγ/PKC/CPI-17信号通路在感染性早产中的作用及机制研究[D]. 陈静.中国医科大学 2018
[3]SC99通过Syk/STAT3/PLCγ2信号通路抑制血小板聚集的实验研究[D]. 徐耑.苏州大学 2017
[4]vMIP-ⅡN端肽靶向PDGFRα逆转乳腺癌EMT的机制研究[D]. 杨清玲.中国科学技术大学 2017
[5]PDGFRα在人黑素细胞氧化应激损伤中的作用和机制研究[D]. 黄也.第四军医大学 2015
[6]细胞内钙信号对与肿瘤转移相关的Cav1,Pdgfb以及Ptgs2表达调控的研究[D]. 阳晓艳.沈阳药科大学 2013
[7]梅花鹿生茸区骨膜及角柄骨膜在鹿茸生长发育中作用的研究[D]. 高志光.中国农业科学院 2009
硕士论文
[1]三七总皂苷对阿尔茨海默病氧化应激PI3K/Akt和PLCγ1/PKC信号通路的影响研究[D]. 田新.广西中医药大学 2016
[2]血管生成素及其受体在梅花鹿茸角中的表达与调节[D]. 张璐.吉林大学 2012
[3]乌司他丁和泰索帝对人乳腺癌增殖、侵袭、凋亡及PAFR、PDGFA、IGF-1R表达的影响[D]. 王宏.重庆医科大学 2011
[4]从基因芯片结果中筛选鼻咽癌信号转导相关基因及初步验证[D]. 龚辉成.广州医学院 2009
本文编号：3463359
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?ＰＤＧＦＡ基因信号通路??Ｆｉｇ?１－１?ＰＤＧＦＡ?ｇｅｎｅ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ??
?东北林业大学硕士学位论文???３结果与分析??３．１梅花鹿鹿茸组织总ＲＮＡ提取结果??提娶纯化鹿茸尖端组织总ＲＮＡ后，对ＲＮＡ样品进行检测。结果显示（见图３－??１），２８Ｓ和１８Ｓ条带明亮清晰，２８ｓ亮度更高，测量产物ＯＤ２６〇／２８〇值，结果均在１．８－２．０??之间，综上，证明鹿茸尖端组织总ＲＮＡ提取产物质量较好可以使用。??图３－１总ＲＮＡ的１％琼脂糖凝胶电泳结果??Ｆｉｇ．３－１?Ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?１％?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??３．２梅花鹿ＰＤＧＦＡ基因克隆及酶切鉴定??３．２．１?ＰＤＧＦＡ基因扩增与克隆??１％琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，结果见图３－２，在５００ｂｐ－７５０ｂｐ之间发现明亮条??带，与对目的片段的预期大小相符。使用ＰＭＤ１８－Ｔ载体连接纯化回收后的目的片段，??转化至感受态细胞中大量克隆，阳性ＰＣＲ检测菌液，菌液ＰＣＲ扩増产物电泳结果显示??条带大小与预期相符（见图３－３），与ＰＣＲ扩增产物大小相同，成功获得大量目的片??段。选择菌液ＰＣＲ条带清晰，明亮的菌液，送往生物公司测序。??Ｍ?１??獅■??１麵｜：…麵義??：斷“??ａ?ｓｏ?１１—??图３－２?ＰＤＧＦＡ基因扩增产物??Ｍ：?ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＰＤＧＦＡ?基因扩增产物??Ｆｉｇ．３－２?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＰＤＧＦＡ?ｇｅｎｅ??Ｍ：?ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１?：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＰＤＧＦＡ?ｇｅｎｅ??－１８－??
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【参考文献】：
期刊论文
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[5]Twist通过ERK通路对体外鼻咽癌细胞血管生成的影响[J]. 孙旭鸯,陈湧. 中国病理生理杂志. 2019(02)
[6]活血散结方药物血浆对PDGF干预下兔视网膜色素上皮细胞增殖相关因子及ERK1/2信号转导通路的影响[J]. 刘晓清,彭俊,张又玮,谭涵宇,李建超,吴权龙,彭清华. 中国中医药信息杂志. 2019(02)
[7]介导疼痛中枢敏化探讨安肠汤对肝郁脾虚型IBS-D大鼠pPKCγ和ERK1在脊髓背角表达[J]. 黄适,王松,林福旭,刘鹏,林春李,雷力民,赵海燕,黄婷. 中华中医药学刊. 2019(02)
[8]脂质体介导转染犬肾上皮细胞的方法改进与优化[J]. 柴百惠,绳秀珍,唐小千,邢婧,战文斌. 中国海洋大学学报(自然科学版). 2018(S2)
[9]半夏泻心汤对PLGC大鼠胃黏膜P13k/Akt/m TOR通路的影响及其防治研究[J]. 彭雪靖,刘洁. 湖南中医杂志. 2018(10)
[10]东北狍PDGFA基因cDNA克隆及表达分析[J]. 崔薇,苗震,张强,高悦禹,夏彦玲. 黑龙江畜牧兽医. 2018(19)
博士论文
[1]Shc3通过激活MEK/ERK影响肝细胞肝癌增殖和转移的研究[D]. 刘赟.天津医科大学 2018
[2]TRPC3调控PLCγ/PKC/CPI-17信号通路在感染性早产中的作用及机制研究[D]. 陈静.中国医科大学 2018
[3]SC99通过Syk/STAT3/PLCγ2信号通路抑制血小板聚集的实验研究[D]. 徐耑.苏州大学 2017
[4]vMIP-ⅡN端肽靶向PDGFRα逆转乳腺癌EMT的机制研究[D]. 杨清玲.中国科学技术大学 2017
[5]PDGFRα在人黑素细胞氧化应激损伤中的作用和机制研究[D]. 黄也.第四军医大学 2015
[6]细胞内钙信号对与肿瘤转移相关的Cav1,Pdgfb以及Ptgs2表达调控的研究[D]. 阳晓艳.沈阳药科大学 2013
[7]梅花鹿生茸区骨膜及角柄骨膜在鹿茸生长发育中作用的研究[D]. 高志光.中国农业科学院 2009
硕士论文
[1]三七总皂苷对阿尔茨海默病氧化应激PI3K/Akt和PLCγ1/PKC信号通路的影响研究[D]. 田新.广西中医药大学 2016
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[3]乌司他丁和泰索帝对人乳腺癌增殖、侵袭、凋亡及PAFR、PDGFA、IGF-1R表达的影响[D]. 王宏.重庆医科大学 2011
[4]从基因芯片结果中筛选鼻咽癌信号转导相关基因及初步验证[D]. 龚辉成.广州医学院 2009
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