不同宿主来源的ORFV免疫相关基因的比较分析
发布时间：2021-10-28 21:36
试验旨在探究ORFV在强弱毒株与骆驼之间其免疫相关基因所表现出的差异变化。通过对采集到的青岛某发病羊场病料（强毒）,在山羊成纤维细胞上连续传90代毒株以及从阿拉善某发病双峰驼采集到的病料分别进行病毒基因组提取,并对提取到的基因组分别命名为ORFV/QD/Y、ORFV/RD/Y、ORFV/QD/LT。根据GenBank上发表的羊口疮全基因组序列设计并合成3对特异性引物,分别扩增 ORFV/QD/Y、ORFV/RD/Y和 ORFV/QD/LT 的 B2L 基因、F1L 基因和 VIR基因片段,并将扩增得到的基因组片段分别克隆到PMD-19T载体上,转化到DH5α感受态细胞中,对重组质粒进行鉴定后送至测序公司进行测序,用DNA Star软件对测序结果进行拼接及三组基因组之间核苷酸同源性比较分析,再将测序结果与NCBI上已公布的13组ORFV全基因组相应基因核苷酸序列进行同源性比对分析、构建系统进化树及氨基酸序列比对分析。结果表明,三组基因组之间B2L基因、F1L基因和VIR基因核苷酸同源性分别为84.2%～96.6%、88.0%～98.3%和77.4%～95.7%,三组基因组与参考序列的B2...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１羊口疮病毒粒子电镜照片（ｘｌＯＯｎｍ；?ｘ５００ｎｍ）（引迟雪林等＞??Ｆｉｇ．】Ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｐｈｏｔｏｇｒａｐｈ?ｏｆ?ａｎ?ｏｒｆ?ｖｉｒｏｎ．（ｂａｉ－＝ｌ?００ｎｍ；５００ｎｍ）??
?内蒙古农业大学硕士学位论文?３??Ｃ＋Ｇ碱基对［２３＿２４］。基因组中间为中心编码区（ＯＲＦ００９？０ＲＦ１１１），两端为反向末端重??复序列（ＯＲＦ００１？ＯＲＦ００８和０ＲＦ１１２？ＯＲＦ１３４），如图２所示。其中心编码区表??现为高度保守，正是因为这种构造为病毒复制和形态构成创造了条件。而其基因组两??端的末端区域则是与毒力基因相关的致病因素［２５］。研宄显示，ＯＲＦＶ的中心编码区与??正痘病毒属中的牛痘病毒十分相似，但由于末端序列出现了基因的插入、缺失和异位??等突变现象使得ＯＲＦＶ与牛疸病毒显示出高度的差异性，也导致了同一种属的病毒??在物种之间与不同属之间产生变异［２６］。通过对己公布的ＯＲＦＶ基因组全序列进行分??析可发现不同ＯＲＦＶ毒株之间同源性相对较高，这表明ＯＲＦＶ相对保守。但是，由??于ＯＲＦＶ的毒力基因和免疫相关基因都集中在基因组两端，由于ＯＲＦＶ基因组两端??常出现变异，在基因重组的过程中通过获得宿主基因或缺少非必须基因而产生新毒株??［２７］。据报道，ＯＲＦＶ通过细胞多次传代后，由于末端基因的缺失或重组可导致病毒致??病力降低，因为这些变异区域为非必须基因，可以被其他外源基因所替换，而许多新??疫苗的开发也正是利用了这一点Ｍ。??Ｉ?一?Ｉ??ＩＴＲ?Ｊ＜?编码区?＞１?ＩＴＲ??Ｚ丨?—?＼??＾????????、??〇ｆｉ＾ｓ??Ｔ＊ｎｕｉｎ￡ｌ?ｙｔｍｓｔｉｏｎ?ｒｅｅｔｏｎ?Ｃｅｉａｔｉｓｌ?ｃｏｎ?ｓｅｉｚｅｄ?ｒｅｇｉｏｎ?Ｔｅｍｉｉｕｓｌ?ｒｅｅｉｏｎ??图２羊口疮病毒的基因组结构示意图（引闫丰超等，２０１３）??Ｆｉｇ．２?Ｉ?ｈｅ?ｓ
１４?不同宿主来源的ＯＲＦＶ免疫相关基因的比较分析???３结果??３．１强毒株、９０代毒株与骆驼ＯＲＦＶ免疫相关基因的扩增结果??用设计好的特异性引物（见表２?）分别对ＯＲＦＶ／ＱＤ／Ｙ、ＯＲＦＶ／ＲＤ／Ｙ和??ＯＲＦＶ／ＱＤ／ＬＴ的Ｂ２Ｌ基因、Ｆ１Ｌ基因和ＶＩＲ基因进行ＰＣＲ扩增，分别扩增出单一清??晰条带，且片段大小与预期一致，如图３？图５。??Ｍ?１?２?３?４?５?Ｍ?１?２?３?４?５?Ｍ?１?２?３?４?５??２ＧＣ３Ｌ－Ｍ＇＇?＇?７５：：ｂｐＥｆｃ?＾?２０：：ｂｐＫ?，?．＂＾１??：ｒ：＇：：?：：，：．．：?…１．ｉ：：＇：?－：；ｉ??，ＨＢ?■卿■??图３?Ｂ２Ｌ基因ＰＣＲ扩增结果?图４?Ｆ１Ｌ基因ＰＣＲ扩增结果?图５?ＶＩＲ基因ＰＣＲ扩增结果??Ｍ：ＤＬ５０００ＤＭＡＭａｒｋｅｒ；?１?？５：?Ｍ：ＤＬ２０００?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１?？５：?Ｍ：ＤＬ５０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１?？５：??ＰＣＲ产物；４：阴性对照；５：阳?ＰＣＲ产物；４：阴性对照；５：阳?ＰＣＲ产物；４：阴性对照；５：阳??性对照?性对照?性对照??Ｆｉｇ．３?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｂ２Ｌ?ｇｅｎｅ?Ｆｉｇ．４?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｆ１Ｌ?ｇｅｎｅ?Ｆｉｇ－５?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＶＩＲ?ｇｅｎｅ??ＰＣＲ?ＰＣＲ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＬ５０００?ＤＮＡＭａｉ．ｋｅｒ：?１?？５：?Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ：?１?？５：?Ｍ：?ＤＬ５０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ：?１?？５：??ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?；?４?：?Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ＰＣＲ
【参考文献】：
期刊论文
[1]羊传染性脓疱病流行现状及诊断防控[J]. 袁志芸. 中兽医学杂志. 2015(12)
[2]新疆塔额垦区羊口疮诊断与综合防控[J]. 刘文进,陶金林,唐燕,李福星. 畜牧与兽医. 2015(03)
[3]杨凌某羊场羊口疮病毒的分离鉴定[J]. 张瑜,高晶晖,张立强,高洋,贾云晓,陈德坤. 动物医学进展. 2015(01)
[4]羊口疮病毒感染OFTu细胞的超微结构电镜观察[J]. 池雪林,曾显成,黄小红,罗树红,汪世华. 福建农林大学学报(自然科学版). 2015(01)
[5]羊口疮病的研究进展[J]. 李慧霞,朱学亮,骆学农. 中国预防兽医学报. 2013(05)
[6]贵州地区羊口疮病毒B2L基因克隆及原核表达载体构建[J]. 向智龙,卓建华,程振涛,欧德渊,鲜思美,尹传宝,黄璐,禾彩红. 中国畜牧兽医. 2011(07)
[7]Identification and Phylogenetic Analysis of an Orf Virus Isolated from an Outbreak in Boer Goat in Shanxi Province[J]. GU Shao-peng1*, SHI Xin-tao1*, SHI Zhong-yong2, WANG Zhong-bing3 and ZHENG Ming-xue1 1 College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shanxi Agricultural University, Taigu 030801, P.R.China 2 Genetically Modified Testing Center, Ministry of Agriculture/College of Life Science, Shanxi Agricultural Universit, Taigu 030801, P.R.China 3 Center for Animal Disease Control and Prevention of Shanxi Province, Taiyuan 030024, P.R.China. Agricultural Sciences in China. 2011(06)
[8]羊口疮病毒的研究进展[J]. 颜新敏,张强. 中国动物检疫. 2008(11)
[9]羊传染性脓疱病毒分离及生物学特性研究[J]. 罗云,申之义. 中国畜牧兽医. 2007(01)
[10]羊口疮病毒形态发生的电镜观察[J]. 白吉荣. 中国兽医科技. 1985(11)
博士论文
[1]羊口疮病毒的分离鉴定与B2L和F1L基因在昆虫杆状病毒系统中的表达及免疫原性分析[D]. 冯平.内蒙古农业大学 2018
硕士论文
[1]羊口疮病毒的致弱与灭活苗的初步研究[D]. 李娜.内蒙古农业大学 2016
[2]羊口疮病毒文登株和石林株毒力致弱及毒力相关基因的生物信息学分析[D]. 周铭.西北农林科技大学 2016
[3]鉴别诊断山羊痘、绵羊痘、羊口疮和小反刍兽疫多重PCR检测方法的建立[D]. 李琛.内蒙古农业大学 2015
[4]不同地区羊口疮病毒三个主要结构蛋白基因的遗传进化分析[D]. 李浩.内蒙古农业大学 2015
[5]羊口疮病毒的分离鉴定及B2L囊膜蛋白单克隆抗体的制备[D]. 谭强.黑龙江八一农垦大学 2014
[6]富平某奶山羊养殖场羊口疮分子病原学调查及灭活疫苗免疫效果评估[D]. 贾云晓.西北农林科技大学 2014
[7]羊口疮病原分子流行病学调查及蜂胶佐剂灭活疫苗免疫效果研究[D]. 张立强.西北农林科技大学 2014
[8]羊口疮抗体ELISA检测方法的建立及应用[D]. 李杰.西北农林科技大学 2013
[9]羊口疮疫苗研制及其免疫效果评估[D]. 田婷婷.西北农林科技大学 2013
本文编号：3463379
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１羊口疮病毒粒子电镜照片（ｘｌＯＯｎｍ；?ｘ５００ｎｍ）（引迟雪林等＞??Ｆｉｇ．】Ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｐｈｏｔｏｇｒａｐｈ?ｏｆ?ａｎ?ｏｒｆ?ｖｉｒｏｎ．（ｂａｉ－＝ｌ?００ｎｍ；５００ｎｍ）??
?内蒙古农业大学硕士学位论文?３??Ｃ＋Ｇ碱基对［２３＿２４］。基因组中间为中心编码区（ＯＲＦ００９？０ＲＦ１１１），两端为反向末端重??复序列（ＯＲＦ００１？ＯＲＦ００８和０ＲＦ１１２？ＯＲＦ１３４），如图２所示。其中心编码区表??现为高度保守，正是因为这种构造为病毒复制和形态构成创造了条件。而其基因组两??端的末端区域则是与毒力基因相关的致病因素［２５］。研宄显示，ＯＲＦＶ的中心编码区与??正痘病毒属中的牛痘病毒十分相似，但由于末端序列出现了基因的插入、缺失和异位??等突变现象使得ＯＲＦＶ与牛疸病毒显示出高度的差异性，也导致了同一种属的病毒??在物种之间与不同属之间产生变异［２６］。通过对己公布的ＯＲＦＶ基因组全序列进行分??析可发现不同ＯＲＦＶ毒株之间同源性相对较高，这表明ＯＲＦＶ相对保守。但是，由??于ＯＲＦＶ的毒力基因和免疫相关基因都集中在基因组两端，由于ＯＲＦＶ基因组两端??常出现变异，在基因重组的过程中通过获得宿主基因或缺少非必须基因而产生新毒株??［２７］。据报道，ＯＲＦＶ通过细胞多次传代后，由于末端基因的缺失或重组可导致病毒致??病力降低，因为这些变异区域为非必须基因，可以被其他外源基因所替换，而许多新??疫苗的开发也正是利用了这一点Ｍ。??Ｉ?一?Ｉ??ＩＴＲ?Ｊ＜?编码区?＞１?ＩＴＲ??Ｚ丨?—?＼??＾????????、??〇ｆｉ＾ｓ??Ｔ＊ｎｕｉｎ￡ｌ?ｙｔｍｓｔｉｏｎ?ｒｅｅｔｏｎ?Ｃｅｉａｔｉｓｌ?ｃｏｎ?ｓｅｉｚｅｄ?ｒｅｇｉｏｎ?Ｔｅｍｉｉｕｓｌ?ｒｅｅｉｏｎ??图２羊口疮病毒的基因组结构示意图（引闫丰超等，２０１３）??Ｆｉｇ．２?Ｉ?ｈｅ?ｓ
１４?不同宿主来源的ＯＲＦＶ免疫相关基因的比较分析???３结果??３．１强毒株、９０代毒株与骆驼ＯＲＦＶ免疫相关基因的扩增结果??用设计好的特异性引物（见表２?）分别对ＯＲＦＶ／ＱＤ／Ｙ、ＯＲＦＶ／ＲＤ／Ｙ和??ＯＲＦＶ／ＱＤ／ＬＴ的Ｂ２Ｌ基因、Ｆ１Ｌ基因和ＶＩＲ基因进行ＰＣＲ扩增，分别扩增出单一清??晰条带，且片段大小与预期一致，如图３？图５。??Ｍ?１?２?３?４?５?Ｍ?１?２?３?４?５?Ｍ?１?２?３?４?５??２ＧＣ３Ｌ－Ｍ＇＇?＇?７５：：ｂｐＥｆｃ?＾?２０：：ｂｐＫ?，?．＂＾１??：ｒ：＇：：?：：，：．．：?…１．ｉ：：＇：?－：；ｉ??，ＨＢ?■卿■??图３?Ｂ２Ｌ基因ＰＣＲ扩增结果?图４?Ｆ１Ｌ基因ＰＣＲ扩增结果?图５?ＶＩＲ基因ＰＣＲ扩增结果??Ｍ：ＤＬ５０００ＤＭＡＭａｒｋｅｒ；?１?？５：?Ｍ：ＤＬ２０００?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１?？５：?Ｍ：ＤＬ５０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１?？５：??ＰＣＲ产物；４：阴性对照；５：阳?ＰＣＲ产物；４：阴性对照；５：阳?ＰＣＲ产物；４：阴性对照；５：阳??性对照?性对照?性对照??Ｆｉｇ．３?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｂ２Ｌ?ｇｅｎｅ?Ｆｉｇ．４?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｆ１Ｌ?ｇｅｎｅ?Ｆｉｇ－５?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＶＩＲ?ｇｅｎｅ??ＰＣＲ?ＰＣＲ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＬ５０００?ＤＮＡＭａｉ．ｋｅｒ：?１?？５：?Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ：?１?？５：?Ｍ：?ＤＬ５０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ：?１?？５：??ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?；?４?：?Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ＰＣＲ
【参考文献】：
期刊论文
[1]羊传染性脓疱病流行现状及诊断防控[J]. 袁志芸. 中兽医学杂志. 2015(12)
[2]新疆塔额垦区羊口疮诊断与综合防控[J]. 刘文进,陶金林,唐燕,李福星. 畜牧与兽医. 2015(03)
[3]杨凌某羊场羊口疮病毒的分离鉴定[J]. 张瑜,高晶晖,张立强,高洋,贾云晓,陈德坤. 动物医学进展. 2015(01)
[4]羊口疮病毒感染OFTu细胞的超微结构电镜观察[J]. 池雪林,曾显成,黄小红,罗树红,汪世华. 福建农林大学学报(自然科学版). 2015(01)
[5]羊口疮病的研究进展[J]. 李慧霞,朱学亮,骆学农. 中国预防兽医学报. 2013(05)
[6]贵州地区羊口疮病毒B2L基因克隆及原核表达载体构建[J]. 向智龙,卓建华,程振涛,欧德渊,鲜思美,尹传宝,黄璐,禾彩红. 中国畜牧兽医. 2011(07)
[7]Identification and Phylogenetic Analysis of an Orf Virus Isolated from an Outbreak in Boer Goat in Shanxi Province[J]. GU Shao-peng1*, SHI Xin-tao1*, SHI Zhong-yong2, WANG Zhong-bing3 and ZHENG Ming-xue1 1 College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shanxi Agricultural University, Taigu 030801, P.R.China 2 Genetically Modified Testing Center, Ministry of Agriculture/College of Life Science, Shanxi Agricultural Universit, Taigu 030801, P.R.China 3 Center for Animal Disease Control and Prevention of Shanxi Province, Taiyuan 030024, P.R.China. Agricultural Sciences in China. 2011(06)
[8]羊口疮病毒的研究进展[J]. 颜新敏,张强. 中国动物检疫. 2008(11)
[9]羊传染性脓疱病毒分离及生物学特性研究[J]. 罗云,申之义. 中国畜牧兽医. 2007(01)
[10]羊口疮病毒形态发生的电镜观察[J]. 白吉荣. 中国兽医科技. 1985(11)
博士论文
[1]羊口疮病毒的分离鉴定与B2L和F1L基因在昆虫杆状病毒系统中的表达及免疫原性分析[D]. 冯平.内蒙古农业大学 2018
硕士论文
[1]羊口疮病毒的致弱与灭活苗的初步研究[D]. 李娜.内蒙古农业大学 2016
[2]羊口疮病毒文登株和石林株毒力致弱及毒力相关基因的生物信息学分析[D]. 周铭.西北农林科技大学 2016
[3]鉴别诊断山羊痘、绵羊痘、羊口疮和小反刍兽疫多重PCR检测方法的建立[D]. 李琛.内蒙古农业大学 2015
[4]不同地区羊口疮病毒三个主要结构蛋白基因的遗传进化分析[D]. 李浩.内蒙古农业大学 2015
[5]羊口疮病毒的分离鉴定及B2L囊膜蛋白单克隆抗体的制备[D]. 谭强.黑龙江八一农垦大学 2014
[6]富平某奶山羊养殖场羊口疮分子病原学调查及灭活疫苗免疫效果评估[D]. 贾云晓.西北农林科技大学 2014
[7]羊口疮病原分子流行病学调查及蜂胶佐剂灭活疫苗免疫效果研究[D]. 张立强.西北农林科技大学 2014
[8]羊口疮抗体ELISA检测方法的建立及应用[D]. 李杰.西北农林科技大学 2013
[9]羊口疮疫苗研制及其免疫效果评估[D]. 田婷婷.西北农林科技大学 2013
本文编号：3463379
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3463379.html
