H3N2亚型猪流感病毒10个基因的原核表达及抗HA蛋白单抗杂交瘤细胞株的建立

发布时间：2021-10-30 05:48

　　猪流感病毒（Swine influenza virus, SIV）是单股负链RNA病毒，属于正黏病毒科，A型流感病毒属。流感病毒有A、B、C三种型，它们均能够感染猪，引起猪流感（Swine influenza,SI）的发生。猪流感是猪的一种急性的呼吸道传染病，其特征为高热、突发、流鼻涕、精神沉郁、呼吸困难、体重下降、衰竭、咳嗽、反复发作等。目前发现的SIV至少有H1N1、H1N2、H1N7、H3N2、H2N3、H3N1、H3N6、H5N2、H4N6、H5N1和H9N2共11种不同的亚型。根据血清学、病原学以及流行病学的研究，我国发现的亚型有H9N2、H5N1、H3N2、H1N2和H1N1，以H3N2和H1N1亚型的流行及危害相对比较严重。在我国的猪群中，长期存在着这些不同亚型的流感病毒，为病毒的基因重排创造了条件，这必将对我国的养猪业和人类的公共卫生等产生潜在的威胁。国际学术界现在已经普遍认为，在人群中有流行潜力的流感病毒株可以通过猪产生。因此猪流感的影响不仅在其对于兽医流行病学的意义，更在于其所产生的深远的公共卫生意义。本研究以本实验室分离得到的A/swine/Henan/1/201... 

【文章来源】：河南农业大学河南省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

流感病毒的结构示意图

即以包涵体的形式存在。将表达重组菌超声粉碎后离心取沉淀，按隆实验指南（第三版）》中从包涵体中纯化表达蛋白的方法对收集的目的蛋白进并通过分步透析的方法对各融合蛋白进行复性。estern blot 鉴定诱导表达的蛋白进行SDS-PAGE电泳后，将目的蛋白用电转仪转移至PVDF膜上室温封闭 1h，弃去封闭液，用 TBST 缓冲液洗涤 3 次，每次 10min，用 1∶1 HRP 标记的抗 His-tag 鼠单抗，4℃孵育过夜，孵育结束后，用 TBST 缓冲液洗次 10min，最后用 DAB 显色试剂盒显色。与分析、NA、NP、M1、M2、NS1、NS2、PA、PB1 和 PB2 基因的扩增2 HA、NA、NP、M1、M2-A、M2-B、M2、NS1、NS2、PA、PB1 和 PB2 基因，经琼脂糖凝胶（浓度为 1%）电泳后，分别在 1459 bp、639 bp、1512 bp、777 b50 bp、231 bp、711 bp、354 bp、354 bp、414 bp、1035 bp 左右的位置出现了特，扩增产物的大小与测序结果的大小相符（见图 2-1，图 2-2）。

图 2-2 M2、M2-B、M2-A 的 PCR 扩Fig.2-1 PCR products of M2、M2-B、M.DNA Marker DL500;1.M2 基因;2. M2-B 基1.M2 gene;2. M2-Bgene;3. M2-A 2.2 重组质粒的酶切鉴定提取菌液 PCR 为阳性的重组菌的质粒：pET-28a(+)-HA-NP-R、pET-28a(+)-M1、pET-32a(+)-M2、pET-28a(+)-NS1、pEpET-28a(+)-PB1、pET-28a(+)-PB2。分别用对应的限制性内切进行双酶切，然后经琼脂糖凝胶（1%）电泳鉴定（见图 2-3经双酶切得到了两条特异性的片段，并且这两条特异性的片段和目的基因片段的大小相符，说明重组质粒构建成功。


本文编号：3466175