茶皂素抗PCV2及其作用机制的研究

发布时间：2017-05-05 21:12

  本文关键词：茶皂素抗PCV2及其作用机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究茶皂素(tea saponin, TS)对猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的抗病毒作用及其机制,以期为抗病毒新药的研发提供依据。方法：(1)在体外试验中,首先通过MTT法在PK-15细胞上筛选出TS的最大安全浓度;将100TCID50的PCV2感染PK-15细胞,建立细胞感染模型；分别用15μg/ml、 7.5μg/ml的TS作用于细胞感染模型72h,用荧光定量PCR(qPCR)检测TS对PCV2 Cap基因表达的影响,计算病毒载量。(2)在动物试验中,首先通过急性毒性试验、溶血性检测和肝、肾组织毒性检测等体内安全性评价试验确定TS的体内给药剂量;将120只小鼠随机平均分成5组,每组设4个时间点,5个组分别为空白组、攻毒组、茶皂素给药组(TS组)、利巴韦林给药组(Rib组)和茶皂素与利巴韦林混合给药组(TS+Rib组)。试验开始第1天,称重后对攻毒组和给药组进行攻毒,建立PCV2感染小鼠模型,PCV2的攻毒方式、剂量为每只小鼠腹腔注射0.5 mL、背部皮下多点注射0.3 mL、滴鼻50μl。第7天开始,给药组按0.2ml/10g称重后腹腔注射给药,给药剂量为：TS组20mg/kgTS溶液,Rib组76mg/kgRib溶液,混合给药组给予TS和Rib的混合药液(其中所含TS剂量为20mg/kg,Rib剂量为76mg/kg),攻毒组则给予相应量的生理盐水。每天给药1次,连续给药5天。分别在攻毒后第10天、13天、16天和19天,取每组中6只小鼠的血清、肝脏等进行检测。qPCR检测小鼠肝脏中PCV2 Cap基因拷贝数; Elisa法检测小鼠血清中IL-2和IFN-γ的含量。结果：(1)体外试验中,TS的最大安全浓度为15μg/ml。与PCV2组相比,15μg/mlTS组的PCV2 Cap基因拷贝数显著降低(P0.05)。(2)通过体内安全性评价试验确定TS的体内给药剂量为20mg/kg。(3)体内试验中,与攻毒组相比,TS组的PCV2 Cap基因拷贝数在4个时间点均表现显著降低(P0.05);脾指数在4个时间点均表现显著升高(P0.05);IL-2仅在10d、16d显著升高(P0.05); IFN-γ在10d、13d和19d显著升高(P0.05)。TS+Rib组与攻毒组相比,在1Od、13d、19d检测到PCV2 Cap基因拷贝数显著降低(P0.05)；脾指数在4个时间点均表现显著升高(P0.05);IL-2仅在10d时显著升高(P0.05);IFN-γ在4个时间点均显著升高(P0.05)。结论：1.15μg/ml的TS在PCV2感染PK-15细胞模型中能够显著降低PCV2载量,表现出抗病毒作用。2.给药剂量为20mg/kg的TS在PCV2感染小鼠模型中具有抗PCV2的作用,且能够刺激机体IL-2的分泌和对脾脏指数、IFN-γ分泌的显著增加。
【关键词】：PCV2 茶皂素 抗病毒
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S853.74
【目录】：

• 摘要7-9
• 文献综述9-19
• 1. 猪圆环病毒研究进展9-13
• 1.1 猪圆环病毒的发现9
• 1.2 分子生物学特性9-10
• 1.3 基因组结构特征10
• 1.4 编码的主要蛋白10-11
• 1.5 PCV2致病机理11
• 1.6 PCV2的检测方法11-13
• 1.7 PCV2相关疾病的防治13
• 2. 茶皂素生物活性的研究13-16
• 2.1 溶血和鱼毒活性13-14
• 2.2 抗菌活性14
• 2.3 消炎与抗氧化作用14
• 2.4 对机体免疫功能的影响14-15
• 2.5 生物激素样作用15
• 2.6 作为生物农药15
• 2.7 抗病毒作用15-16
• 3. 天然抗病毒药物的研究概况16-19
• 3.1 抗病毒活性成分16
• 3.2 抗病毒研究的方法16-17
• 3.3 天然抗病毒药物的作用机制17-19
• 前言19-20
• 试验部分20-54
• 1 试验材料20-23
• 1.1 实验动物、细胞株及病毒20
• 1.2 主要试剂20
• 1.3 主要试剂的配制20-22
• 1.4 主要试验仪器22-23
• 2 试验方法23-35
• 2.1 茶皂素含量的测定23
• 2.2 茶皂素体外溶血活性测定23-24
• 2.3 茶皂素在小鼠体内的安全性评价24-26
• 2.4 PK-15细胞的准备26-27
• 2.5 PCV2的准备27-28
• 2.6 TS细胞毒性测定28
• 2.7 细胞感染模型PCV2 Cap基因的检测28-32
• 2.8 PCV2感染小鼠模型的建立32-33
• 2.9 感染小鼠组织中PCV2载量的测定33
• 2.10 小鼠体重变化、胸腺指数和脾指数的测定33
• 2.11 小鼠血清中IL-2、IFN-γ含量水平的测定33-34
• 2.12 数据统计与分析34-35
• 3 试验结果35-51
• 3.1 茶皂素含量测定结果35
• 3.2 茶皂素体外溶血活性测定结果35-36
• 3.3 茶皂素体内安全性评价结果36-38
• 3.4 PCV2毒力测定结果38
• 3.5 TS细胞毒性测定结果38-39
• 3.6 细胞模型PCV2 Cap基因的检测结果39-43
• 3.7 PCV2感染小鼠模型的建立结果43-44
• 3.8 感染小鼠肝脏中PCV2载量测定结果44-45
• 3.9 小鼠体重变化、脾脏指数和胸腺指数的测定结果45-49
• 3.10 小鼠血清中IL-2、IFN-γ含量的测定结果49-51
• 4 分析与讨论51-53
• 4.1 TS的毒性评价51
• 4.2 PCV2感染小鼠模型的评价51
• 4.3 TS在体内外对PCV2复制的影响51-52
• 4.4 TS抗PCV2机制的初步探讨52-53
• 5 全文结论53-54
• 参考文献54-61
• Abstract61-63
• 致谢63

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