哈尔滨市鸡饲料中DON和ZEA的调查及其对鸡脾淋巴细胞毒性的影响
发布时间：2021-11-04 02:00
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol, DON）和玉米赤霉烯酮（Zearalenone, ZEA）均是由镰刀菌产生的霉菌毒素,两者经常同时出现,可在世界范围内污染农作物、粮食制品和饲料,进而进入食物链,严重危害人和牲畜的健康。近年来,关于DON和ZEA的毒性研究多集中在啮齿类动物细胞毒性和致癌性等方面,对禽类免疫毒性的研究较少。本课题通过对哈尔滨周边养鸡场饲料中DON和ZEA含量的检测,分析哈市周边地区多种鸡饲料二者的污染情况；为了探讨DON和ZEA对鸡免疫细胞的毒性机制,以55～65日龄健康公鸡脾脏制备淋巴细胞悬浮液,经DON（0、0.2、0.8、3.2、12.5和50μg/mL）、ZEA （0、0.1、0.4、1.6、6.25和25μg/mL）以及二者联合（DON0、0.0125、0.05、0.2和0.8μg/mL, ZEA0、0.006、0.025.0.1和0.4μg/mL）暴露48h,高效液相色谱方法检测鸡脾脏淋巴细胞DNA总甲基化水平,实时荧光定量PCR方法检测甲基转移酶（DNMT1、DNMT3A和DNMT3B）、去甲基化酶（MBD2）和炎症因子（COX-2、NF...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的毒性作用研究进展
1.1.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮在国内外污染状况
1.1.2 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的免疫毒性研究进展
1.1.3 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的细胞毒性研究进展
1.1.4 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的其它毒害作用
1.1.5 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮与氧化应激
1.2 DNA甲基化与疾病研究进展
1.2.1 DNA甲基化与去甲基化
1.2.2 DNA甲基化与疾病
1.3 炎症损伤与免疫性疾病
1.4 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 主要仪器与试剂
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要试剂
2.2 检测饲料中DON和ZEA的含量
2.3 淋巴细胞的提取与处理
2.4 检测基因组DNA总甲基化水平
2.4.1 DNA样品处理和色谱条件
2.4.2 绘制标准曲线
2.4.3 测定回收率与精密度
2.4.4 检测DNA甲基化水平
2.5 DNMTs和MBD2 mRNA的检测
2.5.1 引物设计与合成
2.5.2 鸡脾淋巴细胞总RNA的抽提
2.5.3 反转录反应
2.5.4 实时定量PCR扩增
2.6 炎症相关因子COX-2、NF-κB、TNF-α和iNOS mRNA的检测
2.6.1 引物的设计与合成
2.6.2 鸡脾淋巴细胞总RNA的抽提
2.6.3 反转录反应
2.6.4 实时定量PCR扩增
2.7 检测抗氧化指标
2.8 检测蛋白质羰基含量
2.9 数据分析
3 结果与分析
3.1 饲料中DON和ZEA含量的检测结果
3.2 HPLC检测DNA总甲基化水平结果
3.2.1 淋巴细胞DNA提取结果
3.2.2 标准曲线的结果
3.2.3 回收率与精密度结果
3.2.4 样品色谱图
3.2.5 DON和ZEA单一及联合对DNA甲基化水平影响的检测结果
3.3 实时PCR检测方法的建立
3.4 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、MBD2mRNA表达影响的检测结果
3.4.1 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞DNMT1 mRNA表达影响的检测结果
3.4.2 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞DNMT3A mRNA表达影响的检测结果
3.4.3 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞DNMT3B mRNA表达影响的检测结果
3.4.4 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞MBD2 mRNA表达影响的检测结果
3.5 脾脏淋巴细胞抗氧化功能的检测结果
3.5.1 脾淋巴细胞SOD活性的检测结果
3.5.2 脾淋巴细胞GSH-Px活性的检测结果
3.5.3 脾淋巴细胞MDA含量的检测结果
3.6 脾脏淋巴细胞羰基含量的检测结果
3.7 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞COX-2、NF-κB、TNF-α、iNOS mRNA表达影响的检测结果
3.7.1 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞COX-2 mRNA表达影响的检测结果
3.7.2 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞NF-κB mRNA表达影响的检测结果
3.7.3 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞TNF-α mRNA表达影响的检测结果
3.7.4 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞iNOS mRNA表达影响的检测结果
4 讨论
4.1 饲料中DON和ZEA毒素检测含量的分析
4.2 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞DNA总甲基化水平的影响
4.3 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、MBD2基因表达水平的影响
4.4 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞抗氧化功能的影响
4.5 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞蛋白质羰基含量的影响
4.6 DON和ZEA单一及联合对鸡脾淋巴细胞COX-2、NF-κB、TNF-α和iNOS mRNA表达的影响
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]TNF-α促进HepG2肝细胞脂质积聚及其机制的初步研究[J]. 陈书梅,杨淑敏,张文龙,吕琼,叶鹏,高茹菲,梅玫,汪志红,李启富. 第三军医大学学报. 2013(11)
[2]2012年中国饲料和原料霉菌毒素检测报告[J]. 王金勇,刘颖莉,关舒. 中国畜牧杂志. 2013(04)
[3]谷氨酰胺对肝移植大鼠肠黏膜NF-κB、ICAM-1、TNF-α表达的影响[J]. 刘光艺,朱继芳,李洋. 第三军医大学学报. 2013(12)
[4]HCG联合免疫球蛋白对溴隐亭致大鼠流产模型Th1/Th2型细胞因子的影响[J]. 董艳,刘福民,刘小云,冯霞. 海南医学院学报. 2012(10)
[5]再谈猪场霉菌毒素中毒的防控问题[J]. 万遂如. 养猪. 2012(04)
[6]黄曲霉毒素B1诱导性大鼠肝癌超微结构观察及DNA甲基化转移酶3表达变化[J]. 张友才,陈金霞,张伟伟,李骥. 中国癌症杂志. 2012(01)
[7]miR-222与MBD2在结肠癌组织中的表达及其临床意义[J]. 黄建军,戈立东,周秀田,谢金龙,胡正超,周波,许威华. 中国癌症杂志. 2012(01)
[8]镉对瓯江彩鲤脏器组织蛋白质的氧化损伤作用[J]. 刘晓旭,曹慧,贾秀英. 生态毒理学报. 2011(06)
[9]我国部分地区2010年产谷物及其制品中多组分真菌毒素污染状况研究[J]. 马皎洁,邵兵,林肖惠,于红霞,李凤琴. 中国食品卫生杂志. 2011(06)
[10]DNA甲基转移酶3b基因在肝外胆管癌组织中的表达[J]. 左石,邹声泉,孙诚谊. 贵阳医学院学报. 2011(04)
硕士论文
[1]硒缺乏对鸡组织DNA甲基化水平的影响[D]. 蒋智慧.东北农业大学 2012
[2]亚慢性锰中毒对鸡肾脏损伤机制的研究[D]. 顾喜娟.东北农业大学 2009
[3]土壤中重金属和农药复合污染对蚯蚓毒性效应的研究[D]. 邰托娅.南京农业大学 2008
本文编号：3474776
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的毒性作用研究进展
1.1.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮在国内外污染状况
1.1.2 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的免疫毒性研究进展
1.1.3 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的细胞毒性研究进展
1.1.4 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的其它毒害作用
1.1.5 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮与氧化应激
1.2 DNA甲基化与疾病研究进展
1.2.1 DNA甲基化与去甲基化
1.2.2 DNA甲基化与疾病
1.3 炎症损伤与免疫性疾病
1.4 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 主要仪器与试剂
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要试剂
2.2 检测饲料中DON和ZEA的含量
2.3 淋巴细胞的提取与处理
2.4 检测基因组DNA总甲基化水平
2.4.1 DNA样品处理和色谱条件
2.4.2 绘制标准曲线
2.4.3 测定回收率与精密度
2.4.4 检测DNA甲基化水平
2.5 DNMTs和MBD2 mRNA的检测
2.5.1 引物设计与合成
2.5.2 鸡脾淋巴细胞总RNA的抽提
2.5.3 反转录反应
2.5.4 实时定量PCR扩增
2.6 炎症相关因子COX-2、NF-κB、TNF-α和iNOS mRNA的检测
2.6.1 引物的设计与合成
2.6.2 鸡脾淋巴细胞总RNA的抽提
2.6.3 反转录反应
2.6.4 实时定量PCR扩增
2.7 检测抗氧化指标
2.8 检测蛋白质羰基含量
2.9 数据分析
3 结果与分析
3.1 饲料中DON和ZEA含量的检测结果
3.2 HPLC检测DNA总甲基化水平结果
3.2.1 淋巴细胞DNA提取结果
3.2.2 标准曲线的结果
3.2.3 回收率与精密度结果
3.2.4 样品色谱图
3.2.5 DON和ZEA单一及联合对DNA甲基化水平影响的检测结果
3.3 实时PCR检测方法的建立
3.4 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、MBD2mRNA表达影响的检测结果
3.4.1 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞DNMT1 mRNA表达影响的检测结果
3.4.2 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞DNMT3A mRNA表达影响的检测结果
3.4.3 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞DNMT3B mRNA表达影响的检测结果
3.4.4 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞MBD2 mRNA表达影响的检测结果
3.5 脾脏淋巴细胞抗氧化功能的检测结果
3.5.1 脾淋巴细胞SOD活性的检测结果
3.5.2 脾淋巴细胞GSH-Px活性的检测结果
3.5.3 脾淋巴细胞MDA含量的检测结果
3.6 脾脏淋巴细胞羰基含量的检测结果
3.7 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞COX-2、NF-κB、TNF-α、iNOS mRNA表达影响的检测结果
3.7.1 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞COX-2 mRNA表达影响的检测结果
3.7.2 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞NF-κB mRNA表达影响的检测结果
3.7.3 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞TNF-α mRNA表达影响的检测结果
3.7.4 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞iNOS mRNA表达影响的检测结果
4 讨论
4.1 饲料中DON和ZEA毒素检测含量的分析
4.2 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞DNA总甲基化水平的影响
4.3 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、MBD2基因表达水平的影响
4.4 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞抗氧化功能的影响
4.5 DON和ZEA单一及联合对鸡脾脏淋巴细胞蛋白质羰基含量的影响
4.6 DON和ZEA单一及联合对鸡脾淋巴细胞COX-2、NF-κB、TNF-α和iNOS mRNA表达的影响
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]TNF-α促进HepG2肝细胞脂质积聚及其机制的初步研究[J]. 陈书梅,杨淑敏,张文龙,吕琼,叶鹏,高茹菲,梅玫,汪志红,李启富. 第三军医大学学报. 2013(11)
[2]2012年中国饲料和原料霉菌毒素检测报告[J]. 王金勇,刘颖莉,关舒. 中国畜牧杂志. 2013(04)
[3]谷氨酰胺对肝移植大鼠肠黏膜NF-κB、ICAM-1、TNF-α表达的影响[J]. 刘光艺,朱继芳,李洋. 第三军医大学学报. 2013(12)
[4]HCG联合免疫球蛋白对溴隐亭致大鼠流产模型Th1/Th2型细胞因子的影响[J]. 董艳,刘福民,刘小云,冯霞. 海南医学院学报. 2012(10)
[5]再谈猪场霉菌毒素中毒的防控问题[J]. 万遂如. 养猪. 2012(04)
[6]黄曲霉毒素B1诱导性大鼠肝癌超微结构观察及DNA甲基化转移酶3表达变化[J]. 张友才,陈金霞,张伟伟,李骥. 中国癌症杂志. 2012(01)
[7]miR-222与MBD2在结肠癌组织中的表达及其临床意义[J]. 黄建军,戈立东,周秀田,谢金龙,胡正超,周波,许威华. 中国癌症杂志. 2012(01)
[8]镉对瓯江彩鲤脏器组织蛋白质的氧化损伤作用[J]. 刘晓旭,曹慧,贾秀英. 生态毒理学报. 2011(06)
[9]我国部分地区2010年产谷物及其制品中多组分真菌毒素污染状况研究[J]. 马皎洁,邵兵,林肖惠,于红霞,李凤琴. 中国食品卫生杂志. 2011(06)
[10]DNA甲基转移酶3b基因在肝外胆管癌组织中的表达[J]. 左石,邹声泉,孙诚谊. 贵阳医学院学报. 2011(04)
硕士论文
[1]硒缺乏对鸡组织DNA甲基化水平的影响[D]. 蒋智慧.东北农业大学 2012
[2]亚慢性锰中毒对鸡肾脏损伤机制的研究[D]. 顾喜娟.东北农业大学 2009
[3]土壤中重金属和农药复合污染对蚯蚓毒性效应的研究[D]. 邰托娅.南京农业大学 2008
本文编号：3474776
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