嗜酸乳杆菌对健康及口蹄疫疫苗接种小鼠的免疫调节作用

发布时间：2021-11-04 01:18

　　益生菌通过抑制或增强对细胞因子表达的调节影响肠道免疫反应。研究表明，口服嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus SW1（LASW1）具有免疫增强作用，能增强病毒特异性免疫反应，动物以口服方式摄取该菌株后，能够调节体内细胞因子的表达水平。在本研究中，首先评估了LASW1对健康BALB/c小鼠全身性免疫反应的影响。结果表明饲喂LASW1后，与对照组相比，小鼠体内肿瘤坏死因子（TNF-α）的表达受到显著抑制，而Th1型细胞因子，包括干扰素-gamma（IFN-γ）和白细胞介素12（IL-12）的表达明显升高。实验还发现，口服LASW1后，小鼠体内转化生长因子（TGF-β）的水平也明显升高。此外，高剂量LASW1与低剂量LASW1分别饲喂小鼠，与对照组相比，外周血中CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞数量随之降低。同时发现，小鼠血清中免疫球蛋白的浓度也发生了明显的变化，并且这种变化呈菌株剂量依赖性。与体内试验相比，热致死型（heat-killed，HK）LASW1（HKLASW1）能诱导脾脏细胞大量分泌TNF-a，而细菌培养上清液（La-sup）能强烈的抑制HKLAS... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：85 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 前言
    1.2 乳酸菌的分类及理化特性
    1.4 乳酸菌与免疫系统
        1.4.1 乳酸菌的免疫识别
        1.4.2 乳酸菌的 TLR2 信号通路
        1.4.3 TLR9 对乳酸菌基因组 DNA 的识别
        1.4.4 肽聚糖识别性免疫信号通路
        1.4.5 细菌多糖对免疫信号的影响
        1.4.6 乳酸菌的体外免疫调节
        1.4.7 发现乳酸菌免疫调节成分的新方法
        1.4.8 体内免疫调节机制
        1.4.9 乳酸菌对抗体反应及免疫力的影响
        1.4.10 先天性免疫信号的传递及物理屏障功能
    1.5 研究的目的与意义
第二章 鼠源乳酸菌的分离与鉴定
    2.1 前言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验小鼠和培养基
        2.2.2 分离肠道乳酸菌
        2.2.3 革兰氏染色
        2.2.4 细菌 16SrDNA 基因的扩增与测序鉴定
        2.2.5 不同乳酸菌 16SrDNA 基因的变异图谱
    2.3 结果
        2.3.1 革兰氏染色结果
        2.3.2 乳酸菌 16S 基因变异
    2.4 结论
第三章 酸乳菌对小鼠细胞因子分泌的影响
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 口服嗜酸乳杆菌的制备
        3.2.2 热致死 LASW1 的制备
        3.2.3 实验分组
        3.2.4 细胞因子的检测
        3.2.5 外周血细胞中 T 淋巴细胞检测
        3.2.6 流式细胞技术检测血清免疫球蛋白亚型含量
        3.2.7 脾脏细胞的制备及其与热致死 LASW1 的共培养
        3.2.8 淋巴细胞增殖实验
        3.2.9 嗜酸乳杆菌刺激脾脏淋巴细胞后调节性 T 细胞比例的分析
        3.2.10 结果统计与分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 口服 LASW1 抑制体内 TNF-α的产生，增加 Th1 型细胞因子反应22
        3.4.2 口服 LASW1 对小鼠外周血 T 淋巴细胞亚群的影响
        3.4.3 血清中免疫球蛋白亚型浓度
        3.4.4 HK LASW1 诱导小鼠脾脏细胞分泌细胞因子
        3.4.5 LASW1 影响淋巴细胞增殖
        3.4.6 嗜酸乳杆菌增加调节性 T 细胞的比值
    3.5 讨论
第四章 口服 LASW1 对商用口蹄疫灭活苗的免疫调节作用
    4.1 前言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 细菌
        4.2.2 动物及实验分组
        4.2.3 口蹄疫病毒特异性 IgG 及其亚型测定
        4.2.4 脾细胞增殖实验
        4.2.5 抗原特异性迟发型超敏反应（DTH，delayed-type hypersensitivity）
        4.2.6 体内外细胞因子 IFN-γ和 TNF-α水平检测
        4.2.7 流式细胞术检测小鼠血清中免疫球蛋白分型变化
        4.2.8 实验数据的统计分析
    4.3 结果
        4.3.1 口蹄疫特异性 IgG 及其亚型
        4.3.2 脾细胞增殖实验
        4.3.3 抗原特异性超敏反应
        4.3.4 体内外细胞因子的分泌水平
        4.3.5 免疫球蛋白 Ig 各型含量
    4.4 讨论
第五章 乳酸菌对口蹄疫 DNA 疫苗在小鼠体内的佐剂效应
    5.1 前言
    5.2 材料与方法
        5.2.1 表达 FMDV-VP1 基因真核质粒的构建
        5.2.2 真核细胞中表达 VP1 基因
        5.2.3 细菌
        5.2.4 实验动物和免疫接种
        5.2.5 特异性口蹄疫病毒 IgG 及其亚型的检测
        5.2.6 脾脏淋巴细胞增殖实验
        5.2.7 体外细胞因子检测
        5.2.8 酶联免疫斑点试验
        5.2.9 数据统计与分析
    5.3 结果
        5.3.1 BHK-21 细胞中表达 VP1 基因
        5.3.2 嗜酸乳杆菌可改善体液免疫反应
        5.3.3 细胞增殖效应
        5.3.4 细胞因子检测
        5.3.5 INF-γ的 ELISpot 实验
    5.4 讨论
第六章 全文结论
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]Probiotics increase T regulatory cells and reduce severity of experimental colitis in mice[J]. Hai-Mei Zhao,Xiao-Ying Huang,Zhi-Qin Zuo,Qi-Hong Pan,Mei-Ying Ao,Feng Zhou,Hong-Ning Liu,Zhi-Yong Liu,Duan-Yong Liu.  World Journal of Gastroenterology. 2013(05)
[2]Potentially probiotic bacteria induce efficient maturation but differential cytokine production in human monocyte-derived dendritic cells[J]. Sinikka Latvala,Taija E Pietil,Ville Veckman,Riina A Kekkonen,Soile Tynkkynen,Riitta Korpela,Ilkka Julkunen.  World Journal of Gastroenterology. 2008(36)
[3]Correlation between in vitro and in vivo immunomodulatory properties of lactic acid bacteria[J]. Benoit Foligne,Sophie Nutten,Corinne Grangette,Véronique Dennin,Denise Goudercourt,Sabine Poiret,Joelle Dewulf,Dominique Brassart,Annick Mercenier,Bruno Pot.  World Journal of Gastroenterology. 2007(02)
[4]Preventative effects of a probiotic, Lactobacillus salivarius ssp. salivarius, in the TNBS model of rat colitis[J]. Laura Peran,Desiree Camuesco,Monica Comalada,Ana Nieto,Angel Concha,Maria Paz Diaz-Ropero,Monica Olivares,Jordi Xaus,Antonio Zarzuelo,Julio Galvez.  World Journal of Gastroenterology. 2005(33)



本文编号：3474717