致仔猪脑膜炎新型猪链球菌的鉴定

发布时间：2021-11-04 08:50

　　猪链球菌（Streptococcus Suis,S.suis）导致患病猪的脑膜炎,败血症以及各种化脓性炎症,是引起公共卫生危害的重要病原之一。按照荚膜抗原的血清学分类,目前共有35个猪链球菌的血清型。此外还存在不能定型或者不属于现有血清型的菌株。1.仔猪脑膜炎新型猪链球菌分离株的鉴定和毒力分析2013年3月至5月,江苏某猪场大量断奶仔猪患病死亡。发病率达35%,死亡率为90%。患病动物表现出共济失调、转圈、头部震颤等明显的脑膜炎症状。剖检9只濒临死亡的病猪发现,脑部均有不同程度的水肿和点状出血。从仔猪脑组织中分离培养获得一株细菌,命名为CZ130302。通过生化鉴定,结合16S rRNA基因和谷氨酸脱氢酶基因（gdh）的测序鉴定,确定该细菌（CZ130302）为猪链球菌。电镜观察CZ130302株有荚膜结构,与参考血清的凝集试验和多重PCR分型鉴定方法进一步确定该分离株不属于现有的任一血清型。制备猪链球菌CZ130302菌株的高免血清。该血清与现有的35个血清型菌株进行凝集反应试验,结果均为阴性。150只BALB/c小鼠随机分为15组,测定CZ130302的半数致死量（LD5o）为2.... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：100 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词
第一章 猪链球菌的鉴定分型研究进展
    1 生化鉴定
    2 血清学分型
    3 分子生物学分型技术
        3.1 多重PCR技术(Mulitiplex PCR)
        3.2 多位点序列分型(MLST)技术
        3.3 利用看家基因对猪链球菌的鉴定和分群
        3.4 多位点酶电泳法(MEE)技术
        3.5 限制性内切酶图谱分析法(REA)
        3.6 脉冲凝胶电泳(PFGE)分型
        3.7 随机扩增核酸片段多态性分析(RAPD)
        3.8 基于EF等毒力因子的分型
        3.9 核糖体酶切分型(Ribotyping)
    参考文献
第二篇 实验研究
    第二章 仔猪脑膜炎新型分离株的鉴定
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 病原的检测和分离
            1.2 菌株、质粒和培养条件
            1.3 病毒的检测
            1.4 细菌的培养特性分析
            1.5 血清凝集试验
            1.6 多重PCR(Multiplex PCR)反应
            1.7 毒力表型鉴定
            1.8 BALB/c小鼠攻毒试验
            1.9 细胞黏附试验
            1.10 CZ130302抗血清的制备
        2 结果
            2.1 病原的鉴定
            2.2 血清凝集试验
            2.3 PCR反应
            2.4 毒力表型鉴定
            2.5 BALB/c小鼠攻毒试验
            2.6 小鼠攻毒脏器分布试验
            2.7 细胞黏附试验
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第三章 CZ130302株基因组分析及PCR定型方法的建立
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 基因组测序
            1.2 CPS基因的补洞和拼接
            1.3 ORF分析与BPGN命名
            1.4 序列比较与进化分析
            1.5 cpn60、recN和sodA的进化树分析
            1.6 MLST分型
            1.7 CPS合成聚合酶以及翻转酶等基因分析
            1.8 CPS HGs的比对
            1.9 PCR分型方法的建立
            1.10 未定型菌株的定型筛选
            1.11 新定型菌株的生物学特性分析
        2 结果
            2.1 CPS的测序结果
            2.2 CPS HGs分析
            2.3 MLST分型
            2.4 HGs的比对结果
            2.5 cpn60、recN和sodA的进化树分析
            2.6 CPS的合成途径聚合酶以及翻转酶等基因分析
            2.7 新血清型PCR检测方法的建立
            2.8 新型检测方法的建立
            2.9 新型菌株毒力因子的检测
            2.10 新型菌株半数致死量的测定
            2.11 荚膜电镜
            2.12 细胞黏附试验
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
全文总结
致谢
博士在读期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪链球菌2型感染实验动物模型的研究进展[J]. 宋洁,黎庶.  微生物学免疫学进展. 2010(03)
[2]体内表达新基因trag在猪链球菌的分布及其免疫反应性分析[J]. 祝昊丹,顾宏伟,陆承平.  微生物学报. 2008(12)
[3]猪链球菌35个血清型标准抗血清的制备及应用[J]. 姜艳华,孙乾,王楷宬,黄保续,辛长卫,姜平,范伟兴.  中国动物检疫. 2008(09)
[4]用斑马鱼检测猪链球菌2型的致病力[J]. 濮俊毅,黄新新,陆承平.  中国农业科学. 2007(11)
[5]猪链球菌1998分离株病原特性鉴定[J]. 姚火春,陈国强,陆承平.  南京农业大学学报. 1999(02)



本文编号：3475404