猪精原干细胞培养体系优化与异种移植特性检测
发布时间：2021-11-04 10:34
精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSC）是哺乳动物体内唯一可以将遗传信息传递给下一代的成体干细胞。猪作为一种重要的模式动物,建立和完善猪精原干细胞（pSSC）的培养体系非常重要。已有的精原干细胞长期培养体系并不能完全实现猪精原干细胞的体外长期培养,因此我们需要优化pSSCs的体外培养体系,为探索其生物学特性奠定基础。我以2D赛天然人工合成多肽基质涂层作为一种胞外基质,对不同的化学小分子组合进行筛选,通过添加Chir99021,Repsox以及CD脂质浓缩物,将猪的精原干细胞体外培养至三个月,主要研究结果如下:1.通过筛选不同的细胞外基质后,使用2D赛天然作为细胞培养基质,在体外可将猪的精原干细胞培养至两个月,在培养过程中观察到两种不同的克隆形态。一种与典型的小鼠胚胎干细胞克隆类似,另一种为典型的葡萄串珠状精原干细胞簇,前者极有可能提供一种猪多能性干细胞获得的新方法;2通过筛选不同的化学小分子组合,最终确定Chir99021,Repsox以及CD脂质浓缩物可以使猪精原干细胞培养时间从两个月延长至三个月,并维持较好精原干细胞特性;3 pSSCs异种移植到无精...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SSC的自我更新以及增殖(Mitsuruetal.2015)
白血病锌指蛋白、ERM/Etv 等。在小鼠睾丸中，支持细胞会分泌胶质细胞源神经营养因子（GDNF）(Sun, Zhang, & Jin, 2011)，其主要作用是调节精原干细胞的增殖与分化比例。系列研究表明 GDNF 在精原干细胞的自我更新中起了非常关键的作用，是体外培养精原干细胞时必需添加的细胞因子之一(Kanatsu-Shinohara, Ogonuki, et al, 2005; Oatley,Avarbock, Telaranta, Fearon, & Brinster, 2006)。精原干细胞特性的维持以及功能的发挥离不开其微环境，在睾丸中，除了精原干细胞以及各级生精细胞的存在之外，还存在别的细胞类型，如支持细胞，间质细胞，管周肌样细胞等等（图 1-2）。
SCF 则是一种多肽生长因子，是受体原癌基因蛋白质(c-Kit)的配体c-Kit 可维持分化 A 型精原细胞的状态，对未分化的 A 型精原细胞则没有影aldi, Rossi, Dolci, Ripamonti, & Geremia, 2002)。维生素 C 是一种抗氧化剂，可以超氧自由基，从而提高精子活力，最终保护精子免受伤害（李德雪等，2001）。早期研究中，SSCs 一直被认为是单能的(Simon, Hess, & Cooke, 2010)，然而近来越多的研究表明其实际为多潜能干细胞。早期研究发现，SSC 在培养过程中重编程形成 ES 样多潜能干细胞，尽管自发重编程的效率相对较低(An, Zheng,, 2017; Guan et al, 2006a; Kanatsu-Shinohara et al, 2004; Ko et al, 2009; Seandel et)，随后又有研究表明，当抑制 CDH1 以及 TGFβ通路时，可以通过促进间质细细胞转化的过程最终提高精原干细胞自发重编程的效率（图 1-3）。因此，精原也被认为是一种多潜能细胞的理想来源(Kanatsu-Shinohara & Shinohara, 20n et al, 2010)，其可以向多种细胞类型分化，包括平滑肌细胞、血管内皮细胞、胞、肝干细胞样细胞、肾实质细胞、神经元样细胞、神经上皮样细胞等(De Chi 2014; Heer et al, 2013; Im et al, 2012; Nazm Bojnordi, Movahedin, Tiraihi, & Jav Wang et al, 2012; Wu, He, Li, & Liu, 2008)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠精原干细胞体外培养的一般特性[J]. 李德雪,张学明,李子义,赖良学,文兴豪,杜惜明,岳占碰. 中国兽医学报. 2001(02)
本文编号：3475557
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SSC的自我更新以及增殖(Mitsuruetal.2015)
白血病锌指蛋白、ERM/Etv 等。在小鼠睾丸中，支持细胞会分泌胶质细胞源神经营养因子（GDNF）(Sun, Zhang, & Jin, 2011)，其主要作用是调节精原干细胞的增殖与分化比例。系列研究表明 GDNF 在精原干细胞的自我更新中起了非常关键的作用，是体外培养精原干细胞时必需添加的细胞因子之一(Kanatsu-Shinohara, Ogonuki, et al, 2005; Oatley,Avarbock, Telaranta, Fearon, & Brinster, 2006)。精原干细胞特性的维持以及功能的发挥离不开其微环境，在睾丸中，除了精原干细胞以及各级生精细胞的存在之外，还存在别的细胞类型，如支持细胞，间质细胞，管周肌样细胞等等（图 1-2）。
SCF 则是一种多肽生长因子，是受体原癌基因蛋白质(c-Kit)的配体c-Kit 可维持分化 A 型精原细胞的状态，对未分化的 A 型精原细胞则没有影aldi, Rossi, Dolci, Ripamonti, & Geremia, 2002)。维生素 C 是一种抗氧化剂，可以超氧自由基，从而提高精子活力，最终保护精子免受伤害（李德雪等，2001）。早期研究中，SSCs 一直被认为是单能的(Simon, Hess, & Cooke, 2010)，然而近来越多的研究表明其实际为多潜能干细胞。早期研究发现，SSC 在培养过程中重编程形成 ES 样多潜能干细胞，尽管自发重编程的效率相对较低(An, Zheng,, 2017; Guan et al, 2006a; Kanatsu-Shinohara et al, 2004; Ko et al, 2009; Seandel et)，随后又有研究表明，当抑制 CDH1 以及 TGFβ通路时，可以通过促进间质细细胞转化的过程最终提高精原干细胞自发重编程的效率（图 1-3）。因此，精原也被认为是一种多潜能细胞的理想来源(Kanatsu-Shinohara & Shinohara, 20n et al, 2010)，其可以向多种细胞类型分化，包括平滑肌细胞、血管内皮细胞、胞、肝干细胞样细胞、肾实质细胞、神经元样细胞、神经上皮样细胞等(De Chi 2014; Heer et al, 2013; Im et al, 2012; Nazm Bojnordi, Movahedin, Tiraihi, & Jav Wang et al, 2012; Wu, He, Li, & Liu, 2008)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠精原干细胞体外培养的一般特性[J]. 李德雪,张学明,李子义,赖良学,文兴豪,杜惜明,岳占碰. 中国兽医学报. 2001(02)
本文编号：3475557
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