大片形吸虫两种ES产物的重组蛋白对山羊PBMCs功能的影响
发布时间：2021-11-04 13:38
片形吸虫病（fascioliasis）是由片形科、片形属（Fasciola）吸虫,如大片形吸虫（Fasciola gigantica）、肝片形吸虫（Fasciola hepatica）及其中间型（intermediate form）的感染引起的一种人兽共患寄生虫病。大片形吸虫病分布于热带和亚热带地区,肝片形吸虫病主要分布于温带地区,给畜牧业生产带来巨大的经济损失,同时严重威胁公共卫生安全。钙结合蛋白（Calcium-binding protein,CaBp）属于蠕虫钙结合蛋白家族,具有钙结合位点,可通过与不同信号分子的结合在多种生物学过程中发挥作用,参与调节细胞存活、增殖、黏附、迁移、血管新生等多种肿瘤特征性生物学过程。亮氨酸氨基肽酶（Leucine aminopeptidases,LAPs）是一种广泛存在于原核和真核细胞的金属蛋白酶,是从蛋白质和肽段切割N端残基而发挥作用的胞浆酶,具有消化、与宿主互作、蛋白质周转、肿瘤生长、组织侵袭和新陈代谢等多种功能。本实验通过采取形态学与分子生物学相结合的方法来进行大片形吸虫的鉴定。鉴定正确后,以肝片形吸虫CaBp2（Fh CaBp2）的序列为参...
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 片形吸虫病
1.1.1 病原及其生活史
1.1.2 流行情况及危害
1.1.3 诊断方法及防控措施
1.2 排泄分泌产物的概述
1.3 排泄分泌产物在寄生虫免疫功能中研究进展
1.4 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 大片形吸虫的鉴定
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 大片形吸虫CaBp2基因的克隆、表达
2.2.1 材料
2.2.2 方法
2.3 重组FgCaBp2及重组FgLAP蛋白免疫活性研究
2.3.1 材料
2.3.2 方法
2.4 两种蛋白对山羊外周血单个核细胞的作用
2.4.1 材料
2.4.2 方法
3 结果
3.1 大片形吸虫鉴定
3.1.1 片形吸虫虫体形态学鉴定结果
3.1.2 片形吸虫分子生物学鉴定结果
3.2 FgCaBp2基因的克隆表达结果
3.2.1 FgCaBp2基因克隆结果
3.2.2 FgCaBp2基因生物信息学分析结果
3.2.3 重组克隆质粒pMD19-T-rFgCaBp2的鉴定
3.2.4 重组表达质粒pET-30a-rFgCaBp2的鉴定
3.2.5 目的蛋白的表达与分析
3.3 重组FgCaBp2及重组Fg LAP蛋白的免疫活性
3.3.1 两种蛋白与人工感染山羊的阳性血清的Western-blot分析
3.3.2 间接ELISA检测两种蛋白免疫家兔制备的多克隆抗体滴度与最佳稀释度
3.3.3 两种蛋白与相应兔源多克隆抗体的Western-blot分析
3.4 两种蛋白对山羊外周血单个核细胞的作用
3.4.1 两种蛋白与山羊外周血单个核细胞的结合作用
3.4.2 两种蛋白对山羊PBMCs细胞因子分泌及总NO的产生的影响
3.4.3 两种蛋白对山羊PBMCs的增殖与迁移作用
3.4.4 两种蛋白对山羊PBMCs凋亡及山羊单核细胞吞噬功能的影响
4 讨论
4.1 大片形吸虫的鉴定
4.2 rFgCaBp2基因的克隆、表达与纯化
4.3 rFgCaBp2蛋白与rFgLAP蛋白的免疫活性
4.4 两种蛋白对山羊PBMCs功能的影响
4.4.1 两种蛋白与山羊外周血单个核细胞的体外结合
4.4.2 两种蛋白对山羊PBMCs细胞因子分泌的影响及总NO的产生
4.4.3 两种蛋白对山羊PBMCs的增殖与迁移作用
4.4.4 两种蛋白对山羊PBMCs的凋亡与山羊单核细胞吞噬功能的影响
5 结论
参考文献
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]旋毛虫ES抗原对小鼠腹腔巨噬细胞NOD1受体通路影响的研究[J]. 李晓云,韩彩霞,阴玥,胡静,张妍,孟诗,孟小晴,宋铭忻. 中国预防兽医学报. 2019(01)
[2]华支睾吸虫钙结合蛋白Cs16的重组表达及血清诊断应用的初步评价[J]. 濮珏彪,唐莉莉,殷岑楠,杜新月,吴健桦,赵蔚,刘登宇,王兆军,吴琛耘. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(03)
[3]捻转血矛线虫苏氨酸醛缩酶结构域包含蛋白的克隆与表达及其体外对山羊外周血单个核细胞功能的影响[J]. 温玉玲,王玉俭,吴玲燕,严若峰,徐立新,宋小凯,李祥瑞. 南京农业大学学报. 2017(03)
[4]片形吸虫与片形吸虫病(四)[J]. 张毅强. 广西畜牧兽医. 2011(06)
[5]片形吸虫与片形吸虫病(一)[J]. 张毅强. 广西畜牧兽医. 2011(03)
博士论文
[1]甘肃省牦牛肝片形吸虫病血清学流行病学调查及不同发育期大片形吸虫转录组和MicroRNA组研究[D]. 张晓轩.吉林农业大学 2017
硕士论文
[1]大片吸虫两种排泄分泌蛋白的克隆、表达及其对山羊外周血单个核细胞功能影响的研究[D]. 田艾灵.中国农业科学院 2018
[2]大片形吸虫ES与宿主互作抗原的筛选、鉴定及分析[D]. 岳东梅.黑龙江八一农垦大学 2017
[3]云南大理市片形吸虫的分子鉴定及部分线粒体DNA的序列研究[D]. 郭田田.昆明医科大学 2016
本文编号：3475840
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 片形吸虫病
1.1.1 病原及其生活史
1.1.2 流行情况及危害
1.1.3 诊断方法及防控措施
1.2 排泄分泌产物的概述
1.3 排泄分泌产物在寄生虫免疫功能中研究进展
1.4 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 大片形吸虫的鉴定
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 大片形吸虫CaBp2基因的克隆、表达
2.2.1 材料
2.2.2 方法
2.3 重组FgCaBp2及重组FgLAP蛋白免疫活性研究
2.3.1 材料
2.3.2 方法
2.4 两种蛋白对山羊外周血单个核细胞的作用
2.4.1 材料
2.4.2 方法
3 结果
3.1 大片形吸虫鉴定
3.1.1 片形吸虫虫体形态学鉴定结果
3.1.2 片形吸虫分子生物学鉴定结果
3.2 FgCaBp2基因的克隆表达结果
3.2.1 FgCaBp2基因克隆结果
3.2.2 FgCaBp2基因生物信息学分析结果
3.2.3 重组克隆质粒pMD19-T-rFgCaBp2的鉴定
3.2.4 重组表达质粒pET-30a-rFgCaBp2的鉴定
3.2.5 目的蛋白的表达与分析
3.3 重组FgCaBp2及重组Fg LAP蛋白的免疫活性
3.3.1 两种蛋白与人工感染山羊的阳性血清的Western-blot分析
3.3.2 间接ELISA检测两种蛋白免疫家兔制备的多克隆抗体滴度与最佳稀释度
3.3.3 两种蛋白与相应兔源多克隆抗体的Western-blot分析
3.4 两种蛋白对山羊外周血单个核细胞的作用
3.4.1 两种蛋白与山羊外周血单个核细胞的结合作用
3.4.2 两种蛋白对山羊PBMCs细胞因子分泌及总NO的产生的影响
3.4.3 两种蛋白对山羊PBMCs的增殖与迁移作用
3.4.4 两种蛋白对山羊PBMCs凋亡及山羊单核细胞吞噬功能的影响
4 讨论
4.1 大片形吸虫的鉴定
4.2 rFgCaBp2基因的克隆、表达与纯化
4.3 rFgCaBp2蛋白与rFgLAP蛋白的免疫活性
4.4 两种蛋白对山羊PBMCs功能的影响
4.4.1 两种蛋白与山羊外周血单个核细胞的体外结合
4.4.2 两种蛋白对山羊PBMCs细胞因子分泌的影响及总NO的产生
4.4.3 两种蛋白对山羊PBMCs的增殖与迁移作用
4.4.4 两种蛋白对山羊PBMCs的凋亡与山羊单核细胞吞噬功能的影响
5 结论
参考文献
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]旋毛虫ES抗原对小鼠腹腔巨噬细胞NOD1受体通路影响的研究[J]. 李晓云,韩彩霞,阴玥,胡静,张妍,孟诗,孟小晴,宋铭忻. 中国预防兽医学报. 2019(01)
[2]华支睾吸虫钙结合蛋白Cs16的重组表达及血清诊断应用的初步评价[J]. 濮珏彪,唐莉莉,殷岑楠,杜新月,吴健桦,赵蔚,刘登宇,王兆军,吴琛耘. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(03)
[3]捻转血矛线虫苏氨酸醛缩酶结构域包含蛋白的克隆与表达及其体外对山羊外周血单个核细胞功能的影响[J]. 温玉玲,王玉俭,吴玲燕,严若峰,徐立新,宋小凯,李祥瑞. 南京农业大学学报. 2017(03)
[4]片形吸虫与片形吸虫病(四)[J]. 张毅强. 广西畜牧兽医. 2011(06)
[5]片形吸虫与片形吸虫病(一)[J]. 张毅强. 广西畜牧兽医. 2011(03)
博士论文
[1]甘肃省牦牛肝片形吸虫病血清学流行病学调查及不同发育期大片形吸虫转录组和MicroRNA组研究[D]. 张晓轩.吉林农业大学 2017
硕士论文
[1]大片吸虫两种排泄分泌蛋白的克隆、表达及其对山羊外周血单个核细胞功能影响的研究[D]. 田艾灵.中国农业科学院 2018
[2]大片形吸虫ES与宿主互作抗原的筛选、鉴定及分析[D]. 岳东梅.黑龙江八一农垦大学 2017
[3]云南大理市片形吸虫的分子鉴定及部分线粒体DNA的序列研究[D]. 郭田田.昆明医科大学 2016
本文编号：3475840
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