TGFβ2和PPP3CA基因在黔北麻羊性腺轴组织表达及对卵巢颗粒细胞的调控研究

发布时间：2021-11-05 02:21

　　旨在对转录组测序中单羔组对多羔组TGFβ2和PPP3CA基因的上、下调结果进行验证,并探究黔北麻羊TGFβ2和PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞的调控机制。本研究以单、多羔黔北麻羊母羊为试验对象。通过RT-qPCR技术检测TGFβ2与PPP3CA基因在单、多羔黔北麻羊性腺轴中的表达水平;构建目的基因真核表达载体。培养黔北麻羊卵巢颗粒细胞,并利用脂质体转染法将pEGFP-N3-TGFβ2、pEGFP-N3-PPP3CA重组质粒导入卵巢颗粒细胞,检测培养基中雌二醇（E2）、孕酮（P4）的浓度。利用CCK-8和Annexin V-FITC法检测TGFβ2、PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响。随后,利用RT-qPCR从细胞水平检测超表达TGFβ2、PPP3CA基因对TGFβ2、PPP3CA、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因表达的影响。RT-qPCR结果表明,TGFβ2与PPP3CA基因在被检测的组织中均有表达,且在单羔组中的表达量普遍高于多羔组;免疫荧光法证实,所培养的细胞为黔北麻羊卵巢颗粒细胞;TGFβ2与PPP3CA基因真核表达质粒导入细胞后,在极显著提高TGFβ2与... 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(11)北大核心CSCD

【文章页数】：11 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验样品
    1.2 主要试剂
    1.3 引物设计
    1.4 黔北麻羊性腺轴组织RNA提取及cDNA合成
    1.5 RT-qPCR检测TGFβ2、PPP3CA基因在黔北麻羊性腺轴组织中的表达水平
    1.6 TGFβ2、PPP3CA基因真核表达载体构建
    1.7 黔北麻羊卵巢颗粒细胞的分离与鉴定
        1.7.1 卵巢颗粒细胞的分离培养
        1.7.2 卵巢颗粒细胞的鉴定
    1.8 重组质粒的转染
    1.9 超表达TGFβ2、PPP3CA基因对雌二醇、孕酮生成的影响
    1.10 超表达TGFβ2、PPP3CA基因对颗粒细胞增殖和凋亡的影响
    1.11 超表达TGFβ2、PPP3CA基因对繁殖相关基因表达的影响
    1.12 数据处理及分析方法
2 结 果
    2.1 TGFβ2、PPP3CA基因在黔北麻羊不同组织中的表达
    2.2 重组质粒的双酶切鉴定
    2.3 卵巢颗粒细胞分离培养及鉴定
        2.3.1 卵巢颗粒细胞分离培养
        2.3.2 卵巢颗粒细胞鉴定
    2.4 重组质粒转染效率检测
    2.5 超表达TGFβ2、PPP3CA基因对雌二醇、孕酮生成的影响
    2.6 超表达TGFβ2、PPP3CA基因对颗粒细胞增殖的影响
    2.7 超表达TGFβ2、PPP3CA基因对颗粒细胞凋亡的影响
    2.8 超表达TGFβ2、PPP3CA基因对繁殖相关基因表达的影响
3 讨 论
4 结 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]SMAD1基因对黔北麻羊卵巢颗粒细胞的影响及组织表达分析[J]. 敖叶,陈祥,周志楠,张艳,洪磊,韦仕南,吴雨,唐文.  畜牧兽医学报. 2020(07)
[2]TGF-β家族成员调控家禽卵泡发育的研究进展及展望[J]. 李琴,王启贵.  中国家禽. 2019(19)
[3]滋阴补阳序贯法联合西药对卵巢储备功能下降排卵障碍性不孕大鼠TGF-β1/Smads信号通路的影响[J]. 孙玉英,陈淑萍,谈勇.  中南大学学报(医学版). 2018(10)
[4]绵羊CYP19基因卵巢启动子的克隆及其表达活性研究[J]. 孙洪新,张英杰,刘月琴,陈晓勇,敦伟涛.  畜牧兽医学报. 2015(09)
[5]钙调磷酸酶催化亚基A基因（PPP3CA）在不同品种鸭发育早期肌肉中的表达及其与肌纤维特性的相关性[J]. 单艳菊,宋迟,束婧婷,刘宏祥,徐文娟,陶志云,胡艳,李慧芳.  农业生物技术学报. 2015(02)
[6]TGF-β/Smads信号转导通路的研究进展[J]. 张勇,秦娜,于斌.  广西医科大学学报. 2009(01)
[7]蛋白磷酸酶2A的结构、功能和活性调节[J]. 刘卫军,沈瑛,丁健.  生物化学与生物物理学报. 2003(02)

博士论文
[1]神经钙调蛋白磷酸酶PPP3CA特异性siRNA对VEGF和FGF2诱导的羊胎盘动脉血管内皮细胞殖的影响[D]. 王凯.大连医科大学 2008



本文编号：3476875