禽网状内皮组织增生病病毒诱导宿主天然免疫反应及感染法氏囊转录组学的研究

发布时间：2021-11-06 21:32

　　禽网状内皮组织增生病(Reticuloendotheliosis,RE)是由反转录科禽类C型反转录病毒禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起的禽类重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。临床中REV感染引起的免疫抑制给养禽业带来重大的损失。近年来,REV的感染流行大多呈现与马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)和J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)等免疫抑制性病毒混合感染,这使得疫病的诊断和防控难度加大。因此该疾病的防控对养禽业的健康发展和生物制品质量的提高具有重要影响。目前,关于REV感染宿主引起的宿主免疫反应机制,以及病毒的致病机理尚不清楚。本研究以REV HA1101病毒株感染鸡外周血淋巴细胞和人工接种SPF鸡为研究对象,通过荧光定量PCR、转录组学和生物信息学等研究方法,初步探讨了病毒感染过程中可能发挥作用的细胞因子及相关信号通路,为进一步了解REV感染宿主后引起的免疫抑制和致病机理提供重要的线索。一、REV感染外周血淋巴细胞对天然免疫相关基因转...

【文章来源】： 扬州大学江苏省

【文章页数】：84 页

【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
文献综述
    1. 禽网状内皮组织增生病
        1.1 禽网状内皮组织增生病病毒形态结构及理化特性
        1.2 禽网状内皮组织增生病病毒的基因结构与功能
        1.3 REV临床症状和病理变化
        1.4 REV免疫抑制机理
        1.5 流行病学
        1.6 诊断方法
        1.7 REV的防治
    2. 转录组学技术在动物性病毒研究中的应用
    3. 先天免疫抗病毒的研究进展
    4. 本研究的目的与意义
研究内容一 REV感染对外周血淋巴细胞中天然免疫相关基因转录的影响
    1. 材料与方法
        1.1 细胞和病毒
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 主要试剂配制
        1.5 鸡外周血淋巴细胞的分离
        1.6 病毒感染
        1.7 引物序列
        1.8 Real-time PCR检测
    2. 实验结果
        2.1 REV感染鸡外周血淋巴细胞中病毒复制情况
        2.2 荧光定量PCR检测天然免疫受体相关分子表达情况
        2.3 荧光定量PCR检测天然免疫信号通路相关分子表达情况
        2.4 荧光定量PCR检测炎症免疫相关细胞因子表达情况
        2.5 荧光定量PCR检测抗病毒相关分子表达情况
    3. 讨论
研究内容二 REV对SPF鸡主要免疫器官中免疫相关细胞因子表达的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验动物与病毒
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 实验动物分组和病毒接种
        1.5 脏器的采集及处理
        1.6 RNA的提取
        1.7 RNA的浓度测定及反转录
        1.8 引物序列
        1.9 Real-time PCR检测
    2 结果
        2.1 荧光定量PCR检测病毒在不同脏器中的复制情况
        2.2 荧光定量PCR检测REV感染PBL免疫相关分子的表达情况
        2.3 荧光定量PCR检测REV感染胸腺免疫相关分子的表达情况
        2.4 荧光定量PCR检测脾脏中免疫相关分子的表达情况
        2.5 荧光定量PCR检测REV感染盲肠扁桃体中免疫相关分子的表达情况
        2.6 荧光定量PCR检测REV感染法氏囊免疫相关分子的表达情况
    3 讨论
研究内容三 REV感染SPF鸡法氏囊的转录组学研究
    1 材料与方法
        1.1 实验动物与病毒
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 病毒感染法氏囊组织的收集
        1.5 生物信息学分析
        1.6 引物序列
        1.7 Real-time PCR检测
    2 结果
        2.1 测序数据质量评估
        2.2 差异表达基因的GO富集分析
        2.3 REV感染引起的宿主应答反应
    3 讨论
        3.1 宿主防卫功能相关的差异表达基因
        3.2 细胞因子相关的差异表达基因
        3.3 宿主肿瘤相关的差异表达基因
        3.4 信号通路分析
研究内容四 Toll样受体配体对REV复制的影响
    1 材料与方法
        1.1 细胞和病毒
        1.2 主要试剂
        1.3 主要实验仪器
        1.4 主要试剂的配制
        1.5 CEF的制备
        1.6 REV感染CEF前配体刺激
        1.7 REV感染CEF中配体刺激
        1.8 REV感染CEF后配体刺激
        1.9 引物序列
        1.10 间接免疫荧光检测配体处理CEF对REV复制的影响
        1.11 Real-time PCR检测
    2 结果
        2.1 Toll样受体配体预刺激细胞对REV及抗病毒相关分子的影响
        2.2 Toll样受体配体与REV同时刺激细胞对病毒及抗病毒相关分子的影响
        2.3 REV感染后Toll样受体配体刺激细胞对REV复制及抗病毒分子的影响
    3 讨论
全文总结
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]禽网状内皮组织增生症病毒感染鸡胚成纤维细胞的转录组学分析 [J]. 王静,杨彦超,李凯,高立,王永强,张艳萍,崔红玉,刘长军,祁小乐,高玉龙,潘青,王笑梅.  中国家禽. 2018(14)
[2]poly(I:C)刺激鸡胚胎成纤维细胞产生外泌体的抗新城疫病毒活性 [J]. 丁伟,徐小洪,丁佳欣,李金斗,丁壮.  中国兽医学报. 2018(06)
[3]禽呼肠孤病毒强毒株和弱毒疫苗株感染鸡肝癌细胞的转录组学分析 [J]. 黄莉,谢芝勋,谢丽基,黄娇玲,谢志勤,范晴,邓显文,罗思思,张艳芳,曾婷婷,王盛,张民秀.  畜牧兽医学报. 2017(11)
[4]IL-7的多样化功能研究现状及进展[J]. 余东山,席文娜,孙水林.  国际免疫学杂志. 2012 (06)
[5]整合禽网状内皮组织增殖病病毒基因的鸡痘病毒野毒株致病性研究 [J]. 孙洪磊,车国喜,秦梅,杨凤,李宏民,刘思当.  中国兽医学报. 2011(11)
[6]Toll样受体介导的先天性抗病毒免疫反应研究进展 [J]. 何小兵,房永祥,贾怀杰,陈国华,曾爽,瞿惠玲,景志忠.  细胞与分子免疫学杂志. 2011(06)
[7]鸡外周血淋巴细胞的分离和体外培养 [J]. 谢昆,蒋成砚,全舒舟,王冉.  中国家禽. 2011(11)
[8]呼吸道合胞病毒感染上调Toll样受体7和3基因的早期表达(英文) [J]. 黄升海,魏伟,云云.  微生物学报. 2009(02)
[9]禽网状内皮组织增生病病毒分子生物学特性及其免疫抑制机理 [J]. 马春霞,郑世民.  中国家禽. 2007(22)
[10]干扰素的分子生物学机制研究进展 [J]. 曲建慧,张玲霞.  国际流行病学传染病学杂志. 2006(01)

博士论文
[1]J亚群禽白血病病毒与宿主细胞相互作用机制研究[D]. 王琳.扬州大学 2018
[2]禽网状内皮组织增生病病毒转录组学及免疫抑制机理的研究[D]. 缪佶.扬州大学 2016
[3]马立克氏病病毒RB1B株感染鸡的蛋白质组、转录组学及天然免疫机理研究[D]. 胡序明.扬州大学 2014
[4]禽网状内皮组织增生病基因工程亚单位疫苗及DNA疫苗的研制[D]. 李凯.中国农业科学院 2014
[5]J亚群禽白血病病毒JS09GY3株感染特性及感染鸡法氏囊转录组学分析[D]. 杭柏林.扬州大学 2014
[6]马立克氏病病毒诱导的免疫应答基因表达谱及miRNA对肿瘤发生的调节作用[D]. 徐明.吉林大学 2011
[7]禽网状内皮组织增生病病毒与J-亚群白血病病毒的致病性及其疫苗研究[D]. 孙淑红.山东农业大学 2007

硕士论文
[1]CEF感染REV后部分染色体微卫星不稳定性的研究[D]. 梁芳.南京农业大学 2013
[2]REV感染SPF鸡中IL-6、IL-18和IFN-γ的定量检测[D]. 陈雪锋.山东农业大学 2012
[3]ALV-J和REV诱导雏鸡胸腺和法氏囊细胞凋亡的研究[D]. 刘玉洁.山东农业大学 2006
[4]鸡IFN-γ基因的克隆与原核表达[D]. 鲍鸣.安徽农业大学 2005



本文编号：3480561