猪轮状病毒Gottfried株和SB-1A株ΔVP8*蛋白免疫原性分析及其联合免疫佐剂研究
发布时间：2021-11-06 22:37
猪轮状病毒（Porcine rotavirus,PRV）是导致仔猪发生病毒性腹泻的主要病原之一。仔猪轮状病毒腹泻危害我国养猪业,每年造成的经济损失巨大。现行疫苗在控制本病的发生与传播上效果不佳,因此,开发新型猪轮状病毒疫苗是兽医工作者义不容辞的责任。VP4是轮状病毒的主要抗原蛋白,决定了病毒的P型。它能和VP7一样独立地诱导中和抗体,其中VP4经胰酶裂解后形成的VP8*片段,含有VP4的主要中和性抗原表位,皆为线性且较为保守。理论上同一P型的轮状病毒疫苗可以诱导抗不同G型的异型免疫,而从各大洲腹泻仔猪身上分离到的轮状病毒大都是类Gottfried型（P[6]型）或者类OSU型（P[7]型）。所以我们基于轮状病毒P型的研究策略,并根据VP8*抗原表位图谱,克隆和表达猪轮状病毒Gottfried株（基因型G4P[6]）和SB-1A株（基因型G4P[7]）截短的VP8*基因（△VP8*,64-223位氨基酸）。同时分别向两种△VP8*基因的上游引入编码破伤风毒素T细胞表位P2（破伤风毒素的830844位氨基酸）的序列,原核克隆表达P2-△VP8*基因。将四种重组蛋白的可...
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
成熟的RV粒子（三层衣壳）结构示意图
质粒的鉴定组质粒的酶切鉴定和菌液PCR鉴定图 2-1 PRV Gottfried 株和 SB-1A 株△VP8*、P2-△VP8*基因 PCR 产物电泳L2000 Marker；1: Gottfried △VP8*基因的 PCR 产物；2: SB-1A △VP8*基物；3:阴性对照2000 Marker；1: P2-Gottfried △VP8*基因的 PCR 产物；2: P2-SB-1A △VP8产物；3:阴性对照1 Agarose gel electrophoresis of PCR products of PRV Gottfried strain and SB-1VP8* and P2-△VP8* gene DL2000 Marker; 1: PCR product of Gottfried △VP8* gene; 2: PCR product ofVP8* gene; 3: negative controlL2000 Marker; 1: PCR product of P2-Gottfried △VP8* gene; 2: PCR product △VP8* gene; 3: negative control
（2）重组质粒的测序鉴定2.3.2（1）中鉴定正确的四种重组质粒送北京六和华大基因科技股份有限公司测序果见附录。（3）△VP8*基因的同源性比较0bp0bp0bp0bp0bp0bpM 1 2 3图 2-3 重组质粒 pET28a-P2-Gottfried △VP8*和pET28a-P2-SB-1A △VP8*的菌液 PCR 鉴定M: DL2000 Marker；1: pET28a-P2-Gottfried △VP8*的菌液 PCR鉴定产物；2: pET28a-P2-SB-1A △VP8*的菌液 PCR 鉴定产物；3: 阴性对照Fig. 2-3 Bacteria liquid PCR identification of the recombinantplasmids pET28a-P2-Gottfried △VP8* and pET28a-P2-SB-1A △VP8*
【参考文献】：
期刊论文
[1]2012年1～8月生猪市场分析及后市预测[J]. 陈艳丽. 农业展望. 2012(09)
[2]仔猪轮状病毒腹泻病的诊断与防治[J]. 洪厚成. 中国猪业. 2012(03)
[3]新型免疫佐剂-CpG寡脱氧核苷酸[J]. 李娜,赵建增,贺洪,王玉玲,曾亮明. 中国兽药杂志. 2008(10)
[4]铝佐剂作用机制及其在人用H5N1灭活疫苗中的辅佐作用[J]. 梁存军,王健,吕凤林,黎晓敏,熊仲良,张一. 生物工程学报. 2008(01)
[5]两种CpG ODN佐剂对小鼠白血病局灶瘤的抗瘤作用研究[J]. 何爱丽,陈虹,张王刚,曹星梅,赵万红. 中国实验血液学杂志. 2007(05)
[6]仔猪轮状病毒性腹泻的研究进展[J]. 王玲,蒲万霞,常惠芸,华兰英,索朗斯珠. 动物医学进展. 2006(10)
[7]仔猪轮状病毒性腹泻的调查与防治[J]. 程健频,李昌铭,魏锦龙. 甘肃畜牧兽医. 2005(05)
[8]轮状病毒感染研究现状[J]. 刘崇海,魏钰书. 实用医院临床杂志. 2005(03)
[9]猪轮状病毒感染研究进展[J]. 张雷,卫广森. 现代畜牧兽医. 2005(04)
[10]原核系统可溶性表达策略[J]. 刘爽,胡宝成. 生物技术通讯. 2005(02)
博士论文
[1]牛轮状病毒病原流行病学调查、基因重配毒株的构建及二价减毒株的免疫原性评价[D]. 常继涛.中国农业科学院 2009
本文编号：3480654
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
成熟的RV粒子（三层衣壳）结构示意图
质粒的鉴定组质粒的酶切鉴定和菌液PCR鉴定图 2-1 PRV Gottfried 株和 SB-1A 株△VP8*、P2-△VP8*基因 PCR 产物电泳L2000 Marker；1: Gottfried △VP8*基因的 PCR 产物；2: SB-1A △VP8*基物；3:阴性对照2000 Marker；1: P2-Gottfried △VP8*基因的 PCR 产物；2: P2-SB-1A △VP8产物；3:阴性对照1 Agarose gel electrophoresis of PCR products of PRV Gottfried strain and SB-1VP8* and P2-△VP8* gene DL2000 Marker; 1: PCR product of Gottfried △VP8* gene; 2: PCR product ofVP8* gene; 3: negative controlL2000 Marker; 1: PCR product of P2-Gottfried △VP8* gene; 2: PCR product △VP8* gene; 3: negative control
（2）重组质粒的测序鉴定2.3.2（1）中鉴定正确的四种重组质粒送北京六和华大基因科技股份有限公司测序果见附录。（3）△VP8*基因的同源性比较0bp0bp0bp0bp0bp0bpM 1 2 3图 2-3 重组质粒 pET28a-P2-Gottfried △VP8*和pET28a-P2-SB-1A △VP8*的菌液 PCR 鉴定M: DL2000 Marker；1: pET28a-P2-Gottfried △VP8*的菌液 PCR鉴定产物；2: pET28a-P2-SB-1A △VP8*的菌液 PCR 鉴定产物；3: 阴性对照Fig. 2-3 Bacteria liquid PCR identification of the recombinantplasmids pET28a-P2-Gottfried △VP8* and pET28a-P2-SB-1A △VP8*
【参考文献】：
期刊论文
[1]2012年1～8月生猪市场分析及后市预测[J]. 陈艳丽. 农业展望. 2012(09)
[2]仔猪轮状病毒腹泻病的诊断与防治[J]. 洪厚成. 中国猪业. 2012(03)
[3]新型免疫佐剂-CpG寡脱氧核苷酸[J]. 李娜,赵建增,贺洪,王玉玲,曾亮明. 中国兽药杂志. 2008(10)
[4]铝佐剂作用机制及其在人用H5N1灭活疫苗中的辅佐作用[J]. 梁存军,王健,吕凤林,黎晓敏,熊仲良,张一. 生物工程学报. 2008(01)
[5]两种CpG ODN佐剂对小鼠白血病局灶瘤的抗瘤作用研究[J]. 何爱丽,陈虹,张王刚,曹星梅,赵万红. 中国实验血液学杂志. 2007(05)
[6]仔猪轮状病毒性腹泻的研究进展[J]. 王玲,蒲万霞,常惠芸,华兰英,索朗斯珠. 动物医学进展. 2006(10)
[7]仔猪轮状病毒性腹泻的调查与防治[J]. 程健频,李昌铭,魏锦龙. 甘肃畜牧兽医. 2005(05)
[8]轮状病毒感染研究现状[J]. 刘崇海,魏钰书. 实用医院临床杂志. 2005(03)
[9]猪轮状病毒感染研究进展[J]. 张雷,卫广森. 现代畜牧兽医. 2005(04)
[10]原核系统可溶性表达策略[J]. 刘爽,胡宝成. 生物技术通讯. 2005(02)
博士论文
[1]牛轮状病毒病原流行病学调查、基因重配毒株的构建及二价减毒株的免疫原性评价[D]. 常继涛.中国农业科学院 2009
本文编号：3480654
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