MiR-186-5p对绵羊黑色素细胞黑色素生成的调控

发布时间：2021-11-07 12:52

　　黑色素合成是极其复杂的过程,其中涉及多种基因和miRNAs的参与。miR-186-5p在绵羊不同毛色皮肤中差异表达,说明其可能与毛色形成有关,生物信息学预测和绵羊不同毛色皮肤中miR-186-5p和Mitf的差异表达间接说明二者可能存在靶向关系,双荧光报告直接证实了二者的靶向关系。为了证实miR-186-5p在黑色素形成中的作用,本研究构建miR-186-5p真核表达载体,并转染绵羊黑素细胞。结果显示,miR-186-5p通过与Mitf mRNAs的3′UTR结合抑制Mitf的表达和翻译。MITF是Tyr基因家族的调节因子。实时荧光聚合酶链反应（quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR）和Western免疫印迹结果表明,过表达miR-186-5p引起的MITF下调抑制了TYR、TYRP1和TYRP2的表达。其中,mRNA表达水平分别下降34%、66%和52%;蛋白质表达水平分别下降32%、6%和46%。分光光度检测结果显示,黑色素含量下降59%倍。上述结果表明,miR-186-5p通过抑制靶基因Mitf的表达,抑... 

【文章来源】：中国生物化学与分子生物学报. 2020,36(08)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 皮肤样品的采集
    1.3 靶基因预测及筛查
    1.4 双荧光报告验证miR-186-5p与Mitf的靶向关系
    1.5 黑素细胞的复苏与转染
    1.6 黑色素含量测定
    1.7 miR-186-5p原位杂交检测
    1.8 qRT-PCR检测
    1.9 Western印迹检测
    1.10 免疫组织化学检测
    1.11 统计学方法
2 结果
    2.1 miR-186-5p和Mitf在不同毛色绵羊皮肤中的表达差异显著
    2.2 生物信息学预测Mitf是miR-186-5p的靶基因
    2.3 双荧光报告检测证实Mitf是miR-186-5p的靶基因
    2.4 绵羊黑素细胞转染miR-186-5p抑制黑色素的生成
    2.5 原位杂交检测miR-186-5p在绵羊黑素细胞的细胞质和细胞核中表达
    2.6 转染miR-186-5p后相关基因mRNA表达水平降低
    2.7 转染miR-186-5p后相关蛋白质表达水平降低
    2.8 免疫组化检测转染miR-186-5p抑制了绵羊黑素细胞中MITF的表达
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-186-5p对绵羊黑色素细胞迁移增殖的影响[J]. 许冬梅,赵宇军,杜斌,张亚玲,朱芷葳,谢建山,范瑞文,于秀菊,董常生.  畜牧兽医学报. 2017(11)
[2]miR-146a抑制酪氨酸酶基因家族在小鼠黑色素细胞中表达[J]. 杜斌,许冬梅,张亚玲,范瑞文,刘学贤,于秀菊,赵宇军,董常生.  中国生物化学与分子生物学报. 2017(01)
[3]miR-324-3p通过调控MC1R基因影响黑色素的形成[J]. 曾庆宝,范瑞文,张秋月,郝晓娟,武良琦,任玉红.  畜牧兽医学报. 2016(07)
[4]过表达miR-193b对黑色素细胞中MITF和TYR表达的影响[J]. 张亚玲,许冬梅,杜斌,谢建山,范瑞文,于秀菊,朱芷葳,董常生.  畜牧兽医学报. 2016(05)
[5]Hsa-miR-186在结肠癌细胞中的表达及作用[J]. 陈芳,周畅,陆艳霞,袁理,彭皤莉,郑林,李学农.  南方医科大学学报. 2013(05)
[6]MicroRNAs在动物皮肤和毛发发育中的调控作用[J]. 刘丹丹,赫晓燕,郝欢庆.  中国生物化学与分子生物学报. 2010(09)



本文编号：3481886