鸡枞菌和云芝中α-半乳糖苷酶的研究
发布时间：2021-11-08 18:44
α-半乳糖苷酶是一类可以催化水解含有α-半乳糖苷键物质的酶类,因此被应用在饲料、食品等领域用来降解α-半乳糖苷类抗营养因子,该酶广泛地分布在植物,动物和微生物中,现已筛选出不少产α-半乳糖苷酶活性高的微生物菌株,并进行了广泛深入的研究。本论文从多种食用菌的子实体中检测到α-半乳糖苷酶,以高活性的α-半乳糖苷酶的食用菌的子实体和发酵液作为研究对象,提取出子实体和发酵液中的α-半乳糖苷酶,并研究其酶学性质及对寡糖类物质的降解效果,同时研究具有α-半乳糖苷酶活性的菌糠作为饲料的可行性。论文的主要研究结果如下:综合运用各种纯化手段,从鸡枞菌子实体中提纯一种α-半乳糖苷酶,该酶是一种分子量为72 kDa的单亚基蛋白,纯化倍数为146倍,比活为3135 U/mg。该酶作用底物pNPG的最适pH为5.0,在酸性条件下稳定性好,最适反应温度为60℃,较耐热,在60℃下孵育2小时,相对酶活保持在90%以上。重金属离子Cd2+和Hg2+对酶活性有强烈的抑制作用,化学修饰剂NBS的修饰结果表明色氨酸（Tryptophan）是该酶活性中心的必需基团。通过薄层色谱和DNS法检测鸡枞菌α-半乳糖苷酶对棉籽糖类家族...
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：112 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１对硝基酚Ａ?４０５?ｎｍ的标准曲线??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｓｔａｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ／７－ｎｉｔｒｏｐｈｅｎａｌ?Ａ?４０５?ｎｍ??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡枞即食新产品技术工艺研究[J]. 邹永生,朱萍,张丽英,何容,张微思. 食品研究与开发. 2013(19)
[2]高效薄层色谱法同时测定巴戟天中3种寡糖[J]. 周斌,崔小弟,李洁,程丹,郑鹏武,王平. 中成药. 2013(08)
[3]复合益生菌发酵豆粕生产工艺参数的优化及酶菌联合发酵对豆粕品质的影响[J]. 胡瑞,陈艳,王之盛,周安国,蔡景义,康坤,姜均,姜南. 动物营养学报. 2013(08)
[4]菌糠饲料的研究与应用[J]. 赵燕. 中国饲料. 2012(23)
[5]薄层色谱半定量监测有机合成反应[J]. 王帅,李萱,刘国富,吴国彬,张俊杰. 河北联合大学学报(自然科学版). 2012(04)
[6]不同水平饲料镉对罗非鱼生长性能和肠道消化酶活性影响的研究[J]. 贾景涛,翟少伟,阙炳根. 农学学报. 2012(10)
[7]杏鲍菇菌糠对鸡腿菇菌丝生长和产量的影响[J]. 梁明勤,海建平,陈世昌,徐明辉. 河南农业科学. 2012(10)
[8]几种饲料抗营养因子的作用机理及消除方法[J]. 姜倩倩,王思珍,曹颖霞,高丽南,季守财. 中国饲料. 2012(17)
[9]海刺猬体腔液凝集素的纯化、性质及其色氨酸的化学修饰[J]. 李丹彤,吴振海,李悦,王树敏,朱莹. 大连海洋大学学报. 2012(04)
[10]云芝多糖研究进展[J]. 王菲菲,郝利民,贾士儒,陈强,牛爽. 食品与发酵工业. 2012(06)
博士论文
[1]发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的制备、性质及应用研究[D]. 沈汪洋.江南大学 2009
[2]微生物来源36家族α-半乳糖苷酶的基因克隆与性质研究[D]. 曹雅男.中国农业科学院 2008
[3]黑曲霉产酶特性研究及其酶制剂在猪饲料中的应用[D]. 郑腾.南京农业大学 2006
[4]瓜尔豆半乳甘露聚糖和产量形成的生理基础及氮、钾影响的研究[D]. 胡春梅.山东农业大学 2003
硕士论文
[1]平菇菌糠饲料成分的分析及营养价值评定[D]. 宫福臣.东北农业大学 2013
[2]纳豆固体发酵和纳豆激酶的催化特性[D]. 路龙女.安徽农业大学 2011
[3]两种木霉混合菌产酶的条件优化及其对玉米秸秆降解的研究[D]. 李国强.东北林业大学 2011
[4]复合微生物菌剂制备及在大蒜生产中的应用[D]. 邵秀丽.河南农业大学 2010
[5]甜高粱固体发酵生产燃料乙醇工艺的研究[D]. 葳力斯.内蒙古农业大学 2009
[6]高温乳糖酶高产菌株发酵条件优化及酶制剂的研究[D]. 赵珊.河北农业大学 2008
[7]菌糠在辣椒上的施用效应与机理的研究[D]. 侯立娟.吉林农业大学 2008
[8]黄瓜（Cucumis sativus L.）酸性α-半乳糖苷酶的离体表达与酶学性质研究[D]. 张宗东.扬州大学 2008
[9]由商品果胶酶制剂制备高纯果胶酯酶制剂的研究[D]. 张跃.江南大学 2007
[10]黄瓜α-半乳糖苷酶基因克隆及表达分析[D]. 徐晓锋.扬州大学 2006
本文编号：3484019
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：112 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１对硝基酚Ａ?４０５?ｎｍ的标准曲线??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｓｔａｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ／７－ｎｉｔｒｏｐｈｅｎａｌ?Ａ?４０５?ｎｍ??
２．３．２．２鸡枞菌ａ－半乳糖苷酶粗样品的ＤＥＡＥ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ阴离子交换层析（ｐＨ?７＿２）??鸡枞菌粗样品经过ＤＥＡＥ－Ｃｄｌｕｌｏｓｅ洗脱后，得到Ｄｌ，Ｄ２，?Ｄ３三个洗脱峰，其中ａ－半乳糖??苷酶高度集中在Ｄ２组分中，洗脱峰和活性峰见图２－３。鸡楸菌ａ－半乳糖苷酶可以牢固的吸附在??ＤＥＡＥ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ阴离子柱上，缓冲液的冲洗可以去除大量的杂蛋白（Ｄ１组分），１００?ｍＭＮａＣＩ浓??度下可以将大部分活性组分解析下来（Ｄ２组分），５００?ｍＭ?ＮａＣｌ浓度洗脱的Ｄ３组分也含有少量??的活性，忽略不计。??ｌ／ｍｌ．??？?ｎ?－＾Ａ２８（＇ｎｍ?１００?ｍＭＮａＣＩ?「１２〇??ｒｐ??—Ｕ／ｍＬ??■ｒ??１．６?ｊ?Ｄ１?５００?ｎ，Ｍ?＇?１〇０??ｙＮａＣＩ?１）３??崖??０?２０?４０?６０?８０?１００?１２０?１４０??Ｅｌｕｔｉｏｎ?ｖｏｌｕｍｅ?（ｍｌｖ）??图２－３鸡枞菌ｏｔ－半乳糖苷酶粗样品的ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ阴离子交换层析洗脱曲线（ｐＨ?７．２）??上样的样品为透析后的粗酶样品。层析的流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ。黑色曲线为蛋白含量洗脱曲线，红色曲线为活性洗??脱曲线，由图看出半乳糖苷酶的活性存在于Ｄ２组分中。??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ａｎｉｏｎ?ｅｘｃｈａｎｇｅ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?ｏｎ?ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ?ｃｏｌｕｍｎ?（ｐＨ?７．２）．??Ｓａｍｐｌｅ：?Ｃｒｕｄｅ?ａ－ｇａｌａｃｔｏｄｉａｓｅ?ｄｅｒｉｖｅｄ?ｆｒｏｍ?ｆｒｕｉｔｉｎｇ?ｂｏｄｉｅｓ?ｏｆ?Ｔｅｎｎｉｔｏｍｙｃｅｓ?ａｌｂｕｍｉｎｏｓｕｓ．?Ｆ
２．３．２．３?ＣＭ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ?阳离子交换层析（ｐＨ?３．６）??Ｄ２活性组分在去离子水中充分透析，通过ＣＭ－Ｃｅｌｌｕ丨ｏｓｅ阳离子交换层析洗脱，得到三个洗??脱峰ＣＭ１，?ＣＭ２，?ＣＭ３，?ａ－半乳糖苷酶活性集中在ＣＭ２组分中，见图２－４。洗脱峰ＣＭ１和ＣＭ３??中均含有大量的杂蛋白。??１／ｍＬ??０．５?１?「７０??Ｂｕｆｆｅｒ?ＣＶＩＩ?５０?ｍＭ?ＮａＣＩ?ＣＭ２?—〇—?＼?＂＞８０?ｎｍ??ｎ?蠱?－６０??（丨４?１?—Ｕ／ｍＬ??－５０??Ｉ０＇３＇??ｇ?１?Ｉ?３００?ｍ．Ｍ?ＮａＣＩ?ＣＭ３?４０??〇?ｉｏｏ＾?１??１?—＾ｏｃｋ＞－?■?ｕ〇〇Ｑ〇ａ￥?ｉ〇??０?３０?６０?９０?１２０?１５０?１８０??Ｅｌｕｔｉｏｎ?ｖｏｌｕｍｅ?（ｍＬ）??图２－４鸡极菌ａ－半乳糖苷酶Ｄ２组分的ＣＭ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ阳离子交换层析（ｐＨ?３．６〉??上样样品为透析后的Ｄ２组分，层析流速为１．０?ｍＬ／ｍｉｎ，黑色曲线为蛋白含量洗脱曲线，红色曲线为活性曲线，??活性组分在ＣＭ２峰中。??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４?Ｃａｔｉｏｎ?ｅｘｃｈａｎｇｅ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?ｏｆ?ｆｒａｃｔｉｏｎ?Ｄ２?ｏｎ?ＣＩＭ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ?ｃｏｌｕｍｎ?（ｐＨ?３．６）．??Ｓａｍｐｌｅ：Ｄ２．?Ｆｌｏｗ?ｒａｔｅ：?１．０?ｍＬ／ｍｉｎ．?Ｂｌａｃｋ?ｃｕｒｖｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ａ
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡枞即食新产品技术工艺研究[J]. 邹永生,朱萍,张丽英,何容,张微思. 食品研究与开发. 2013(19)
[2]高效薄层色谱法同时测定巴戟天中3种寡糖[J]. 周斌,崔小弟,李洁,程丹,郑鹏武,王平. 中成药. 2013(08)
[3]复合益生菌发酵豆粕生产工艺参数的优化及酶菌联合发酵对豆粕品质的影响[J]. 胡瑞,陈艳,王之盛,周安国,蔡景义,康坤,姜均,姜南. 动物营养学报. 2013(08)
[4]菌糠饲料的研究与应用[J]. 赵燕. 中国饲料. 2012(23)
[5]薄层色谱半定量监测有机合成反应[J]. 王帅,李萱,刘国富,吴国彬,张俊杰. 河北联合大学学报(自然科学版). 2012(04)
[6]不同水平饲料镉对罗非鱼生长性能和肠道消化酶活性影响的研究[J]. 贾景涛,翟少伟,阙炳根. 农学学报. 2012(10)
[7]杏鲍菇菌糠对鸡腿菇菌丝生长和产量的影响[J]. 梁明勤,海建平,陈世昌,徐明辉. 河南农业科学. 2012(10)
[8]几种饲料抗营养因子的作用机理及消除方法[J]. 姜倩倩,王思珍,曹颖霞,高丽南,季守财. 中国饲料. 2012(17)
[9]海刺猬体腔液凝集素的纯化、性质及其色氨酸的化学修饰[J]. 李丹彤,吴振海,李悦,王树敏,朱莹. 大连海洋大学学报. 2012(04)
[10]云芝多糖研究进展[J]. 王菲菲,郝利民,贾士儒,陈强,牛爽. 食品与发酵工业. 2012(06)
博士论文
[1]发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的制备、性质及应用研究[D]. 沈汪洋.江南大学 2009
[2]微生物来源36家族α-半乳糖苷酶的基因克隆与性质研究[D]. 曹雅男.中国农业科学院 2008
[3]黑曲霉产酶特性研究及其酶制剂在猪饲料中的应用[D]. 郑腾.南京农业大学 2006
[4]瓜尔豆半乳甘露聚糖和产量形成的生理基础及氮、钾影响的研究[D]. 胡春梅.山东农业大学 2003
硕士论文
[1]平菇菌糠饲料成分的分析及营养价值评定[D]. 宫福臣.东北农业大学 2013
[2]纳豆固体发酵和纳豆激酶的催化特性[D]. 路龙女.安徽农业大学 2011
[3]两种木霉混合菌产酶的条件优化及其对玉米秸秆降解的研究[D]. 李国强.东北林业大学 2011
[4]复合微生物菌剂制备及在大蒜生产中的应用[D]. 邵秀丽.河南农业大学 2010
[5]甜高粱固体发酵生产燃料乙醇工艺的研究[D]. 葳力斯.内蒙古农业大学 2009
[6]高温乳糖酶高产菌株发酵条件优化及酶制剂的研究[D]. 赵珊.河北农业大学 2008
[7]菌糠在辣椒上的施用效应与机理的研究[D]. 侯立娟.吉林农业大学 2008
[8]黄瓜（Cucumis sativus L.）酸性α-半乳糖苷酶的离体表达与酶学性质研究[D]. 张宗东.扬州大学 2008
[9]由商品果胶酶制剂制备高纯果胶酯酶制剂的研究[D]. 张跃.江南大学 2007
[10]黄瓜α-半乳糖苷酶基因克隆及表达分析[D]. 徐晓锋.扬州大学 2006
本文编号：3484019
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