超级细菌bla NDM-1 和mcr-1基因双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

发布时间：2021-11-09 02:35

　　为了建立可同时检测超级细菌bla_NDM-1基因和mcr-1基因的快速检测方法,针对bla_NDM-1基因和mcr-1基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,以构建含有bla_NDM-1基因和mcr-1基因片段的重组质粒作为阳性标准品,通过优化各种反应条件,建立同时检测bla_NDM-1基因和mcr-1基因的双重荧光定量PCR方法。该方法能够特异性扩增bla_NDM-1基因和mcr-1基因质粒标准品,而对照标准菌株的检测结果均为阴性。两种质粒标准品的检出下限均为1.63×10¹拷贝/μL,比常规PCR敏感性高100倍;组内和组间重复试验的变异系数均小于2%。应用所建立的方法对55株鸡源致病性沙门氏菌、10株生鲜畜禽产品源大肠杆菌临床分离株进行检测,未发现携带bla_NDM-1基因和mcr-1基因的沙门氏菌分离株,发现2株携带bla_NDM-1基因和1株携带mcr-1基因的大肠杆菌分离株。结果表明,本研究所建立的双重荧光定... 

【文章来源】：中国动物传染病学报. 2020,28(05)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

重组质粒p-NDM-1(A)和p-mcr-1(B)的鉴定

图3 双重荧光定量PCR特异性试验

以等比例混合的浓度为1.63×103、1.63×104、1.63×105拷贝/μL的质粒标准品p-NDM-1、p-mcr-1为模板进行重复性试验。结果显示,组内和组间重复性试验的变异系数为0.58%～1.90%,均小于2%(表2),具有良好的重复性。2.7 临床样品检测

【参考文献】：
期刊论文
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[6]超级细菌blaNDM-1基因TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 施开创,李凤梅,张步娴,黎宗强,莫胜兰,许心婷.  中国预防兽医学报. 2015(12)
[7]鸡源致病性沙门氏菌的分离鉴定及血清型和药物敏感性分析[J]. 施开创,李凤梅,邹联斌,许心婷,王海清,钟诚.  中国畜牧兽医. 2015(08)

博士论文
[1]肉鸡产业链NDM和MCR-1阳性大肠杆菌分子流行病学研究[D]. 张荣民.中国农业大学 2017



本文编号：3484460