IL-17介导山羊传染性胸膜肺炎肺部病理损伤的研究
发布时间：2021-11-09 06:38
山羊传染性胸膜肺炎（Contagious caprine pleuropneumoniae,CCPP）是山羊支原体山羊肺炎亚种（Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp）引起的一种纤维素性肺炎,发病率为22%30%,有的高达60%80%,死亡率为15%30%,给山羊养殖业带来了极大的威胁。目前有关该病研究主要集中在病原的分离鉴定和流行病学调查,其免疫致病机制研究较少。本试验采集临床疑似CCPP病羊的鼻拭子,经PCR确诊后,对病原进行分离培养、分子生物学方法鉴定、动物回归试验;用分离鉴定的CCPP病原,通过气管内接种构建CCPP模型,检测PBMCs、肺脏中IL-17及其相关细胞因子、免疫细胞的变化;通过Mccp菌体全蛋白体外刺激PBMCs和肺来源细胞,在mRNA水平检测IL-17及其相关细胞因子的变化;通过rIL-17刺激山羊肺上皮细胞,在mRNA水平检测趋化因子的变化。研究获得如下结果:1.分离纯化菌株在固体平板上,呈现中心脐、边缘光滑、油煎蛋状样;生化试验均符合山...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 山羊传染性胸膜肺炎的研究进展
1.1.1 山羊传染性胸膜肺炎病原学研究
1.1.2 流行病学与临床症状
1.1.3 病理变化和致病机理
1.1.4 分离鉴定
1.1.5 防治措施
1.2 IL-17 和肺部炎症的研究进展
1.2.1 IL-17 来源
1.2.2 IL-17 家族和IL-17 受体家族
1.2.3 IL-17 受体信号
1.2.4 IL-17 与肺部免疫防御研究
1.2.5 IL-17 与肺部损伤的研究
1.2.6 IL-17 与支原体感染研究
1.3 支原体的致病机制研究
1.3.1 直接损伤
1.3.2 免疫损伤
第二章 山羊支原体山羊肺炎亚种地方毒株的分离鉴定
2.1 材料
2.1.1 病料
2.1.2 菌株
2.1.3 试验动物
2.1.4 主要试剂
2.1.5 主要仪器
2.1.6 主要溶液配置
2.2 方法
2.2.1 PCR检测
2.2.2 分离培养
2.2.3 形态学观察
2.2.4 生化特性鉴定
2.2.5 分子生物学鉴定
2.2.6 动物回归试验
2.3 结果
2.3.1 样品PCR检测结果
2.3.2 分离培养与染色镜检
2.3.3 生化特性鉴定
2.3.4 PCR鉴定
2.3.5 16sRNA基因分析
2.3.6 动物回归试验
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 介导山羊传染性胸膜肺炎的细胞亚群及相关细胞因子研究
3.1 材料
3.1.1 菌株
3.1.2 实验动物
3.1.3 主要试剂
3.1.4 主要仪器与分析软件
3.1.5 主要溶液配方及配制
3.2 方法
3.2.1 CCPP山羊模型的建立与鉴定
3.2.2 PCR检测
3.2.3 血液样品采集及处理
3.2.4 肺组织样品及处理
3.2.5 总RNA提取和cDNA的合成
3.2.6 PBMCs和肺组织细胞因子相对表达量的测定
3.2.7 肺部组织切片的制备与观察
3.2.8 肺组织免疫荧光染色
3.2.9 NO、MDA、SOD检测
3.3 结果
3.3.1 山羊感染 CCPP 后的临床及病理变化结果
3.3.2 血常规分析
3.3.3 血液中IL-17 及其相关细胞因子的动态变化结果
3.3.4 肺组织中IL-17 及其相关细胞因子变化结果
3.3.5 肺组织免疫荧光染色
3.3.6 NO、MDA、T-SOD测定
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 山羊传染性胸膜肺炎肺组织损伤的机理研究
4.1 材料
4.1.1 菌株
4.1.2 试验动物
4.1.3 主要试剂
4.1.4 主要仪器
4.1.5 主要溶液配方与配制
4.2 方法
4.2.1 Mccp全蛋白制备
4.2.2 山羊肺细胞及肺上皮细胞的制备
4.2.3 Mccp全蛋白刺激PBMCs细胞因子测定
4.2.4 Mccp全蛋白刺激肺细胞细胞因子测定
4.2.5 rIL-17 对山羊肺上皮细胞趋化因子表达的影响
4.3 结果
4.3.1 山羊肺细胞及肺上皮细胞的制备
4.3.2 Mccp全蛋白刺激浓度确定结果
4.3.3 Mccp刺激PBMCs细胞因子测定结果
4.3.4 Mccp全蛋白刺激肺细胞细胞因子测定结果
4.3.5 rIL-17 蛋白对山羊肺上皮细胞趋化因子表达测定结果
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 结论
参考文献
缩略表
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]环介导等温扩增技术在病原微生物快速检测中的研究进展[J]. 杨靖,胡姣姣,柏先泽,王远亮,谢康庄. 食品安全质量检测学报. 2018(23)
[2]绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种和山羊支原体山羊肺炎亚种多重PCR检测方法的建立[J]. 林裕胜,江锦秀,江斌,游伟,胡奇林. 中国预防兽医学报. 2018(09)
[3]中性粒细胞胞外诱捕网及其在肺部炎症性疾病中的作用研究进展[J]. 杨霞,宁宗. 山东医药. 2018(34)
[4]太子参抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的活性部位筛选及作用机制研究[J]. 杨馨,张金娟,宛蕾,邓连力,廖尚高,何迅. 中国药房. 2018(14)
[5]绵羊肺炎支原体环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测方法的建立[J]. 张洁,曹军军,祝明松,杨亚军,吴文星,王璐,石峰. 动物医学进展. 2019(03)
[6]配方药医治山羊传染性胸膜肺炎效果观察[J]. 赵支国. 中国畜牧兽医文摘. 2018(06)
[7]山羊传染性胸膜肺炎分子诊断方法的研究进展[J]. 朱建勋,郝华芳,陈胜利,颜新敏,赵萍,翟肖辉,刘永生,储岳峰. 畜牧与兽医. 2018(06)
[8]山羊支原体山羊肺炎亚种SYBR GreenⅠqRT-PCR检测方法的建立[J]. 林裕胜,江锦秀,张靖鹏,游伟,胡奇林. 农业生物技术学报. 2018(02)
[9]山羊传染性胸膜肺炎研究进展[J]. 王峰,曹元桂,高娴,曹勇,马飞. 中国畜牧兽医文摘. 2017(11)
[10]肺炎支原体患儿D-二聚体、IL-17、IgE水平与肺炎病情的相关性[J]. 张文昭,周春红. 国际检验医学杂志. 2017(13)
博士论文
[1]IFN-γ诱导的自噬对奶牛乳腺上皮细胞泌乳与细胞增殖及抗细菌感染的调控[D]. 夏小静.吉林大学 2016
[2]奶山羊隐性乳腺炎的流行病学调查及S.aureus感染小鼠乳腺后Th细胞免疫应答机制研究[D]. 赵燕清.西北农林科技大学 2015
[3]我国山羊（接触）传染性胸膜肺炎病原学、流行病学研究及灭活疫苗的研制[D]. 储岳峰.中国农业科学院 2011
硕士论文
[1]滑液囊支原体环介导等温扩增技术检测方法的建立与初步应用[D]. 寇艳利.西北农林科技大学 2018
[2]重症肺炎支原体肺炎临床特征与IL-18、Th1细胞因子疾病发展关系的研究[D]. 李姣.天津医科大学 2018
[3]IL-17A对哮喘气道嗜酸性粒细胞炎症的影响及其免疫机制研究[D]. 王熠杰.第三军医大学 2017
[4]山羊支原体山羊肺炎亚种的分离鉴定及膜蛋白抗体间接血凝检测方法的建立[D]. 刘波.内蒙古农业大学 2011
[5]慢性阻塞性肺疾病患者血清IL-17、IL-23检测及意义[D]. 刘仁杰.兰州大学 2011
[6]山羊支原体山羊肺炎亚种的分离鉴定及其抗体间接血凝检测方法的建立[D]. 郭晗.中国农业科学院 2010
[7]山羊传染性胸膜肺炎病原的分离及其中国分离株的分子特征分析[D]. 张建华.中国农业科学院 2007
本文编号：3484819
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 山羊传染性胸膜肺炎的研究进展
1.1.1 山羊传染性胸膜肺炎病原学研究
1.1.2 流行病学与临床症状
1.1.3 病理变化和致病机理
1.1.4 分离鉴定
1.1.5 防治措施
1.2 IL-17 和肺部炎症的研究进展
1.2.1 IL-17 来源
1.2.2 IL-17 家族和IL-17 受体家族
1.2.3 IL-17 受体信号
1.2.4 IL-17 与肺部免疫防御研究
1.2.5 IL-17 与肺部损伤的研究
1.2.6 IL-17 与支原体感染研究
1.3 支原体的致病机制研究
1.3.1 直接损伤
1.3.2 免疫损伤
第二章 山羊支原体山羊肺炎亚种地方毒株的分离鉴定
2.1 材料
2.1.1 病料
2.1.2 菌株
2.1.3 试验动物
2.1.4 主要试剂
2.1.5 主要仪器
2.1.6 主要溶液配置
2.2 方法
2.2.1 PCR检测
2.2.2 分离培养
2.2.3 形态学观察
2.2.4 生化特性鉴定
2.2.5 分子生物学鉴定
2.2.6 动物回归试验
2.3 结果
2.3.1 样品PCR检测结果
2.3.2 分离培养与染色镜检
2.3.3 生化特性鉴定
2.3.4 PCR鉴定
2.3.5 16sRNA基因分析
2.3.6 动物回归试验
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 介导山羊传染性胸膜肺炎的细胞亚群及相关细胞因子研究
3.1 材料
3.1.1 菌株
3.1.2 实验动物
3.1.3 主要试剂
3.1.4 主要仪器与分析软件
3.1.5 主要溶液配方及配制
3.2 方法
3.2.1 CCPP山羊模型的建立与鉴定
3.2.2 PCR检测
3.2.3 血液样品采集及处理
3.2.4 肺组织样品及处理
3.2.5 总RNA提取和cDNA的合成
3.2.6 PBMCs和肺组织细胞因子相对表达量的测定
3.2.7 肺部组织切片的制备与观察
3.2.8 肺组织免疫荧光染色
3.2.9 NO、MDA、SOD检测
3.3 结果
3.3.1 山羊感染 CCPP 后的临床及病理变化结果
3.3.2 血常规分析
3.3.3 血液中IL-17 及其相关细胞因子的动态变化结果
3.3.4 肺组织中IL-17 及其相关细胞因子变化结果
3.3.5 肺组织免疫荧光染色
3.3.6 NO、MDA、T-SOD测定
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 山羊传染性胸膜肺炎肺组织损伤的机理研究
4.1 材料
4.1.1 菌株
4.1.2 试验动物
4.1.3 主要试剂
4.1.4 主要仪器
4.1.5 主要溶液配方与配制
4.2 方法
4.2.1 Mccp全蛋白制备
4.2.2 山羊肺细胞及肺上皮细胞的制备
4.2.3 Mccp全蛋白刺激PBMCs细胞因子测定
4.2.4 Mccp全蛋白刺激肺细胞细胞因子测定
4.2.5 rIL-17 对山羊肺上皮细胞趋化因子表达的影响
4.3 结果
4.3.1 山羊肺细胞及肺上皮细胞的制备
4.3.2 Mccp全蛋白刺激浓度确定结果
4.3.3 Mccp刺激PBMCs细胞因子测定结果
4.3.4 Mccp全蛋白刺激肺细胞细胞因子测定结果
4.3.5 rIL-17 蛋白对山羊肺上皮细胞趋化因子表达测定结果
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 结论
参考文献
缩略表
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]环介导等温扩增技术在病原微生物快速检测中的研究进展[J]. 杨靖,胡姣姣,柏先泽,王远亮,谢康庄. 食品安全质量检测学报. 2018(23)
[2]绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种和山羊支原体山羊肺炎亚种多重PCR检测方法的建立[J]. 林裕胜,江锦秀,江斌,游伟,胡奇林. 中国预防兽医学报. 2018(09)
[3]中性粒细胞胞外诱捕网及其在肺部炎症性疾病中的作用研究进展[J]. 杨霞,宁宗. 山东医药. 2018(34)
[4]太子参抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的活性部位筛选及作用机制研究[J]. 杨馨,张金娟,宛蕾,邓连力,廖尚高,何迅. 中国药房. 2018(14)
[5]绵羊肺炎支原体环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测方法的建立[J]. 张洁,曹军军,祝明松,杨亚军,吴文星,王璐,石峰. 动物医学进展. 2019(03)
[6]配方药医治山羊传染性胸膜肺炎效果观察[J]. 赵支国. 中国畜牧兽医文摘. 2018(06)
[7]山羊传染性胸膜肺炎分子诊断方法的研究进展[J]. 朱建勋,郝华芳,陈胜利,颜新敏,赵萍,翟肖辉,刘永生,储岳峰. 畜牧与兽医. 2018(06)
[8]山羊支原体山羊肺炎亚种SYBR GreenⅠqRT-PCR检测方法的建立[J]. 林裕胜,江锦秀,张靖鹏,游伟,胡奇林. 农业生物技术学报. 2018(02)
[9]山羊传染性胸膜肺炎研究进展[J]. 王峰,曹元桂,高娴,曹勇,马飞. 中国畜牧兽医文摘. 2017(11)
[10]肺炎支原体患儿D-二聚体、IL-17、IgE水平与肺炎病情的相关性[J]. 张文昭,周春红. 国际检验医学杂志. 2017(13)
博士论文
[1]IFN-γ诱导的自噬对奶牛乳腺上皮细胞泌乳与细胞增殖及抗细菌感染的调控[D]. 夏小静.吉林大学 2016
[2]奶山羊隐性乳腺炎的流行病学调查及S.aureus感染小鼠乳腺后Th细胞免疫应答机制研究[D]. 赵燕清.西北农林科技大学 2015
[3]我国山羊（接触）传染性胸膜肺炎病原学、流行病学研究及灭活疫苗的研制[D]. 储岳峰.中国农业科学院 2011
硕士论文
[1]滑液囊支原体环介导等温扩增技术检测方法的建立与初步应用[D]. 寇艳利.西北农林科技大学 2018
[2]重症肺炎支原体肺炎临床特征与IL-18、Th1细胞因子疾病发展关系的研究[D]. 李姣.天津医科大学 2018
[3]IL-17A对哮喘气道嗜酸性粒细胞炎症的影响及其免疫机制研究[D]. 王熠杰.第三军医大学 2017
[4]山羊支原体山羊肺炎亚种的分离鉴定及膜蛋白抗体间接血凝检测方法的建立[D]. 刘波.内蒙古农业大学 2011
[5]慢性阻塞性肺疾病患者血清IL-17、IL-23检测及意义[D]. 刘仁杰.兰州大学 2011
[6]山羊支原体山羊肺炎亚种的分离鉴定及其抗体间接血凝检测方法的建立[D]. 郭晗.中国农业科学院 2010
[7]山羊传染性胸膜肺炎病原的分离及其中国分离株的分子特征分析[D]. 张建华.中国农业科学院 2007
本文编号：3484819
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