抗高致病性禽流感病毒H5N1转基因鸡的建立与鉴定
发布时间：2021-11-10 22:37
禽流感的频繁暴发,给世界养禽业造成了巨大的经济损失,甚至危及人类的身体健康和生命安全。随着禽类转基因技术的发展,将具有抗流感病毒活性的基因导入动物体内,培育具有抗禽流感特性的转基因鸡新品种,已成为重要的研究目标。但由于高致病性禽流感具有潜伏期短、发病急剧的特性,仅导入一种抗病毒基因很难达到理想目标。培育整合两种或两种以上候选基因的抗病毒转基因鸡新品种将是未来的研究方向。以本实验室成功筛选出的抗高致病性禽流感病毒H5N1FJ13株的siRNA NP604和抗HA蛋白的单链抗体可变区分子scFv1、scFv2和scFv3为基础,开展了一系列研究,获得了如下研究结果：首先通过ELISA实验,筛选出了与病毒结合能力较强的scFv1分子。用插入了scFv1基因的分泌型真核表达载体pIRES2-scFv1和siRNA NP604真核表达载体psiSTRIKE-NP604转染DF-1细胞,转染成功后感染AIV FJ13株病毒。通过Real-time PCR检测,结果显示从感染后12h到60h,同时转入两种抗病毒基因的细胞中病毒的拷贝数明显低于仅转入一种基因的细胞（P<0.05）。将在细胞内稳定...
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
禽流感病毒在野禽和家禽间的传播（PascuaandChoi，2014)
图1-2 2003-2013年全球确诊为人感染AlV H5M的区域分布(弓 I 自 http: iiamapserver.who.int/mapLibrary/app/searchRcsulis.aspx)Figure 1-2 Areas with confirmed human cases for avian influenza A (H5N1) reported to W HO, 2003-2013(弓 I 自 http: aamapscr\ cr.\vho.int/mapLibrar\ /app/searchRcsults.asp\ )1.1.1禽流感病毒概述流感病毒根据其核蛋白（NP)和基质蛋白（MS)抗原性的不同分为甲（A)、乙（B)、丙（C)三型，它们之间的抗原性可通过琼脂糖扩散试验、补体结合试验等加以区别（殷震，刘景华，1997)。根据A型流感病毒表面结构蛋白血凝素（hemagglutinin, HA )和神经氨酸酶(neuraminidase, NA )抗原性的不同，将其分为不同的血清亚型，己发现有]6种不同的HA亚型（H1-H16)和9种NA亚型（N1-N9) (Lee and Saif, 2009)。禽流感病毒属于A型流感病毒，包括多种亚型，至今发现能直接感染人的禽流感病毒亚型有：H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H9N2 禾卩 H7N9 亚型。
图1-3 A型流感病毒的结构示意图（Subbarao and Joseph, 2007)Figure 1-3 Schematic of an influenza A virus (Subbarao and Joseph, 2007)禽流感病毒是单股负链RNA病毒，基因组分为8个节段，编码10种蛋白质（图1-3)。RNA聚合酶PB]、PB2和PA在功能上各有分工，PB〗是在病毒mRNA合成起始后使之逐渐延长；PB2的作用是在病毒mRNA转录的起始阶段识别并结合在5’端I型帽状结构上，同时PB2还具有限制性内切酶的活性，参与宿主mRNA帽状结构的切割；在流感病毒RNA复制的过程中，PA主要负责将模板RNA不断传递至聚合酶的活性中心。血凝素（Hemagglutinin.HA)和神经氨酸酶（Neuraminidase，NA)都是构成病毒囊膜纤突的重要蛋白。HA在病毒的吸附、跨膜过程以及决定病毒的宿主特异性中起着关键作用，能否被裂解为HA]和HA2两部分是病毒感染细胞的先决条件，也是决定病毒致病力的主要因素（Vogel，1998)o NA的主要作用则是水解细胞表面的特异性糖蛋白末端的N-乙酷基神经氨酸（唾液酸），避免病毒粒子聚集，有利于病毒的释放，影响病毒在感染细胞周围的扩散能力。NP是一种单体隣酸化的多肽，它是构成病毒核衣壳的主要蛋白成分（Yewdell et al.，]985)。第7节段RNA编码的蛋白被称为Ml,部分分子量较小的蛋白称为M2。Ml构成病毒的基质膜，具有型特异性，
【参考文献】：
期刊论文
[1]转基因动物技术在动物遗传育种上的应用[J]. 祝铁钢. 畜牧与饲料科学. 2010(02)
[2]转基因动物应用的研究现状与发展前景[J]. 张然,徐慰倬,孔平,许红韬,李宁. 中国生物工程杂志. 2005(08)
本文编号：3488075
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
禽流感病毒在野禽和家禽间的传播（PascuaandChoi，2014)
图1-2 2003-2013年全球确诊为人感染AlV H5M的区域分布(弓 I 自 http: iiamapserver.who.int/mapLibrary/app/searchRcsulis.aspx)Figure 1-2 Areas with confirmed human cases for avian influenza A (H5N1) reported to W HO, 2003-2013(弓 I 自 http: aamapscr\ cr.\vho.int/mapLibrar\ /app/searchRcsults.asp\ )1.1.1禽流感病毒概述流感病毒根据其核蛋白（NP)和基质蛋白（MS)抗原性的不同分为甲（A)、乙（B)、丙（C)三型，它们之间的抗原性可通过琼脂糖扩散试验、补体结合试验等加以区别（殷震，刘景华，1997)。根据A型流感病毒表面结构蛋白血凝素（hemagglutinin, HA )和神经氨酸酶(neuraminidase, NA )抗原性的不同，将其分为不同的血清亚型，己发现有]6种不同的HA亚型（H1-H16)和9种NA亚型（N1-N9) (Lee and Saif, 2009)。禽流感病毒属于A型流感病毒，包括多种亚型，至今发现能直接感染人的禽流感病毒亚型有：H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H9N2 禾卩 H7N9 亚型。
图1-3 A型流感病毒的结构示意图（Subbarao and Joseph, 2007)Figure 1-3 Schematic of an influenza A virus (Subbarao and Joseph, 2007)禽流感病毒是单股负链RNA病毒，基因组分为8个节段，编码10种蛋白质（图1-3)。RNA聚合酶PB]、PB2和PA在功能上各有分工，PB〗是在病毒mRNA合成起始后使之逐渐延长；PB2的作用是在病毒mRNA转录的起始阶段识别并结合在5’端I型帽状结构上，同时PB2还具有限制性内切酶的活性，参与宿主mRNA帽状结构的切割；在流感病毒RNA复制的过程中，PA主要负责将模板RNA不断传递至聚合酶的活性中心。血凝素（Hemagglutinin.HA)和神经氨酸酶（Neuraminidase，NA)都是构成病毒囊膜纤突的重要蛋白。HA在病毒的吸附、跨膜过程以及决定病毒的宿主特异性中起着关键作用，能否被裂解为HA]和HA2两部分是病毒感染细胞的先决条件，也是决定病毒致病力的主要因素（Vogel，1998)o NA的主要作用则是水解细胞表面的特异性糖蛋白末端的N-乙酷基神经氨酸（唾液酸），避免病毒粒子聚集，有利于病毒的释放，影响病毒在感染细胞周围的扩散能力。NP是一种单体隣酸化的多肽，它是构成病毒核衣壳的主要蛋白成分（Yewdell et al.，]985)。第7节段RNA编码的蛋白被称为Ml,部分分子量较小的蛋白称为M2。Ml构成病毒的基质膜，具有型特异性，
【参考文献】：
期刊论文
[1]转基因动物技术在动物遗传育种上的应用[J]. 祝铁钢. 畜牧与饲料科学. 2010(02)
[2]转基因动物应用的研究现状与发展前景[J]. 张然,徐慰倬,孔平,许红韬,李宁. 中国生物工程杂志. 2005(08)
本文编号：3488075
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