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细胞周期蛋白依赖性激酶5调节小鼠皮肤中的MAPK/ERK信号传导通路

发布时间:2021-11-10 21:53
  细胞周期蛋白依赖性激酶5(CDK5)是一种脯氨酸指导的丝氛酸/苏氨酸激酶,已被证明在神经系统外的许多组织中发挥重要作用。前期研究发现,CDK5在不同毛色的羊驼皮肤转录组图谱中呈差异表达,并且CDK5敲减小鼠毛色表型发生了变化。为了深入研究CDK5在毛色形成过程发挥功能的分子机制,本研究应用CDK5敲减小鼠模型,验证对小鼠皮肤中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)路径上一些相关因子的影响。应用实时定量PCR,免疫共沉淀和蛋白质印迹等方法进行了实验,结果如下:1.与野生型小鼠皮肤相比,在敲减CDK5的小鼠皮肤中CDK5的mRNA表达水平明显下降(P<0.001)。磷酸化的CDK5的蛋白表达明显下降(P<0.001),而总CDK5的蛋白表达水平趋势不明显;免疫共沉淀实验显示CDK7是CDK5的作用因子,二者存在相互作用,且CDK7mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。2.在MAPK路径上,与野生型小鼠皮肤相比,CDK5敲减小鼠的皮肤中MAP3K6的mRNA表达水平显著降低(P<0.001)。MAP3K6蛋白主要定位于CDIK5敲减小鼠皮肤表皮基部,且信号比野生型小... 

【文章来源】:山西农业大学山西省

【文章页数】:51 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

细胞周期蛋白依赖性激酶5调节小鼠皮肤中的MAPK/ERK信号传导通路


图2?CDK5敲减小鼠皮肤的表型和CDIC5磷酸化状态??(A)?CDK5敲减小鼠皮肤中CDK5?mRNA表达的RT-qPCR分析

皮肤,蛋白表达,表达水平,基部


玻牐停粒校常耍对冢茫模耍登眉跣∈笃し糁械谋泶铮崳?与野生型小鼠皮肤相比,CDK5敲减小鼠皮肤中MAP3K6的mRNA表达水平显著??降低81.03%?(P0.001;图3A)。MAP3K6主要定位于CDK5敲减小鼠皮肤中表皮细??胞的基部(图3B)?,?MAP3K6蛋白在CDK5敲减小鼠与野生型小鼠蛋白水平显著降低??了?75.26%?(P0.001;图?3C,D)。??A?B??1V1AP3K6?No?Is,Ah?control??1.5n??I?£?,??W>?-??W)?"3??2??=??,??iWJm??°-5-??-〇,L_i^?H?-??Wild?(vpe?CDK5?knockdown?mice??C????1.5-1??MAP3K6?梦讀?>?''g??p-actin?含?1?〇-??Wild?type?(?〇K5?knockdown?mice?2?"g??〇?^?|r?^??>?51?0.5-?pttiftiP??5?S??k^'k??次。LB___m_??Wild?type?CDK5?knockdown??图3?MAP3K6在CDK5敲减小鼠皮肤中的表达??(A)?CDK5敲减和野生型小鼠皮肤中MAP3K6?mRNA表达的RT-qPCR分析。(B)?CDK5敲减和??野生型小鼠皮肤切片中MAP3K6的免疫组织学染色。(C)CDK5敲减和野生型小鼠皮肤中MAP3K6??蛋白表达的Western印迹分析。(D)

蛋白质表达,沉淀分析,皮肤,免疫共沉淀


常?常牐茫模耍吩冢茫模耍登眉跣∈笃し糁械谋泶铮崳?qRT-PCR结果显示相对于野,I-:型小鼠皮肤CDK7?mRNA表达水平显著降低了??48.25%?(P<0.01;图4A)。免疫共沉淀实验显示了?CDK5与CDK7之间具有相互关系??(图4B)。CDK7蛋白在敲减CDK5小鼠相对于野生型皮肤中降低40.16%?(P<0.01;??图?4C,?D)。??A?_?1.5-1?B???|?^?10"?■mg?IgG?Superanat?Ccll^ite??2?Z?1P:CDK5?l?::?'?'?.翁、、..一—??l|0'5-?H?dll?WB:CDK7??■?■?_??-0.0i_JHPH?WB:?CDK5??Wild?t\pe?CDK5?kockdown?mice??C?D?i?15i??①??r-n-一-r ̄^r?—rr ̄;??rrn?1?n????CDK7||i^?H>??mm?^?g?10_? ̄;、??P-acti"?._丨_麟—wi_?麵瞻?麵____|“?2?**??Wild?type?CDK5?knockdown?mice?室?0?5-?胸観■?3丨?N?卜、??i?〇.〇?—??Wild?type?CDK5?kockdown?mice??图4?CDK7在CDK5敲减小鼠皮肤中mRNA和蛋白质表达的影响??(A)?CDK7在CDK5高5减小鼠皮肤中mRNA表达的影响。(B)小鼠皮肤中CDK5和CDK7之间相??互作用的共免疫沉淀分析。(C)?CDK7蛋白表达的Western印迹分析在CDK5敲减和野生型小鼠的??皮肤中。(D)使用

【参考文献】:
期刊论文
[1]PKCδ Regulates Cortical Radial Migration by Stabilizing the Cdk5 Activator P35[J].   Science Foundation in China. 2009(02)



本文编号:3488005

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