森林革蜱（Dermacentor silvarum）保护性抗原4D8的基因克

发布时间：2021-11-11 18:08

　　森林革蜱（Dermacentor silvarum）是一种重要的体外寄生虫，广泛分布于中国北方、俄罗斯和蒙古国等地，种群数量大且传播森林脑炎和马巴贝虫等疾病，并能经卵传递森林脑炎病毒。4D8最早是在肩突硬蜱（Ixodes scapularis）中发现的，是一个蜱保护性抗原，之后从6个属的10种硬蜱中克隆得到，它们的核酸和氨基酸序列在这些蜱种中保守，分别有65–98和60–98%的一致性。4D8基因通过RNAi技术沉默后，通过重组蜱4D8的免疫实验证明它能通过降低蜱类的存活率和繁殖率来保护宿主免受蜱的侵扰。这些研究结果又在微小扇头蜱（Boophilus microplus）、美洲花蜱（Amblyomma americanum）、血红扇头蜱（Rhinpicephalus sanguineus）、变异革蜱（Dermacentor variabilis）等多个物种中得以证实。因此，4D8是一种理想的疫苗候选抗原，可用于防治多种蜱类并能作用于该基因的同源直系基因产物。本研究以森林革蜱为研究对象。首先通过液氮研磨法提取森林革蜱饥饿雌性成蜱总RNA，将其反转录成cDNA，根据GenBank中的蜱4D... 

【文章来源】：河北师范大学河北省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
    1.1 蜱类简介
    1.2 森林革蜱生物学特性
        1.2.1 森林革蜱分布
        1.2.2 森林革蜱的危害
        1.2.3 森林革蜱生活史
    1.3 蜱的免疫学研究进展
        1.3.1 宿主对蜱自然感染的免疫反应
        1.3.2 蜱类主要防治方法
        1.3.3 微小扇头蜱保护性抗原 Bm86 研究进展
        1.3.4 其他保护性抗原研究进展
    1.4 4D8 研究进展
        1.4.1 4D8 基因的发现
        1.4.2 4D8 的命名
        1.4.3 节肢动物 subolesin/akirin 进化和功能
        1.4.4 在节肢动物载体侵染和病原体传播中 subolesin/akirin 的免疫效果
        1.4.5 蜱中 4D8 的定位及其作用
    1.5 展望
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 蜱种、菌种和载体
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 仪器与设备
    2.2 方法
        2.2.1 森林革蜱 4D8 基因的引物设计
        2.2.2 4D8 cDNA 序列的获得及克隆的构建
        2.2.3 表达载体的构建与鉴定
        2.2.4 重组质粒的诱导表达
        2.2.5 表达产物的纯化
        2.2.6 表达产物的 Western blot 分析
3 结果与分析
    3.1 目的基因 4D8 的获得
    3.2 重组克隆的 PCR 鉴定
    3.3 重组质粒的测序鉴定及序列分析
        3.3.1 森林革蜱 4D8 基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列
        3.3.2 不同蜱种间 4D8 蛋白序列比对
        3.3.3 不同蜱种间 4D8 序列的系统发育和进化关系
    3.4 目的基因 4D8 的扩增
    3.5 重组克隆的 PCR 鉴定
    3.6 4D8 重组蛋白的原核表达
    3.7 4D8 表达产物的 Western blot 检测
4 讨论
参考文献
致谢
攻读学位期间取得的科研成果清单


【参考文献】：
期刊论文
[1]宿主对蜱免疫的研究进展[J]. 薄新文,汪明.  中国兽医杂志. 1998(10)
[2]我国异扇蜱属一新种（蜱螨目:硬蜱科）[J]. 邓国藩,黄重安.  昆虫学报. 1981(01)

博士论文
[1]森林革蜱种群生态及希伯来花蜱卵蜡层抑菌分子研究[D]. 于志军.河北师范大学 2011

硕士论文
[1]青海血蜱生活史及不同发育阶段蛋白分析[D]. 袁改玲.内蒙古农业大学 2002



本文编号：3489285