奶牛乳腺上皮细胞核泌乳相关的磷酸化蛋白质组学的分析
发布时间：2021-11-12 03:45
奶牛是我国重要的产乳经济动物之一,奶牛乳腺泌乳功能会影响乳产量和乳蛋白的含量。蛋白质组学中一个重要的研究部分是蛋白质的翻译后修饰,而其中以磷酸化修饰最普遍、最重要,参与生命活动的整个过程。有些蛋白可以通过磷酸化和去磷酸化,调节乳蛋白、乳脂等的合成,例如mTOR和STAT5。但有关于这方面的研究很少,具体机制尚不清楚。本研究利用蛋白质质谱分析手段,鉴定了DCMECs细胞核中的磷酸化蛋白质,通过对蛋白质功能和磷酸化位点的分析,可以对磷酸化蛋白是如何影响乳合成的分子机制有更进一步的了解。并由已知的生物学手段,验证部分获得的蛋白,结果证明这些蛋白确实对泌乳过程有影响。为从蛋白质组角度研究奶牛泌乳调控的方法提供了理论依据。本实验分为二个部分：一、通过培养体外奶牛乳腺上皮细胞系,提取奶牛乳腺上皮细胞核蛋白,用质谱技术鉴定细胞核中蛋白质和磷酸化蛋白质,利用iniprotBostaurus.fasta数据库,匹配有意义的蛋白质（Total score>65, P<0.05）,检测到细胞核中蛋白664个、磷酸化蛋白658个,并得到了600个数据库中...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 奶牛泌乳生物学研究进展
1.1.1 奶牛乳腺基本结构的简述
1.1.2 奶牛泌乳的基本机理
1.2 奶牛泌乳信号通路及功能基因筛选
1.2.1 奶牛泌乳信号通路
1.2.2 奶牛泌乳功能基因筛选
1.3 蛋白质组学的研究进展
1.3.1 蛋白质组研究技术
1.3.2 细胞核蛋白组学技术的研究进展
1.3.3 磷酸化蛋白质组研究进展
1.3.4 质谱技术在翻译后修饰蛋白质组学中的研究应用
1.4 本研究的目的以及意义
2 材料与方法
2.1 实验试剂与设备
2.1.1 主要实验试剂
2.1.2 主要实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞系的建立以及鉴定
2.2.2 奶牛乳腺上皮细胞细胞核磷酸化蛋白质的提取、纯化及鉴定
2.2.3 奶牛乳腺上皮细胞细胞核磷蛋白质的质谱鉴定
2.2.4 建立蛋氨酸对奶牛乳腺上皮细胞泌乳相关信号分子影响模型
2.2.5 奶牛乳腺上皮细胞细胞核磷酸化蛋白质组中差异表达的泌乳相关信号分子的验证
2.3 数据处理及统计分析
3 结果与分析
3.1 DCMECs的培养、鉴定及细胞核蛋白鉴定结果
3.2 DCMECS细胞核磷酸化蛋白质质谱鉴定结果
3.3 蛋氨酸对DCMECS泌乳相关信号分子影响结果验证
3.4 筛选出来的DCMECs细胞核磷酸化蛋白质组中相关信号分子的验证结果
4 讨论
4.1 DCMECs的培养、验证及蛋氨酸对DCMECS泌乳能力的影响
4.2 细胞核磷酸化蛋白质谱结果分析
4.2.1 细胞核磷酸化蛋白提取
4.2.2 质谱鉴定结果生物信息学分析
4.3 DCMECS细胞核磷酸化蛋白质组中泌乳相关蛋白的验证
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]钙联蛋白调控内质网应激诱导的细胞凋亡[J]. 李爱玲,修瑞娟. 基础医学与临床. 2011(03)
[2]健康奶牛与临床型乳腺炎奶牛乳腺核蛋白组差异表达分析[J]. 王建锋,赵兴绪,张勇,徐铁山. 畜牧兽医学报. 2010(01)
[3]mTOR/S6K1信号通路研究进展[J]. 刘效磊,牛燕媚,傅力. 中国运动医学杂志. 2010(01)
[4]BEP2D细胞受照前后蛋白质组学研究[J]. 薛振伟,周小林,谷娟娟,蘧艳峰,崔梅萍. 辐射防护. 2009(04)
[5]奶牛乳腺上皮细胞系的建立[J]. 陈建晖,佟慧丽,李庆章,高学军. 畜牧兽医学报. 2009(05)
[6]羟基喜树碱诱导肝癌细胞凋亡前后细胞核蛋白质组变化的定量分析[J]. 颜玉蓉,付玉荣,邱宗荫. 分子细胞生物学报. 2008(02)
[7]牛乳腺上皮细胞的分离培养及其生物学特性[J]. 多曙光,吴应积,罗奋华,旭日干. 动物学研究. 2006(03)
[8]过瘤胃蛋氨酸对奶牛产奶量以及乳成分的影响[J]. 韩兆玉,周岩民,王根林,刘永刚. 畜牧与兽医. 2005(05)
博士论文
[1]MAPK1和eEF1B对奶牛乳腺上皮细胞泌乳调控作用及机理研究[D]. 陆黎敏.东北农业大学 2013
硕士论文
[1]奶牛乳腺上皮细胞JAK2-STAT5和mTOR信号通路协同调控乳蛋白合成[D]. 史琳琳.东北农业大学 2013
本文编号：3490100
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 奶牛泌乳生物学研究进展
1.1.1 奶牛乳腺基本结构的简述
1.1.2 奶牛泌乳的基本机理
1.2 奶牛泌乳信号通路及功能基因筛选
1.2.1 奶牛泌乳信号通路
1.2.2 奶牛泌乳功能基因筛选
1.3 蛋白质组学的研究进展
1.3.1 蛋白质组研究技术
1.3.2 细胞核蛋白组学技术的研究进展
1.3.3 磷酸化蛋白质组研究进展
1.3.4 质谱技术在翻译后修饰蛋白质组学中的研究应用
1.4 本研究的目的以及意义
2 材料与方法
2.1 实验试剂与设备
2.1.1 主要实验试剂
2.1.2 主要实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞系的建立以及鉴定
2.2.2 奶牛乳腺上皮细胞细胞核磷酸化蛋白质的提取、纯化及鉴定
2.2.3 奶牛乳腺上皮细胞细胞核磷蛋白质的质谱鉴定
2.2.4 建立蛋氨酸对奶牛乳腺上皮细胞泌乳相关信号分子影响模型
2.2.5 奶牛乳腺上皮细胞细胞核磷酸化蛋白质组中差异表达的泌乳相关信号分子的验证
2.3 数据处理及统计分析
3 结果与分析
3.1 DCMECs的培养、鉴定及细胞核蛋白鉴定结果
3.2 DCMECS细胞核磷酸化蛋白质质谱鉴定结果
3.3 蛋氨酸对DCMECS泌乳相关信号分子影响结果验证
3.4 筛选出来的DCMECs细胞核磷酸化蛋白质组中相关信号分子的验证结果
4 讨论
4.1 DCMECs的培养、验证及蛋氨酸对DCMECS泌乳能力的影响
4.2 细胞核磷酸化蛋白质谱结果分析
4.2.1 细胞核磷酸化蛋白提取
4.2.2 质谱鉴定结果生物信息学分析
4.3 DCMECS细胞核磷酸化蛋白质组中泌乳相关蛋白的验证
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]钙联蛋白调控内质网应激诱导的细胞凋亡[J]. 李爱玲,修瑞娟. 基础医学与临床. 2011(03)
[2]健康奶牛与临床型乳腺炎奶牛乳腺核蛋白组差异表达分析[J]. 王建锋,赵兴绪,张勇,徐铁山. 畜牧兽医学报. 2010(01)
[3]mTOR/S6K1信号通路研究进展[J]. 刘效磊,牛燕媚,傅力. 中国运动医学杂志. 2010(01)
[4]BEP2D细胞受照前后蛋白质组学研究[J]. 薛振伟,周小林,谷娟娟,蘧艳峰,崔梅萍. 辐射防护. 2009(04)
[5]奶牛乳腺上皮细胞系的建立[J]. 陈建晖,佟慧丽,李庆章,高学军. 畜牧兽医学报. 2009(05)
[6]羟基喜树碱诱导肝癌细胞凋亡前后细胞核蛋白质组变化的定量分析[J]. 颜玉蓉,付玉荣,邱宗荫. 分子细胞生物学报. 2008(02)
[7]牛乳腺上皮细胞的分离培养及其生物学特性[J]. 多曙光,吴应积,罗奋华,旭日干. 动物学研究. 2006(03)
[8]过瘤胃蛋氨酸对奶牛产奶量以及乳成分的影响[J]. 韩兆玉,周岩民,王根林,刘永刚. 畜牧与兽医. 2005(05)
博士论文
[1]MAPK1和eEF1B对奶牛乳腺上皮细胞泌乳调控作用及机理研究[D]. 陆黎敏.东北农业大学 2013
硕士论文
[1]奶牛乳腺上皮细胞JAK2-STAT5和mTOR信号通路协同调控乳蛋白合成[D]. 史琳琳.东北农业大学 2013
本文编号：3490100
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