牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻技术优化及其作用机制研究

发布时间：2021-11-12 06:52

　　牛GV期卵母细胞相对于成熟卵母细胞的冷冻保存要困难很多,但在远距离运输卵母细胞时,必须进行冷冻保存。因此,开发GV期卵母细胞冷冻保存技术对于充分利用未成熟卵母细胞、特别是远距离屠宰场卵巢卵母细胞保存具有重要的现实意义。海藻糖（trehalose）是一种类似于蔗糖的非还原性双糖,能形成玻璃状保护层保护处于极端条件下的生命体,因此探索海藻糖作为非渗透性冷冻保护剂替代常规玻璃化冷冻保护剂（CPA）中蔗糖、用于冷冻保存GV期卵母细胞的可能性,并找到最适替代浓度是本研究的目的之一。有研究证明,常规溶解冷冻保护剂的缓冲介质DPBS（杜氏磷酸盐缓冲液）中的主要成分NaCl,对胚胎的超低温冷冻具有一定的危害,但其对卵母细胞尤其是GV期卵母细胞的保护作用未见报道。因此,本研究的目的之二,是以氯化胆碱代替NaCl,以及联合海藻糖和氯化胆碱用于GV期卵母细胞的冷冻保存,探索其保护效果。此外,本研究的目的之三,是研究冷冻损伤的机制,凋亡基因和周期基因相对表达量的差异性。研究内容和结果如下：1.不同浓度海藻糖对牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻的效果（1）在对不同浓度海藻糖作为非渗透性保护剂对卵母细胞存活能力评价的实验... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
文献综述
    1 牛卵母细胞冷冻保存研究进展
        1.1 牛卵母细胞冷冻保存研究现状
        1.2 卵母细胞冷冻保存的技术方法
        1.3 玻璃化冷冻保存研究进展
        1.4 冷冻保护剂
    2 海藻糖在卵母细胞玻璃化冷冻中的应用
        2.1 海藻糖的结构和性质
        2.2 海藻糖在哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻中的应用
    3 氯化胆碱在胚胎或卵母细胞冷冻中的应用及优势
        3.1 氯化胆碱在胚胎和配子冷冻中的应用
        3.2 卵母细胞冷冻液母液中氯化胆碱替代氯化钠的优势原因
    4 玻璃化冷冻对卵母细胞结构、细胞器和发育潜力的影响
        4.1 玻璃化冷冻对卵母细胞细胞骨架及染色体的影响
        4.2 玻璃化冷冻对卵母细胞细胞膜的影响
        4.3 玻璃化冷冻对卵母细胞透明带的影响
        4.4 玻璃化冷冻对卵母细胞线粒体的影响
        4.5 玻璃化冷冻对卵母细胞的分子损伤的影响
    5 本实验的研究目的及意义
第一章 不同浓度海藻糖对牛GV期卵母细胞冷冻的效果
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料
        2.2 方法
        2.3 统计分析
    3 结果与分析
        3.1 冷冻对卵母细胞存活能力的影响
        3.2 冷冻对卵母细胞透明带的影响
        3.3 冷冻对卵母细胞细胞器的影响
        3.4 冷冻对卵丘细胞扩展的影响
        3.5 冷冻对卵母细胞发育潜力的影响
    4 讨论
        4.1 卵母细胞存活能力的评价
        4.2 卵母细胞冻存后透明带硬度的评价
        4.3 卵母细胞冻存后细胞器的评价
        4.4 卵母细胞冻融后卵丘扩展和发育能力的评价
    5 小结
第二章 牛GV期卵母细胞冷冻损伤的分子机制
    1 前言
    2 实验材料与方法
        2.1 实验材料
        2.2 实验方法
    3 结果与分析
        3.1 冷冻对卵母细胞凋亡的影响
        3.2 冷冻对卵母细胞凋亡和周期基因mRNA表达量的影响
    4 讨论
    5 小结
第三章 改良磷酸盐缓冲液(mPBS)配制玻璃化冷冻液冷冻卵母细胞效果评价
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 材料
        2.2 方法
    3 结果与分析
        3.1 以mPBS配制玻璃化冷冻保护剂,冷冻对卵母细胞存活能力的影响
        3.2 以mPBS配制玻璃化冷冻保护剂,冷冻对卵母细胞透明带硬度的影响
        3.3 以mPBS配制玻璃化冷冻保护剂,冷冻对卵母细胞发育潜力的影响
        3.4 以mPBS配制玻璃化冷冻保护剂,冷冻对卵母细胞凋亡和周期基因mRNA表达量的影响
    4 讨论
        4.1 卵母细胞冻融后活力评价
        4.2 卵母细胞冻融后透明带硬度评价
        4.3 卵母细胞冻融后发育能力的评价
        4.4 卵母细胞冻融后细胞凋亡和细胞周期基因mRNA表达量评价
    5 小结
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]海藻糖抗冻保护作用研究进展[J]. 廖丹,陈雪,张原.  广东农业科学. 2011(18)
[2]牛卵母细胞玻璃化冷冻对基因mRNA表达量的影响[J]. 林嘉鹏,王静,赵云程,陈童,汪立芹,陈博,黄俊成.  中国实验动物学报. 2011(02)
[3]牛羊卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展[J]. 莫显红,李俊杰,桑润滋,温兵强.  黑龙江畜牧兽医. 2011(07)
[4]海藻糖用于玻璃化冷冻卵母细胞的研究[J]. 王念念,刘雨生.  国际生殖健康/计划生育杂志. 2009(03)
[5]开放式拉长细管冷冻法对牛卵母细胞体外受精后发育的影响[J]. 禹学礼,邓雯,庞有志,王新庄,昝林森,李晓霞,冉林武.  畜牧兽医学报. 2005(03)
[6]3种因素对牛卵母细胞玻璃毛细管玻璃化冷冻效果的影响研究[J]. 包华琼,李跃民,王新庄,张世生,金立方,张德芳.  动物医学进展. 2004(06)
[7]OPS玻璃化冷冻对山羊卵母细胞超微结构的影响[J]. 刘海军,张美佳,侯蓉,张志和,王基山,兰景超,钱菊汾,张安居.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2001(03)
[8]卵子冻存技术[J]. 李媛.  国外医学.妇产科学分册. 1996(06)
[9]牛体外成熟卵母细胞冷冻保存的研究[J]. 冯怀亮,孙青原,李子义,杨庆章,刘国艺,秦鹏春.  畜牧兽医学报. 1995(06)

博士论文
[1]丙酮酸调控小鼠卵母细胞排卵后老化的研究[D]. 刘娜.山东农业大学 2008
[2]玻璃化冷冻技术的实验研究[D]. 王雁林.华中科技大学 2006

硕士论文
[1]TSA与5-aza-dc对早期牛孤雄胚体外发育的作用[D]. 王晓民.华中农业大学 2011
[2]猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻的研究[D]. 陆文昊.安徽农业大学 2010
[3]奶牛卵母细胞玻璃化冷冻方法及胚胎程序化冷冻研究[D]. 王珂.甘肃农业大学 2008
[4]水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存的研究[D]. 唐业刚.西南大学 2006
[5]小鼠孵化囊胚和猪囊胚玻璃化冷冻保存技术的研究[D]. 周崇.中国农业大学 2003



本文编号：3490390