超声破碎和胰蛋白酶酶解奶牛胎盘制备还原性多肽方法的建立与优化
发布时间：2021-11-12 14:49
为实现高效制备奶牛胎盘还原性多肽,选取身体健康、妊娠足月、自然分娩的中国荷斯坦奶牛新鲜胎盘,冰浴条件下匀浆化,采用超声破碎法和胰蛋白酶酶解法制备奶牛胎盘多肽,探究不同匀浆浓度、超声功率、酶底质量比和处理时间对制备胎盘多肽收率和还原力的影响,并以响应面法结合提取率与还原力对提取条件进行优化。结果表明:超声破碎法在匀浆浓度50.00%,功率1 800W,破碎7.50min可获得最佳提取率（0.95%）和VitC当量（2.91μg/mg）;胰蛋白酶酶解法分别在反应时间5.78和5.13h,匀浆浓度30.21%和35.59%,酶底质量比3.24%和4.19%时,可得最高提取率（5.55%）和VitC当量（39.32μg/mg）;提取率与还原力均呈显著正相关（P<0.05）;经响应面优化,奶牛胎盘还原性多肽最佳制备条件为:酶解时间5.8h,底物浓度34.98%,酶底质量比3.33%,此时理论综合提取率为2037.92μg/g。综上,奶牛胎盘含有天然还原性多肽,超声破碎法和胰蛋白酶酶解法均可应用于提取奶牛胎盘还原性多肽,胰蛋白酶酶解法优于超声破碎法。
【文章来源】：中国农业大学学报. 2020,25(04)北大核心CSCD
【文章页数】：13 页
【部分图文】：
维生素C的普鲁士蓝法标准曲线
酶解结果的响应面曲线见图2：随酶解时间延长，提取率提升速度随之变缓，这说明奶牛胎盘组织几乎被完全酶解（图2(a））；随底物浓度上升，同一反应时间的提取率随酶底比上升先上升后下降（图2(b））；酶底比随酶底比上升，同一反应时间的提取率先上升后下降，但高酶底比组响应值仍高于低酶底比组，这表明酶解反应在试验区间内某一值达到了饱和，并可能伴有胰蛋白酶的自身酶解现象（图2(c））。以最大化提取率为目标，获取胰蛋白酶酶解奶牛胎盘理论最佳条件为：反应时间5.78h，底物浓度30.21%，酶底质量比3.24%，此时的理论提取率为5.55%。为验证模型有效性，以优化结果进行六次平行试验，实际试验条件为：反应时间5.75h，底物浓度30.00%，酶底比3.00%，实测平均提取率为5.48%，与理论值接近且重复性较好，说明响应面优化结果可靠。
以综合提取率（E）为响应值，对胰蛋白酶酶解法制备胎盘还原性多肽条件进一步优化。结果如下：在A因素水平为-1,B因素水平为0,C因素水平为-1和1，及A因素为-1,C因素为0,B因素为-1和1时，响应值分别为466.83、1 272.54、521.73和861.19μg/g,A因素为0,B因素为1,C因素为-1和1，及A因素为0,B因素为-1,C因素为-1和1时，响应值分别为376.93、1 301.64、408.00和456.44μg/g；三因素均为0时，响应值分别为1457.65、1 910.01、2 066.57、2 094.40和2 180.11μg/g;A因素为1,B因素为0,C因素为-1和1时，及C因素为0,B因素为-1和1时响应值分别为1 394.89、1 317.27、578.00和1 612.63μg/g。建立回归模型，所得二次响应面回归方程为：式中：A、B和C分别为1.3.3所编码的时间、底物浓度和酶底比。
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪骨骼肌肌内脂滴分离和纯化方法的探究[J]. 闫峻,马衍旋,穆淑琴,唐湘方,郑梓,李宁,刘陈龙,李千军,孙超. 动物营养学报. 2019(01)
[2]超声破碎法及匀浆法提取鹿茸多肽的比较研究[J]. 张维,于珊珊,尹宏兵. 吉林中医药. 2017(12)
[3]鲣鳔蛋白抗氧化酶解物制备工艺[J]. 向泽敏,邱晓挺,娄永江,严小军. 水产学报. 2017(06)
[4]酶解制备羊胎盘抗氧化肽工艺条件的优化[J]. 姜惠敏,李明,曹光群,杨成. 食品与生物技术学报. 2017(01)
[5]牛羊胎盘免疫调节因子的提取及对PANC-Ⅰ增殖和迁移影响的比较[J]. 王晶,林志颖,林立梅,李夏伟,侯东霞,李雪玲. 农业生物技术学报. 2016(12)
[6]大别山野葛根异黄酮超声辅助提取工艺的响应面优化与还原力测定[J]. 黄仁术,胡晓梦,何惠利. 中国药学杂志. 2015(01)
[7]松仁蛋白酶解液体外抗氧化活性分析[J]. 林秀芳,吴晓红,赵梓辰,徐冰心,高小棠,刘敏. 中国油脂. 2014(11)
[8]采用不同蛋白酶制备羊胎盘抗氧化肽的研究[J]. 周洁静,侯银臣,刘旺旺,肖琳,杨公明. 食品工业科技. 2015(05)
[9]两种紫河车炮制方法的理化指标对比研究[J]. 王清萍. 保健医学研究与实践. 2013(03)
[10]胎盘多肽对重症呼吸机相关性肺炎老年患者免疫功能的影响[J]. 吴兴茂,汪海源,杨振宇,李杨,佟欣,臧彬. 中国老年学杂志. 2013(10)
博士论文
[1]牛胎盘免疫活性肽提取与酶法制备研究[D]. 房新平.江南大学 2007
本文编号：3491133
【文章来源】：中国农业大学学报. 2020,25(04)北大核心CSCD
【文章页数】：13 页
【部分图文】：
维生素C的普鲁士蓝法标准曲线
酶解结果的响应面曲线见图2：随酶解时间延长，提取率提升速度随之变缓，这说明奶牛胎盘组织几乎被完全酶解（图2(a））；随底物浓度上升，同一反应时间的提取率随酶底比上升先上升后下降（图2(b））；酶底比随酶底比上升，同一反应时间的提取率先上升后下降，但高酶底比组响应值仍高于低酶底比组，这表明酶解反应在试验区间内某一值达到了饱和，并可能伴有胰蛋白酶的自身酶解现象（图2(c））。以最大化提取率为目标，获取胰蛋白酶酶解奶牛胎盘理论最佳条件为：反应时间5.78h，底物浓度30.21%，酶底质量比3.24%，此时的理论提取率为5.55%。为验证模型有效性，以优化结果进行六次平行试验，实际试验条件为：反应时间5.75h，底物浓度30.00%，酶底比3.00%，实测平均提取率为5.48%，与理论值接近且重复性较好，说明响应面优化结果可靠。
以综合提取率（E）为响应值，对胰蛋白酶酶解法制备胎盘还原性多肽条件进一步优化。结果如下：在A因素水平为-1,B因素水平为0,C因素水平为-1和1，及A因素为-1,C因素为0,B因素为-1和1时，响应值分别为466.83、1 272.54、521.73和861.19μg/g,A因素为0,B因素为1,C因素为-1和1，及A因素为0,B因素为-1,C因素为-1和1时，响应值分别为376.93、1 301.64、408.00和456.44μg/g；三因素均为0时，响应值分别为1457.65、1 910.01、2 066.57、2 094.40和2 180.11μg/g;A因素为1,B因素为0,C因素为-1和1时，及C因素为0,B因素为-1和1时响应值分别为1 394.89、1 317.27、578.00和1 612.63μg/g。建立回归模型，所得二次响应面回归方程为：式中：A、B和C分别为1.3.3所编码的时间、底物浓度和酶底比。
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪骨骼肌肌内脂滴分离和纯化方法的探究[J]. 闫峻,马衍旋,穆淑琴,唐湘方,郑梓,李宁,刘陈龙,李千军,孙超. 动物营养学报. 2019(01)
[2]超声破碎法及匀浆法提取鹿茸多肽的比较研究[J]. 张维,于珊珊,尹宏兵. 吉林中医药. 2017(12)
[3]鲣鳔蛋白抗氧化酶解物制备工艺[J]. 向泽敏,邱晓挺,娄永江,严小军. 水产学报. 2017(06)
[4]酶解制备羊胎盘抗氧化肽工艺条件的优化[J]. 姜惠敏,李明,曹光群,杨成. 食品与生物技术学报. 2017(01)
[5]牛羊胎盘免疫调节因子的提取及对PANC-Ⅰ增殖和迁移影响的比较[J]. 王晶,林志颖,林立梅,李夏伟,侯东霞,李雪玲. 农业生物技术学报. 2016(12)
[6]大别山野葛根异黄酮超声辅助提取工艺的响应面优化与还原力测定[J]. 黄仁术,胡晓梦,何惠利. 中国药学杂志. 2015(01)
[7]松仁蛋白酶解液体外抗氧化活性分析[J]. 林秀芳,吴晓红,赵梓辰,徐冰心,高小棠,刘敏. 中国油脂. 2014(11)
[8]采用不同蛋白酶制备羊胎盘抗氧化肽的研究[J]. 周洁静,侯银臣,刘旺旺,肖琳,杨公明. 食品工业科技. 2015(05)
[9]两种紫河车炮制方法的理化指标对比研究[J]. 王清萍. 保健医学研究与实践. 2013(03)
[10]胎盘多肽对重症呼吸机相关性肺炎老年患者免疫功能的影响[J]. 吴兴茂,汪海源,杨振宇,李杨,佟欣,臧彬. 中国老年学杂志. 2013(10)
博士论文
[1]牛胎盘免疫活性肽提取与酶法制备研究[D]. 房新平.江南大学 2007
本文编号：3491133
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3491133.html
