猪流行性腹泻病毒CH/GX/2015/750A株S2蛋白的原核表达及抗原性分析

发布时间：2021-11-12 23:53

　　本研究旨在了解猪流行性腹泻病毒（PEDV）S2蛋白的抗原性,为下一步诊断试剂盒及亚单位疫苗的研究奠定基础。试验通过反转录PCR的方法扩增PEDV CH/GX/2015/750A株S2基因部分片段（S2A）,将其克隆后插入原核表达载体pET-32a（+）中,构建原核表达质粒pET32a-S2A。将原核表达质粒转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达重组蛋白,Ni柱亲和层析法纯化重组蛋白,Western blotting检测重组蛋白S2A的反应原性。纯化复性的重组蛋白S2A免疫昆明小鼠制备多克隆抗体,用间接ELISA法检测获得的多克隆抗体效价,间接免疫荧光法验证制备的多克隆抗体的特异性。结果显示,重组S2A蛋白在IPTG终浓度为0.2 mmol/L时,37℃诱导表达3 h可获得最高表达量,该重组蛋白主要以包涵体的形式存在;Western blotting结果显示,纯化复性后的重组蛋白S2A能够与PEDV阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性。制备的多克隆抗体效价可达1∶32 000,间接免疫荧光结果表明,制备的多克隆抗体能够特异性识别和结合PEDV。结果表明,PEDV S2... 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(06)北大核心

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

IPTG诱导浓度优化

诱导时间优化

将以包涵体形式表达的带His标签的重组S2A蛋白进行纯化,纯化产物经SDS-PAGE电泳分析,结果表明纯化后获得了较纯的重组S2A蛋白(图7)。图2 pET32a-S2A的双酶切鉴定

【参考文献】：
期刊论文
[1]猪流行性腹泻病毒JS2017株的分离鉴定及S基因序列分析[J]. 朱海侠.  中国畜牧兽医. 2019(02)
[2]猪流行性腹泻病毒SD201604株的分离鉴定及致病性研究[J]. 吴白,苏玮玮,鞠德财,夏铭崎,张树成,王炜.  中国畜牧兽医. 2018(11)
[3]6株猪流行性腹泻病毒贵州株S基因序列分析[J]. 毛黎红,张双翔,周碧君,王伟,胡兴义,程振涛,文明,王开功.  中国畜牧兽医. 2017(06)
[4]2011—2016年浙江省猪流行性腹泻病毒S基因与ORF3基因遗传进化分析[J]. 吴旺霞,王一成,吴润,袁秀芳,徐丽华,李军星,苏菲.  浙江农业学报. 2017(03)
[5]猪流行性腹泻病毒S1蛋白表达及反应原性分析[J]. 桂锐,童岑,周丹娜,郭锐,刘威,田永祥,刘东宇,李坤,张辉,李家奎.  畜牧与兽医. 2017(02)
[6]猪流行性腹泻病毒分离鉴定及其灭活疫苗免疫保护效果研究[J]. 代洪波,岳丰雄,徐宏军,魏胜男,高鹏,胡来根.  动物医学进展. 2017(01)
[7]2014—2015年我国部分省份猪流行性腹泻病毒S基因的遗传变异分析[J]. 王飞,陈小芬,苏丹萍,宋亚兵,焦臣鹏,陈瑞爱,贺东生.  中国兽医学报. 2016(09)
[8]猪流行性腹泻病毒GD-A株的分离鉴定及S基因序列分析[J]. 朱俊,高又文,张杰,叶昱,廖明,樊惠英.  华南农业大学学报. 2015(04)
[9]猪流行性腹泻病毒S、N和ORF3基因的遗传变异分析[J]. 王隆柏,林裕胜,车勇良,吴学敏,陈如敬,邵良平,周伦江.  畜牧兽医学报. 2014(11)
[10]2012年河南省猪流行性腹泻病毒分离株S1基因遗传变异分析[J]. 陈慧娟,吴志明,闫若潜,赵雪丽,赵明军,周兵强,孔刚锐,闫志玲,程俊贞,靳利粉.  中国畜牧兽医. 2014(03)

博士论文
[1]猪流行性腹泻病毒S蛋白抗原表位鉴定及受体结合域的初步筛选[D]. 孙东波.中国农业科学院 2008



本文编号：3491888