山羊精原干细胞体外增殖及其分化的调控
发布时间：2021-11-13 08:20
精原干细胞（Spermatogonial stem cells, SSCs）是雄性动物精子发生的基础,并通过自我增殖和分化产生大量的精子,维持雄性动物终生生育能力。动物睾丸中SSCs数量极少,建立一个有效的体外培养系统,使SSCs在体外大量增殖,以获得足量的SSCs,再对其进行转基因调控后,移植到供体动物体内或体外分化的方式获得通过减数分裂的精细胞或完整的精子,可为克隆动物、转基因动物生产及一些人类遗传性疾病的基因治疗提供新的途径。山羊是一种经济适用且孕期短家畜,能用于生产转基因重组蛋白和多种有价值的产品。因此,研究山羊SSCs体外增殖和分化调控的影响因素可逐步建立山羊SSCs体外培养系统,进而在生物医学的研究、农产品和生物制药业上更具有重要的意义。为了逐步建立一个有效的山羊SSCs体外培养系统,使SSCs在体外大量增殖,同时,为以后对山羊SSCs进行转基因调控后,制作转基因动物。本课题主要开展以下研究：（1）筛选合适日龄的山羊睾丸作为获取山羊SSCs的材料,以合适日龄的山羊为获得SSCs供体,筛选合适分离睾丸组织为细胞悬液的消化方法,再筛选的合适日龄和适当消化方法的基础上,进而筛选合...
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：150 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
精原细胞分化棋型As,单个A型箱原细地，Apre成对的A里箱巨细胞，Ael,盛状的A型箱硕细皿:to:中间型箱原细甩
安徽农业大学?第一章山羊精原干细胞分离纯化方法的建立??纯化后睾丸细胞总量?９．６６?±?２．３１〇／〇、１０．９８?±?４．０３％、７．７１?±?２．４４〇／〇、１２．０４?±?３．２８〇／〇、１３．３４??±１．６９％，Ｗ抗体蟲化法所得的Ｔｈｙ－１＋细胞数最低，显著低于其他各组（尸＜０．０５）；??ＢＳＡ＋层粘连蛋白联合纯化法所得Ｔｈｙ－１＋细胞数显著高于明胶法、ＢＳＡ法（Ｐ＜化０５），??但明胶法和ＢＳＡ法之间Ｗ及层粘连蛋白和ＢＳＡ＋层粘连蛋白之间差异不显著（ｆ＞??化０５），结果表明，ＢＳＡ＋层粘连蛋白联合纯化所得到的Ｔｈｙ－１＋阳性细胞数最多，是５??种方法里最合适的纯化方法。??２．３．３细胞培养后克隆形态和ＡＫＰ染色??由图１－１２可知，通过不同纯化法得到的山羊睾丸ＳＳＣｓ体外培养１０?ｄ后，形成??典型的ＳＳＣｓ克隆，不同纯化法所得到克隆形状没有变化，均为致密的边缘不整齐的??集落状，突出于睾丸体细胞向空间发展。进一步通过ＡＫＰ染色可知，不同纯化法得??到的山羊睾丸ＳＳＣｓ体外培养后，克陰均表现为ＡＫＰ阳性（图１－１２Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ和??Ｅ）。??
安徽农此人学?巧一窜山羊梢原干细胞分该纯化义让的建立??化０５），但与明胶纯化法、ＢＳＡ纯化法相比，没有显著性差异存在（＾＞化０５）；明胶??纯化法、ＢＳＡ纯化法和掉粘连蛋白纯化法呈組之间形成的平均克隆数差异不显著（Ｐ??＞０．０５）。不同纯化法所得到睾丸细胞悬液培养１０?ｄ后，所形成的ＳＳＣｓ平均克隆面??积分别为?７８３．７９?±?２０９．２２、８３６．２７?±?１８８．３４、７９６．４９?±?１６３．６６、８６７．３１?±?２１３．４４?和?８０６．８４??±２３３．１５?各组之间没有显著性差异（Ｐ＞〇．〇５）（图１－１３８）。??Ｂ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同温度对体外培养精原细胞精子发生相关基因的影响[J]. 朱晶晶,王达利,李三华,邓呈亮,孙广峰. 中华男科学杂志. 2012(02)
[2]精子发生过程中基因表达转录水平的调控[J]. 张秀军,刘美玲,贾孟春. 遗传. 2011(12)
[3]精原干细胞增殖和分化相关因子的研究进展[J]. 孙大林,张新东,金保方. 中华男科学杂志. 2011(03)
[4]STRA8表达作为出生后雄性生殖细胞特异性标志的应用研究现状[J]. 卢夏英,杨蓓,徐斯凡,邹挺. 中华男科学杂志. 2010(02)
[5]绒山羊Scp3基因的克隆及睾丸中第一轮减数分裂的发生[J]. 侯越,吴应积,罗奋华,苏慧敏,张学明,张岩,白音巴图,刘陶迪. 动物学研究. 2009(03)
[6]精原干细胞和睾丸组织的同种异体移植[J]. 黄永平,邓耀良,关晓峰,黎承杨. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(53)
[7]温度对体外培养精原细胞增殖和凋亡的影响[J]. 张晓丽,高英茂,赵舒武,邴鲁军. 解剖学杂志. 2008(06)
[8]大鼠睾丸支持细胞的分离、鉴定与培养[J]. 邱志群,舒为群,付文娟,曹佳. 癌变.畸变.突变. 2008(04)
[9]肝细胞生长因子和器官纤维化[J]. 扈琳,刘芙蓉,李英. 中国老年学杂志. 2008(02)
[10]同源物种不同饲养层对鸡精原干细胞体外培养的影响[J]. 魏彩霞,孙国波,余飞,李碧春. 中国家禽. 2007(12)
博士论文
[1]牛雄性生殖干细胞体外长期培养的研究[D]. 毕聪明.西北农林科技大学 2007
[2]牛雄性生殖干细胞分离培养特性及移植研究[D]. 董武子.西北农林科技大学 2006
硕士论文
[1]体外培养生精细胞的增殖分化效应及显微授精研究[D]. 宋小敏.安徽医科大学 2012
[2]奶山羊雄性生殖干细胞的分离培养及向精子细胞的诱导分化[D]. 朱海鲸.西北农林科技大学 2011
[3]小鼠精原干细胞的分离培养及诱导分化[D]. 宋锐.安徽农业大学 2010
[4]山羊精原细胞体外分离及培养分化与移植[D]. 杨延飞.西北农林科技大学 2005
本文编号：3492679
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：150 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
精原细胞分化棋型As,单个A型箱原细地，Apre成对的A里箱巨细胞，Ael,盛状的A型箱硕细皿:to:中间型箱原细甩
安徽农业大学?第一章山羊精原干细胞分离纯化方法的建立??纯化后睾丸细胞总量?９．６６?±?２．３１〇／〇、１０．９８?±?４．０３％、７．７１?±?２．４４〇／〇、１２．０４?±?３．２８〇／〇、１３．３４??±１．６９％，Ｗ抗体蟲化法所得的Ｔｈｙ－１＋细胞数最低，显著低于其他各组（尸＜０．０５）；??ＢＳＡ＋层粘连蛋白联合纯化法所得Ｔｈｙ－１＋细胞数显著高于明胶法、ＢＳＡ法（Ｐ＜化０５），??但明胶法和ＢＳＡ法之间Ｗ及层粘连蛋白和ＢＳＡ＋层粘连蛋白之间差异不显著（ｆ＞??化０５），结果表明，ＢＳＡ＋层粘连蛋白联合纯化所得到的Ｔｈｙ－１＋阳性细胞数最多，是５??种方法里最合适的纯化方法。??２．３．３细胞培养后克隆形态和ＡＫＰ染色??由图１－１２可知，通过不同纯化法得到的山羊睾丸ＳＳＣｓ体外培养１０?ｄ后，形成??典型的ＳＳＣｓ克隆，不同纯化法所得到克隆形状没有变化，均为致密的边缘不整齐的??集落状，突出于睾丸体细胞向空间发展。进一步通过ＡＫＰ染色可知，不同纯化法得??到的山羊睾丸ＳＳＣｓ体外培养后，克陰均表现为ＡＫＰ阳性（图１－１２Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ和??Ｅ）。??
安徽农此人学?巧一窜山羊梢原干细胞分该纯化义让的建立??化０５），但与明胶纯化法、ＢＳＡ纯化法相比，没有显著性差异存在（＾＞化０５）；明胶??纯化法、ＢＳＡ纯化法和掉粘连蛋白纯化法呈組之间形成的平均克隆数差异不显著（Ｐ??＞０．０５）。不同纯化法所得到睾丸细胞悬液培养１０?ｄ后，所形成的ＳＳＣｓ平均克隆面??积分别为?７８３．７９?±?２０９．２２、８３６．２７?±?１８８．３４、７９６．４９?±?１６３．６６、８６７．３１?±?２１３．４４?和?８０６．８４??±２３３．１５?各组之间没有显著性差异（Ｐ＞〇．〇５）（图１－１３８）。??Ｂ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同温度对体外培养精原细胞精子发生相关基因的影响[J]. 朱晶晶,王达利,李三华,邓呈亮,孙广峰. 中华男科学杂志. 2012(02)
[2]精子发生过程中基因表达转录水平的调控[J]. 张秀军,刘美玲,贾孟春. 遗传. 2011(12)
[3]精原干细胞增殖和分化相关因子的研究进展[J]. 孙大林,张新东,金保方. 中华男科学杂志. 2011(03)
[4]STRA8表达作为出生后雄性生殖细胞特异性标志的应用研究现状[J]. 卢夏英,杨蓓,徐斯凡,邹挺. 中华男科学杂志. 2010(02)
[5]绒山羊Scp3基因的克隆及睾丸中第一轮减数分裂的发生[J]. 侯越,吴应积,罗奋华,苏慧敏,张学明,张岩,白音巴图,刘陶迪. 动物学研究. 2009(03)
[6]精原干细胞和睾丸组织的同种异体移植[J]. 黄永平,邓耀良,关晓峰,黎承杨. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(53)
[7]温度对体外培养精原细胞增殖和凋亡的影响[J]. 张晓丽,高英茂,赵舒武,邴鲁军. 解剖学杂志. 2008(06)
[8]大鼠睾丸支持细胞的分离、鉴定与培养[J]. 邱志群,舒为群,付文娟,曹佳. 癌变.畸变.突变. 2008(04)
[9]肝细胞生长因子和器官纤维化[J]. 扈琳,刘芙蓉,李英. 中国老年学杂志. 2008(02)
[10]同源物种不同饲养层对鸡精原干细胞体外培养的影响[J]. 魏彩霞,孙国波,余飞,李碧春. 中国家禽. 2007(12)
博士论文
[1]牛雄性生殖干细胞体外长期培养的研究[D]. 毕聪明.西北农林科技大学 2007
[2]牛雄性生殖干细胞分离培养特性及移植研究[D]. 董武子.西北农林科技大学 2006
硕士论文
[1]体外培养生精细胞的增殖分化效应及显微授精研究[D]. 宋小敏.安徽医科大学 2012
[2]奶山羊雄性生殖干细胞的分离培养及向精子细胞的诱导分化[D]. 朱海鲸.西北农林科技大学 2011
[3]小鼠精原干细胞的分离培养及诱导分化[D]. 宋锐.安徽农业大学 2010
[4]山羊精原细胞体外分离及培养分化与移植[D]. 杨延飞.西北农林科技大学 2005
本文编号：3492679
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