牛IFN-α1、IFN-α7、IFN-α14的酵母表达及其理化性质与生物学活性研究

发布时间：2021-11-13 20:04

　　干扰素（interferon, IFN）是在病毒或干扰素诱生剂的作用下,由特定细胞所产生的,具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的一类高活性、多功能分泌性糖蛋白,是动物机体抵抗病毒入侵的第一道防线。通常将干扰素分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型干扰素,在众多的干扰素类型中,以IFN-α的抗病毒活性最为显著。研究发现,体外表达的重组牛IFN-α （Bovine Interferon-a, BoIFN-a）对水泡性口炎病毒（VSV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、口蹄疫病毒（FMDV）和副流感病毒-3（PIV-3）等病毒的复制和增殖具有抑制作用。巴斯德毕赤酵母表达系统是近年来发展最为迅速、应用最为广泛的外源蛋白表达系统之一,目前已利用该表达系统进行了多种动物干扰素的具活性表达。牛IFN-α多基因家族有10-12个亚型,目前已有其中8个亚型基因的克隆的相关报道,但尚无关于牛IFN-α多基因家族的系统研究及各个亚型的理化性质与生物活性的具体研究。因此,关于牛IFN-α各亚型的系统性研究具有重要意义。本研究以本实验室制备并保存的含有BoIFN-α1、 BoIFN-α7、BoIFN-α14（BoIFN-α1/7... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 前言
    1.1 干扰素概述
        1.1.1 干扰素的来源与发现
        1.1.2 干扰素的分类
        1.1.3 干扰素的分子结构
    1.2 牛干扰素α和重组牛干扰素α概述
        1.2.1 牛干扰素α的结构特点
        1.2.2 牛干扰素α的生物学活性及作用机理
        1.2.3 重组牛干扰素α的研究进展
    1.3 利用巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白的研究
        1.3.1 巴斯德毕赤酵母表达系统简介
        1.3.2 巴斯德毕赤酵母表达系统的特点
        1.3.3 巴斯德毕赤酵母应用于干扰素表达的研究
    1.4 研究的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 质粒、载体、宿主菌、病毒
        2.1.2 细胞、培养基、血清
        2.1.3 酶、抗体、生化试剂
        2.1.4 主要仪器和设备
    2.2 试验方法
        2.2.1 BoIFN-α1/7/14成熟肽基因的克隆及序列分析
        2.2.2 重组酵母表达载体pPICZαA-BoIFN-α1/7/14的构建及鉴定
        2.2.3 重组酵母表达载体pPICZαA-BoIFN-α1/7/14转化入毕赤酵母GS115
        2.2.4 重组酵母的鉴定
        2.2.5 阳性重组毕赤酵母的诱导表达与重组BoIFN-α1/7/14的初步纯化
        2.2.6 重组BoIFN-α1/7/14的SDS-PAGE和Western blot分析
        2.2.7 重组BoIFN-α1/7/14理化性质分析
        2.2.8 重组BoIFN-α1/7/14体外抗病毒活性分析
        2.2.9 重组BoIFN-α1/7/14抗增殖活性测定
        2.2.10 数据统计
3 结果与分析
    3.1 BoIFN-α1/7/14成熟肽基因的PCR扩增
        3.1.1 BoIFN-α1/7/14成熟肽基因的PCR扩增
        3.1.2 重组质粒pEASY-Blunt-Simple-BoIFN-α1/7/14的鉴定
        3.1.3 BoIFN-α1/7/14成熟肽基因的序列分析
    3.2 重组酵母表达载体的构建及鉴定
    3.3 重组酵母的鉴定
    3.4 重组BoIFN-α1/7/14的SDS-PAGE和Western blot分析
    3.5 重组BoIFN-α1/7/14理化性质分析
        3.5.1 重组BoIFN-α1/7/14胰酶敏感性分析
        3.5.2 重组BoIFN-α1/7/14 pH敏感性分析
        3.5.3 重组BoIFN-α1/7/14温度敏感性分析
    3.6 重组BoIFN-α1/7/14体外抗病毒活性分析
        3.6.1 重组BoIFN-α1/7/14抗VSV活性测定
        3.6.2 重组BoIFN-α1/7/14抗病毒活性阻断分析
        3.6.3 重组BoIFN-α1/7/14对IBRV的抗病毒效果
    3.7 重组BoIFN-α1/7/14抗增殖活性测定
4 讨论
    4.1 关于牛干扰素α多基因家族及亚型划分的研究
    4.2 BoIFN-α1/7/14成熟肽基因的PCR引物设计
    4.3 酵母表达蛋白的糖基化
    4.4 BoIFN-α1/7/14的理化性质
    4.5 BoIFN-α1/7/14的抗病毒活性
    4.6 BoIFN-α1/7/14的抗增殖活性
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
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[2]毕赤酵母蛋白表达系统研究进展[J]. 杨梅,温真,林丽玉,杨彩云.  生物技术通报. 2011(04)
[3]猪β防御素2与猪γ干扰素在毕赤酵母中的融合表达及生物学活性比较[J]. 张定勇,孙蕾,杨利敏,刘文军.  生物工程学报. 2010(12)
[4]牛α干扰素在新城疫病毒La Sota疫苗株中的高效稳定表达及抗病毒活性检测[J]. 葛金英,丁玉林,解希帝,曹有才,刘娣,步志高.  黑龙江畜牧兽医. 2009(09)
[5]猪α干扰素研究进展[J]. 赵明军,闫若潜,韩记用,吴志明.  畜禽业. 2008(01)
[6]兽用干扰素的研究进展[J]. 刘宇鹏,吴琼,任晓慧,刘松财.  现代农业科技. 2007(11)
[7]牦牛IFN-α基因的克隆表达及抗病毒活性研究[J]. 蔡进忠,史喜菊,李少勇,韩雪,汪明.  中国兽医杂志. 2006(10)
[8]猪β干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其对伪狂犬病毒的抑制作用[J]. 曹瑞兵,周国栋,周海霞,包晶晶,陈溥言.  微生物学报. 2006(03)
[9]人血清白蛋白和人干扰素α2b的融合蛋白在毕赤酵母中的表达[J]. 唱韶红,巩新,杨志愉,王同映,马国昌,马清钧,吴军.  生物工程学报. 2006(02)
[10]奶牛α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定[J]. 李学仁,曹瑞兵,李斐,魏建超,陈溥言.  中国生物工程杂志. 2005(09)



本文编号：3493633