禽源大肠杆菌烈性噬菌体的分离鉴定及功能基因组学分析

发布时间：2021-11-15 06:58

　　为了分离纯化禽源致病性大肠埃希菌的噬菌体并测定其性质,将近4000份鸭粪样品来源于安徽和县某两个规模化鸭场及南京某市场某鸭场的鸭粪样品离心、过滤后提取上清液,采用点滴法和双层琼脂法对致病性大肠杆菌噬菌体进行鉴定、纯化并保存,结果共分离鉴定了136株大肠埃希菌烈性噬菌体,并对其中的四十余株进行了生物特性学分析,包括透射电镜观察,宿主谱测定等,对其中的HX01,NJ01进行了基因组提取并全基因组测序。以噬菌体NJ01为例,透射电镜下结构判定为短尾噬菌体科（Podoviridae）。宿主范围较窄,仅能裂解被测大肠杆菌中的三株：DE172、NJ01和MC1061。效价为1.33×1013pfu/ml,（?）将纯培养物稀释至108PFU/mL,每隔15min（至4h）测其一步生长曲线,表明潜伏期为30min,平均裂解量为157PFU/cell,最佳感染复数为100。采用自己优化改进过噬菌体基因组提取和纯化方法,制备了高质量的烈性噬菌体HX01和NJ01的基因组,并通过第二代高通量测序技术进行了全基因组测序,以NJ01为例,测序结果显示：NJ01全基因组大小为77,448bp, G+C含量为42.... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文献综述
    第一章 禽致病性大肠杆菌(病)研究概况
        参考文献
    第二章 噬菌体研究情况概述
        1 噬菌体的分类及形态结构
            1.1 噬菌体的生物学特性及分类概况
            1.2 有尾病毒目(Caudovirales)
        2 噬菌体的基因组学
        3 噬菌体的应用
            3.1 细菌的鉴定和分型
            3.2 作为分子生物学研究的工具
        4 本文的研究意义及目的
        参考文献
第二篇 实验研究
    第三章 烈性噬菌体的分离鉴定及生物特性学分析
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 噬菌体的生物特性学研究方法
        2 结果与分析
            2.1 噬菌体的分离及纯化
            2.2 噬菌体透射电镜下的形态观察
            2.3 电镜观察
            2.4 宿主范围测定
            2.5 噬菌体效价的测定
            2.6 噬菌体最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)的测定
            2.7 一步生长曲线
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第四章 噬菌体全基因组制备、测序及比较基因组分析
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 噬菌体基因组制备及测序
        2 结果与分析
            2.1 NJ01基因组测序结果及注释
            2.2 核酸接收序列号
            2.3 NJ01的比较基因组学分析
            2.4 臨菌体旳进化史探索
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第五章 全噬菌体蛋白样品制备与二维电泳
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 全噬菌体蛋白样品制备方法
            1.3 全噬菌体蛋白样品二维电泳
        2 结果
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第六章 烈性噬菌体NJ01治疗禽源大肠杆菌感染的探索研究
        摘要
        1 材料
            1.1 样品及试剂
            1.2 实验动物
        2 方法
            2.1 禽源大肠杆菌DE172的复壮
            2.2 DE172感染小鼠LD50的测定
            2.3 噬菌体疗效探索
            2.4 数据统计分析
        3 结果与分析
            3.1 小鼠LD50的测定结果
            3.2 噬菌体NJ01疗效测定结果
        4 讨论
        参考文献
        Abstract
全文结论
致谢
已发表文章


【参考文献】：
期刊论文
[1]ICTV第九次报告对病毒分类系统的一些修改[J]. 张忠信.  病毒学报. 2012(05)
[2]噬菌体治疗制剂的研究进展[J]. 高成秀,严亚贤.  中国兽医科学. 2007(07)
[3]致病性鸡大肠杆菌噬菌体的分离与效价测定[J]. 孙海虹,马同锁,于珊,赵宝华.  河北师范大学学报(自然科学版). 2007(01)
[4]噬菌体治疗细菌感染的研究[J]. 孙伟,朱春宝.  国外医药(抗生素分册). 2005(02)
[5]油酸钠与紫外线联用灭活血浆中病毒的研究[J]. 刘蓉,沈德林,张文福,袁庆霞,钟儒波.  中国消毒学杂志. 2001(04)



本文编号：3496273