疫苗抗体压下分离的H9N2亚型禽流感病毒的基因分析及其免疫原性研究
发布时间：2021-11-15 07:55
H9N2禽流感（Avian Influenza,AI）属于A型流感病毒造成的低致病性禽流感,是禽类中流行广、危害大的一种重要传染病。H9N2禽流感病毒（Avian Influenza virus,AIV）最早于1966年从北美火鸡体内分离到,我国1992年首次分离到该病毒后,在多个省份中相继爆发,H9N2禽流感病毒与多种病原体混合感染鸡群,造成养禽业严重的经济损失。我国1998年开始广泛使用商业化H9N2禽流感疫苗,有效的控制了疫情发展。但2010～2013年由于病毒的抗原漂移和基因重组,原有疫苗不能提供完全保护,在免疫鸡群中也能分离到H9N2禽流感病毒,导致H9N2禽流感病毒在我国仍广泛传播。本研究在2015～2016年期间从国内几个接种H9N2禽流感疫苗的鸡场,对H9禽流感疫苗抗体效价为16～128的鸡群定期采集病料,分离并鉴定到15株H9N2禽流感病毒;采用分子生物学技术以及动物实验对这15株H9N2禽流感病毒的基因变化和免疫原性进行了探讨。1.疫苗抗体压下H9N2 AIV的分离鉴定本研究从定期接种H9N2禽流感疫苗的鸡场中,采集含有疫苗抗体的病鸡或者健康鸡气管、肺脏、喉头以及泄...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１分离株ＨＡ基因电泳图
２５０?ｉ?Ｈ）〇??图２－１分离株ＨＡ基因电泳图?图２－２分离株ＮＡ基因电泳图??Ｆｉｇ．?２－１?ＨＡ?ｇｅｎｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ?ｏｆ?ｉｓｏｌａｔｅｓ?Ｆｉｇ．?２－２?ＮＡ?ｇｅｎｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ?ｏｆ?ｉｓｏｌａｔｅｓ??Ｍ－．ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ；?Ｍ：ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ；??１－５：部分分离株ＨＡ基因?１＿４：部分分离株ＮＡ基因??３．１．２分离株ＨＡ基因和ＮＡ基因同源性分析??将上述１５株毒株成功扩增到的ＨＡ基因进行胶回收，在上海生工生物工程股份有限??公司进行测序。将１５株分离株ＨＡ基因与常用疫苗株的同源性进行分析比较。??本研宂分离到的１５株Ｈ９Ｎ２禽流感病毒的ＨＡ基因的编码序列含有１６８３个核苷酸，??核苷酸和氨基酸的同源性范围分别为９３．６－９９．９％和９３．８－９９．８％，相比２０１１?－２０１４年分离株??同源性２０１５年－２０１６年分离株间同源性较高，结果如图２－３、图２－４。??对选择的１０株Ｈ９Ｎ２禽流感病毒代表株的ＮＡ基因进行测序，结果显示，ＮＡ基因全??长为１４０１ｂｐ，编码４６６个氨基酸。分离株之间ＮＡ基因核苷酸与氨基酸同源性分别为９７．０－??９９．４°／。和?９６．１－９９．６°／〇之间。分离株与三株０＾００／８３／９４、０＾只／？／９８和０＾０／６／９６疫苗株??ＮＡ基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为９１．３－９２．２％和９１．０－９２．７％、９０．８－９１．８％和９０．４－??９２．１％、９０．４－９１
ｉｒ－?ｗ＾ｉＦ：ｋ？＇［？ｌｉ－？?，??图２－３分离株与疫苗株ＨＡ基因核苷酸同源性??Ｆｉｇ．?２－３?Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ?ｈｏｍｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ＨＡ?ｇｅｎｅ?ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ?ｉｎ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ａｎｄ?ｖａｃｃｉｎｅ?ｓｔｒａｉｎｓ??Ｐｍｍｍｍｉ％??ｆ?ｍ?％ｎ?＊／?ｅ?’將ｅ料ｒ?ｔ？?＜?：滅？ｎ?ｈ?＜射５?ｊ斜§?？?４减４?％?雜於．箱條．＿??ｉ?麵＿?授．７，ｓｅ９＾９?ｔ？ｃ?９ｉ??ｉ＃Ｔ＾ｉＳ２?Ｍｔ＇ｔｓ§?ｉ??ｊ?ＩＭＵｓｔｊ?＿ｓｎ?？＾．６／＾３＇％２％ｔ５?－ａｃ＇＾３?３?猶ｆ§．＿??＿?＾Ｔｉｉ?之？?＞?？?ｍ§！ｆ?＾?？?ｍ?［ｍｉ＾４＾ｉ?Ｗ，?ＩＩ．?／ｎ膝辦？?＿??ＴＩＣＴ＾?ｉ＂?Ｉｉ？１３５Ｔ５〇Ｈ＾＾?全７ｉ二爸ｉＺ＃５ｒ＾Ｙ”＾ｉＴ辱二ｉｌ?＾…．＾１?奶幻備，５＇料??？?ｉ￣：Ｔ！：ｍＶ?ｏ＇ｉ?＾?ＨＫｈ＾ｎ＇０＇＾Ｔ＾ｍＴ＾＇ｉｒｉＳＳＴｗＴ＊ＢＴＳＳＶ＇ｍ＇＇＾＇?＇＊＇?开鱗綱糊??＿??＊＞?§?１?ｈａ?ｎ?ａｓ?ｊ?ｔ§?；?ｕ?ｕ?设ｉ：?料吃驗空，ｍ?ｇ?？ｊ！４？擔魏兹麵??ｉ?鲁，３４：?Ｕ?Ｉ?？?４?２ｉ?２ｔ?＼?４ｔ?２＇ｆ?Ｋｉ?？ｆ?＊９？ｌＵ？４＇§？？１＆？４?ｍ：?ｔｆ￥?９０４＾４?參?？！？■餘■，．漆轉??：
【参考文献】：
期刊论文
[1]新余市甲型流感病毒M基因进化及金刚烷胺类耐药性分析[J]. 付倩,文奇,周银古,刘琴,宋利军,熊英,李建雄. 实验与检验医学. 2017(06)
[2]2011年-2014年我国部分省区H9N2亚型禽流感病毒HA基因序列分析[J]. 陈顺艳,廖昌韬,曾凡桂,严专强,苏晓娜,廖秋生,覃健萍,陈峰. 动物医学进展. 2016(02)
[3]规模化肉鸡场常见呼吸道病原体感染状况调查[J]. 朱明霞,牛玉娟,马海营,吕传位,张清林,刘思当. 山东农业大学学报(自然科学版). 2015(06)
[4]当前水禽流感防疫的主要问题及策略[J]. 罗开健. 北方牧业. 2014(10)
[5]免疫鸡群中分离的H9N2亚型禽流感病毒的分子特征研究[J]. 卞学兵,曾嘉梅,颜焰,廖敏,周继勇. 中国预防兽医学报. 2012(01)
[6]中国禽流感诊断技术和疫苗的研究进展[J]. 雷彩侠,夏业才,李俊平. 中国兽药杂志. 2006(01)
[7]简述我国禽流感疫苗的研究与应用[J]. 刘文兴,李峰,冯春复. 中国家禽. 2005(23)
[8]H9N2亚型禽流感病毒人工感染蛋鸡的组织病理学研究[J]. 罗玲,胡薛英,程国富谷长勤,周全,李自力,赵雅心,周诗其,毕丁仁. 中国预防兽医学报. 2004(04)
[9]禽流感疫苗研究进展[J]. 陈全姣,金梅林,陈焕春. 中国生物工程杂志. 2004(04)
[10]H9N2亚型禽流感病毒基因组全长序列测定和各基因的遗传分析[J]. 卢建红,刘秀梵,邵卫星,张评浒,韦栋平. 微生物学报. 2003(04)
博士论文
[1]1999年～2013年山东鸡源H9N2亚型禽流感病毒遗传演化和血凝素抗原性研究[D]. 张伟.中国农业大学 2015
硕士论文
[1]H9N2亚型禽流感病毒的序列分析及其生物学特性研究[D]. 徐丹雯.扬州大学 2016
[2]H9N2亚型禽流感病毒诱导蛋鸡输卵管组织凋亡及免疫相关基因表达的研究[D]. 唐超.西北农林科技大学 2015
[3]H9N2禽流感灭活疫苗免疫增强剂研究[D]. 刘振兴.南京农业大学 2012
[4]抗体选择压作用下H9N2亚型禽流感病毒HA基因的变异[D]. 娄本红.山东农业大学 2009
[5]猪流感病毒和“猪—禽”流感重配病毒的拯救及其生物学特性的研究[D]. 彭亚平.华中农业大学 2008
本文编号：3496360
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１分离株ＨＡ基因电泳图
２５０?ｉ?Ｈ）〇??图２－１分离株ＨＡ基因电泳图?图２－２分离株ＮＡ基因电泳图??Ｆｉｇ．?２－１?ＨＡ?ｇｅｎｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ?ｏｆ?ｉｓｏｌａｔｅｓ?Ｆｉｇ．?２－２?ＮＡ?ｇｅｎｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ?ｏｆ?ｉｓｏｌａｔｅｓ??Ｍ－．ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ；?Ｍ：ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ；??１－５：部分分离株ＨＡ基因?１＿４：部分分离株ＮＡ基因??３．１．２分离株ＨＡ基因和ＮＡ基因同源性分析??将上述１５株毒株成功扩增到的ＨＡ基因进行胶回收，在上海生工生物工程股份有限??公司进行测序。将１５株分离株ＨＡ基因与常用疫苗株的同源性进行分析比较。??本研宂分离到的１５株Ｈ９Ｎ２禽流感病毒的ＨＡ基因的编码序列含有１６８３个核苷酸，??核苷酸和氨基酸的同源性范围分别为９３．６－９９．９％和９３．８－９９．８％，相比２０１１?－２０１４年分离株??同源性２０１５年－２０１６年分离株间同源性较高，结果如图２－３、图２－４。??对选择的１０株Ｈ９Ｎ２禽流感病毒代表株的ＮＡ基因进行测序，结果显示，ＮＡ基因全??长为１４０１ｂｐ，编码４６６个氨基酸。分离株之间ＮＡ基因核苷酸与氨基酸同源性分别为９７．０－??９９．４°／。和?９６．１－９９．６°／〇之间。分离株与三株０＾００／８３／９４、０＾只／？／９８和０＾０／６／９６疫苗株??ＮＡ基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为９１．３－９２．２％和９１．０－９２．７％、９０．８－９１．８％和９０．４－??９２．１％、９０．４－９１
ｉｒ－?ｗ＾ｉＦ：ｋ？＇［？ｌｉ－？?，??图２－３分离株与疫苗株ＨＡ基因核苷酸同源性??Ｆｉｇ．?２－３?Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ?ｈｏｍｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ＨＡ?ｇｅｎｅ?ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ?ｉｎ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ａｎｄ?ｖａｃｃｉｎｅ?ｓｔｒａｉｎｓ??Ｐｍｍｍｍｉ％??ｆ?ｍ?％ｎ?＊／?ｅ?’將ｅ料ｒ?ｔ？?＜?：滅？ｎ?ｈ?＜射５?ｊ斜§?？?４减４?％?雜於．箱條．＿??ｉ?麵＿?授．７，ｓｅ９＾９?ｔ？ｃ?９ｉ??ｉ＃Ｔ＾ｉＳ２?Ｍｔ＇ｔｓ§?ｉ??ｊ?ＩＭＵｓｔｊ?＿ｓｎ?？＾．６／＾３＇％２％ｔ５?－ａｃ＇＾３?３?猶ｆ§．＿??＿?＾Ｔｉｉ?之？?＞?？?ｍ§！ｆ?＾?？?ｍ?［ｍｉ＾４＾ｉ?Ｗ，?ＩＩ．?／ｎ膝辦？?＿??ＴＩＣＴ＾?ｉ＂?Ｉｉ？１３５Ｔ５〇Ｈ＾＾?全７ｉ二爸ｉＺ＃５ｒ＾Ｙ”＾ｉＴ辱二ｉｌ?＾…．＾１?奶幻備，５＇料??？?ｉ￣：Ｔ！：ｍＶ?ｏ＇ｉ?＾?ＨＫｈ＾ｎ＇０＇＾Ｔ＾ｍＴ＾＇ｉｒｉＳＳＴｗＴ＊ＢＴＳＳＶ＇ｍ＇＇＾＇?＇＊＇?开鱗綱糊??＿??＊＞?§?１?ｈａ?ｎ?ａｓ?ｊ?ｔ§?；?ｕ?ｕ?设ｉ：?料吃驗空，ｍ?ｇ?？ｊ！４？擔魏兹麵??ｉ?鲁，３４：?Ｕ?Ｉ?？?４?２ｉ?２ｔ?＼?４ｔ?２＇ｆ?Ｋｉ?？ｆ?＊９？ｌＵ？４＇§？？１＆？４?ｍ：?ｔｆ￥?９０４＾４?參?？！？■餘■，．漆轉??：
【参考文献】：
期刊论文
[1]新余市甲型流感病毒M基因进化及金刚烷胺类耐药性分析[J]. 付倩,文奇,周银古,刘琴,宋利军,熊英,李建雄. 实验与检验医学. 2017(06)
[2]2011年-2014年我国部分省区H9N2亚型禽流感病毒HA基因序列分析[J]. 陈顺艳,廖昌韬,曾凡桂,严专强,苏晓娜,廖秋生,覃健萍,陈峰. 动物医学进展. 2016(02)
[3]规模化肉鸡场常见呼吸道病原体感染状况调查[J]. 朱明霞,牛玉娟,马海营,吕传位,张清林,刘思当. 山东农业大学学报(自然科学版). 2015(06)
[4]当前水禽流感防疫的主要问题及策略[J]. 罗开健. 北方牧业. 2014(10)
[5]免疫鸡群中分离的H9N2亚型禽流感病毒的分子特征研究[J]. 卞学兵,曾嘉梅,颜焰,廖敏,周继勇. 中国预防兽医学报. 2012(01)
[6]中国禽流感诊断技术和疫苗的研究进展[J]. 雷彩侠,夏业才,李俊平. 中国兽药杂志. 2006(01)
[7]简述我国禽流感疫苗的研究与应用[J]. 刘文兴,李峰,冯春复. 中国家禽. 2005(23)
[8]H9N2亚型禽流感病毒人工感染蛋鸡的组织病理学研究[J]. 罗玲,胡薛英,程国富谷长勤,周全,李自力,赵雅心,周诗其,毕丁仁. 中国预防兽医学报. 2004(04)
[9]禽流感疫苗研究进展[J]. 陈全姣,金梅林,陈焕春. 中国生物工程杂志. 2004(04)
[10]H9N2亚型禽流感病毒基因组全长序列测定和各基因的遗传分析[J]. 卢建红,刘秀梵,邵卫星,张评浒,韦栋平. 微生物学报. 2003(04)
博士论文
[1]1999年～2013年山东鸡源H9N2亚型禽流感病毒遗传演化和血凝素抗原性研究[D]. 张伟.中国农业大学 2015
硕士论文
[1]H9N2亚型禽流感病毒的序列分析及其生物学特性研究[D]. 徐丹雯.扬州大学 2016
[2]H9N2亚型禽流感病毒诱导蛋鸡输卵管组织凋亡及免疫相关基因表达的研究[D]. 唐超.西北农林科技大学 2015
[3]H9N2禽流感灭活疫苗免疫增强剂研究[D]. 刘振兴.南京农业大学 2012
[4]抗体选择压作用下H9N2亚型禽流感病毒HA基因的变异[D]. 娄本红.山东农业大学 2009
[5]猪流感病毒和“猪—禽”流感重配病毒的拯救及其生物学特性的研究[D]. 彭亚平.华中农业大学 2008
本文编号：3496360
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3496360.html
