J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮组织增殖病病毒协同致瘤机制研究
发布时间：2021-11-15 20:45
病毒共感染是自然界中普遍的现象,在共感染过程中病毒复制、细胞表型、病理变化、宿主范围、组织嗜性和感染率等生物学特性都会发生变化。J亚群禽白血病病毒（ALV-J）,属于反转录病毒科,可引起免疫抑制、生长迟缓和多种多样的肿瘤。禽网状内皮组织增殖病（Reticuloendotheliosis,RE）,同样属于反转录病毒科,指包括禽网状内皮组织増殖病病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）、脾坏死病毒（Spleen necrosis virus,SNV）、鸡合胞体病毒（Chicken syncytial virus,CSV）和鸭传染性贫血病毒（Duck infectious anemia virus,DIA）等多种网状内皮组织增殖病病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）群的反转录病毒引起的一群病理综合征,典型病症为免疫抑制、矮小综合症和淋巴组织或其它组织形成的慢性肿瘤。在过去二十多年,我国大量流行病学调查报告显示ALV-J与REV的共感染普遍存在。除协同抑制抗体生成、促进致病性增强外,ALV-J与REV共感染最主要的特征为引起致瘤谱...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：99 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
ABSTRACT
1.前言
1.1 ALV-J与REV共感染的研究进展
1.1.1 ALV-J的研究进展
1.1.2 REV的研究进展
1.1.2.1 REV的致病性
1.1.3 ALV-J与REV共感染的流行病学
1.1.4 ALV-J与REV共感染的致病性
1.2 病毒之间协同感染机制的研究进展
1.3 MIRNA在病毒感染中的作用
1.3.1 miRNA的功能
1.3.2 miRNA与病毒的关系
1.3.3 miRNA对肿瘤形成的研究进展
1.3.4 miR-147对肿瘤形成的研究进展
1.4 NF-ΚB/KIAA1199/EGFR信号通路对肿瘤形成的研究进展
1.4.1 KIAA1199对肿瘤形成的研究进展
1.4.2 NF-κB与EGFR信号通路对肿瘤形成的研究进展
1.5 本研究的目的与意义
2.材料与方法
2.1 主要试剂及耗材
2.2 主要缓冲液
2.3 主要仪器
2.4 细胞及毒株
2.4.1 CEF的制作
2.4.2 细胞的传代培养
2.4.3 细胞的接毒
2.4.4 病毒TCID50的检测
2.5 ALV-J与REV共感染SPF鸡模型的建立
2.5.1 尿囊腔接种
2.5.2 ALV-Jp27抗原的检测
2.5.3 REV抗原的检测
2.5.4 鸡体重及免疫指数的测定
2.5.5 组织病理学观察
2.5.6 组织内ALV-J和REV病毒载量的测定
2.5.7 组织内KIAA1199的测定
2.5.8 组织内NF-κB活性的测定
2.5.9 组织内EGFR的测定
2.6 ALV-J与REV共感染的ITRAQ质谱定量分析
2.6.1 iTRAQ肽段标记
2.6.2 肽段分级
2.6.3 液相色谱(LC)-电喷雾电离(ESI)串联存储(MS/MS)质谱分析(LC-MS/MS)
2.6.4 序列数据库查询及数据分析
2.7 ALV-J与REV共感染的MICRORNA表达谱分析
2.7.1 RNA样本检测
2.7.2 文库构建和上机测序
2.7.3 microRNA信息分析
2.8 负染电镜观察
2.9 CCK-8对细胞增殖的检测
2.10 RNA的提取及反转录
2.11 荧光定量PCR
2.12 蛋白质免疫印迹
2.13 免疫组化
2.14 统计分析
3.结果与分析
3.1 ALV-J与REV共感染协同促进病毒的复制和细胞的生存
3.1.1 ALV-J与REV共感染协同促进REV的复制
3.1.2 ALV-J与REV共感染协同促进ALV-Jgp85和REVenv蛋白的表达
3.1.3 ALV-J与REV共感染协同促进细胞的生存
3.2 ALV-J与REV共感染协同加剧病理变化并促进肿瘤生成
3.2.1 ALV-J与REV共感染引起鸡胚非特异死亡
3.2.2 ALV-J与REV共感染引起鸡免疫抑制与生长迟缓
3.2.3 ALV-J与REV共感染在各组织器官中促进病毒的复制
3.2.4 ALV-J与REV共感染协同加剧病理变化
3.2.5 ALV-J与REV共感染协同促进肿瘤生成
3.3 ALV-J与REV共感染协同激活新的原癌基因KIAA1199和抑制MIR-147的表达
3.3.1 ALV-J与REV共感染的iTRAQ蛋白组学分析
3.3.2 ALV-J与REV共感染的microRNA表达谱分析
3.3.3 ALV-J与REV共感染协同激活KIAA1199的表达
3.3.4 ALV-J与REV共感染协同抑制miR-147的表达
3.4 MIR-147靶向调节KIAA1199的3’UTR区
3.5 ALV-J与REV共感染通过促进NF-ΚB和EGFR信号通路激活KIAA
3.5.1 ALV-J与REV共感染协同上调NF-κB和EGFR相关蛋白
3.5.2 在ALV-J与REV共感染过程中NF-κB、KIAA1199和EGFR这三者关系的验证
3.6 MIR-147靶向调节的NF-ΚBP503’UTR区
3.7 ALV-J与REV共感染协同激活KIAA1199和抑制MIR-147的分子机制图
4.讨论
4.1 ALV-J与REV共感染协同促进病毒复制与肿瘤生成
4.2 MIR-147靶向NF-ΚBP50和KIAA1199的3’UTR区来调节KIAA
4.3 ALV-J与REV共感染通过激活NF-ΚB/KIAA1199/EGFR信号通路来促进肿瘤生成
5.结论
6.参考文献
7.致谢
8.攻读学位期间发表论文及专利情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]蛋种鸡ALV-J与REV共感染病变新特点[J]. 王玥,姜艳萍,于琳琳,王峰,陈洪博,王晓伟,成子强. 畜牧兽医学报. 2011(11)
[2]microRNAs, an active and versatile group in cancers[J]. Jeffrey Liu. International Journal of Oral Science. 2011(04)
[3]NF-κB信号通路在病毒感染中的作用[J]. 王平忠,于海涛,白雪帆,张颖. 细胞与分子免疫学杂志. 2011(08)
[4]REV和ALV-J共感染鸡病毒血症及抗体反应的相互影响[J]. 孟珊珊,崔治中,孙淑红. 中国兽医学报. 2006(04)
[5]网状内皮增生病病毒感染SPF鸡对疫苗免疫反应的抑制作用[J]. 孙淑红,崔治中,邱玉玉. Virologica Sinica. 2006(01)
[6]中国麻鸡中发现禽J亚群白血病[J]. 成子强,张利,刘思当,张玲娟,崔治中. 微生物学报. 2005(04)
[7]KIAA基因家族的研究进展[J]. 段丽琼,张萍,陈万涛. 上海第二医科大学学报. 2005(04)
[8]从J亚群禽白血病肿瘤中检测出禽网状内皮组织增生症病毒[J]. 张志,崔治中,姜世金. 中国兽医学报. 2004(01)
[9]鸡混合感染J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮增殖症病毒的初步研究[J]. 商营利,刘思当,丁宝君,肖一红. 山东家禽. 2003(05)
[10]商品代肉鸡J亚群禽白血病的病理及病毒分离鉴定[J]. 张志,崔治中,赵宏坤,王海蓉,许益明. 中国兽医杂志. 2002(06)
本文编号：3497461
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：99 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
ABSTRACT
1.前言
1.1 ALV-J与REV共感染的研究进展
1.1.1 ALV-J的研究进展
1.1.2 REV的研究进展
1.1.2.1 REV的致病性
1.1.3 ALV-J与REV共感染的流行病学
1.1.4 ALV-J与REV共感染的致病性
1.2 病毒之间协同感染机制的研究进展
1.3 MIRNA在病毒感染中的作用
1.3.1 miRNA的功能
1.3.2 miRNA与病毒的关系
1.3.3 miRNA对肿瘤形成的研究进展
1.3.4 miR-147对肿瘤形成的研究进展
1.4 NF-ΚB/KIAA1199/EGFR信号通路对肿瘤形成的研究进展
1.4.1 KIAA1199对肿瘤形成的研究进展
1.4.2 NF-κB与EGFR信号通路对肿瘤形成的研究进展
1.5 本研究的目的与意义
2.材料与方法
2.1 主要试剂及耗材
2.2 主要缓冲液
2.3 主要仪器
2.4 细胞及毒株
2.4.1 CEF的制作
2.4.2 细胞的传代培养
2.4.3 细胞的接毒
2.4.4 病毒TCID50的检测
2.5 ALV-J与REV共感染SPF鸡模型的建立
2.5.1 尿囊腔接种
2.5.2 ALV-Jp27抗原的检测
2.5.3 REV抗原的检测
2.5.4 鸡体重及免疫指数的测定
2.5.5 组织病理学观察
2.5.6 组织内ALV-J和REV病毒载量的测定
2.5.7 组织内KIAA1199的测定
2.5.8 组织内NF-κB活性的测定
2.5.9 组织内EGFR的测定
2.6 ALV-J与REV共感染的ITRAQ质谱定量分析
2.6.1 iTRAQ肽段标记
2.6.2 肽段分级
2.6.3 液相色谱(LC)-电喷雾电离(ESI)串联存储(MS/MS)质谱分析(LC-MS/MS)
2.6.4 序列数据库查询及数据分析
2.7 ALV-J与REV共感染的MICRORNA表达谱分析
2.7.1 RNA样本检测
2.7.2 文库构建和上机测序
2.7.3 microRNA信息分析
2.8 负染电镜观察
2.9 CCK-8对细胞增殖的检测
2.10 RNA的提取及反转录
2.11 荧光定量PCR
2.12 蛋白质免疫印迹
2.13 免疫组化
2.14 统计分析
3.结果与分析
3.1 ALV-J与REV共感染协同促进病毒的复制和细胞的生存
3.1.1 ALV-J与REV共感染协同促进REV的复制
3.1.2 ALV-J与REV共感染协同促进ALV-Jgp85和REVenv蛋白的表达
3.1.3 ALV-J与REV共感染协同促进细胞的生存
3.2 ALV-J与REV共感染协同加剧病理变化并促进肿瘤生成
3.2.1 ALV-J与REV共感染引起鸡胚非特异死亡
3.2.2 ALV-J与REV共感染引起鸡免疫抑制与生长迟缓
3.2.3 ALV-J与REV共感染在各组织器官中促进病毒的复制
3.2.4 ALV-J与REV共感染协同加剧病理变化
3.2.5 ALV-J与REV共感染协同促进肿瘤生成
3.3 ALV-J与REV共感染协同激活新的原癌基因KIAA1199和抑制MIR-147的表达
3.3.1 ALV-J与REV共感染的iTRAQ蛋白组学分析
3.3.2 ALV-J与REV共感染的microRNA表达谱分析
3.3.3 ALV-J与REV共感染协同激活KIAA1199的表达
3.3.4 ALV-J与REV共感染协同抑制miR-147的表达
3.4 MIR-147靶向调节KIAA1199的3’UTR区
3.5 ALV-J与REV共感染通过促进NF-ΚB和EGFR信号通路激活KIAA
3.5.1 ALV-J与REV共感染协同上调NF-κB和EGFR相关蛋白
3.5.2 在ALV-J与REV共感染过程中NF-κB、KIAA1199和EGFR这三者关系的验证
3.6 MIR-147靶向调节的NF-ΚBP503’UTR区
3.7 ALV-J与REV共感染协同激活KIAA1199和抑制MIR-147的分子机制图
4.讨论
4.1 ALV-J与REV共感染协同促进病毒复制与肿瘤生成
4.2 MIR-147靶向NF-ΚBP50和KIAA1199的3’UTR区来调节KIAA
4.3 ALV-J与REV共感染通过激活NF-ΚB/KIAA1199/EGFR信号通路来促进肿瘤生成
5.结论
6.参考文献
7.致谢
8.攻读学位期间发表论文及专利情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]蛋种鸡ALV-J与REV共感染病变新特点[J]. 王玥,姜艳萍,于琳琳,王峰,陈洪博,王晓伟,成子强. 畜牧兽医学报. 2011(11)
[2]microRNAs, an active and versatile group in cancers[J]. Jeffrey Liu. International Journal of Oral Science. 2011(04)
[3]NF-κB信号通路在病毒感染中的作用[J]. 王平忠,于海涛,白雪帆,张颖. 细胞与分子免疫学杂志. 2011(08)
[4]REV和ALV-J共感染鸡病毒血症及抗体反应的相互影响[J]. 孟珊珊,崔治中,孙淑红. 中国兽医学报. 2006(04)
[5]网状内皮增生病病毒感染SPF鸡对疫苗免疫反应的抑制作用[J]. 孙淑红,崔治中,邱玉玉. Virologica Sinica. 2006(01)
[6]中国麻鸡中发现禽J亚群白血病[J]. 成子强,张利,刘思当,张玲娟,崔治中. 微生物学报. 2005(04)
[7]KIAA基因家族的研究进展[J]. 段丽琼,张萍,陈万涛. 上海第二医科大学学报. 2005(04)
[8]从J亚群禽白血病肿瘤中检测出禽网状内皮组织增生症病毒[J]. 张志,崔治中,姜世金. 中国兽医学报. 2004(01)
[9]鸡混合感染J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮增殖症病毒的初步研究[J]. 商营利,刘思当,丁宝君,肖一红. 山东家禽. 2003(05)
[10]商品代肉鸡J亚群禽白血病的病理及病毒分离鉴定[J]. 张志,崔治中,赵宏坤,王海蓉,许益明. 中国兽医杂志. 2002(06)
本文编号：3497461
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