鲁西黄牛胚胎骨骼肌卫星细胞分离培养及生物学特性研究
发布时间：2021-11-15 23:50
骨骼肌卫星细胞（satellite cells，SCs）最早由Mauro在蛙胫前肌中发现，具有较强的自我更新、增殖和多向分化潜能，在体外培养条件下能跨胚层分化为多种细胞类型。鲁西黄牛是世界上著名的肉用牛，已列入国家级畜禽遗传资源重点保护品种名录。本研究旨在建立鲁西黄牛胚胎骨骼肌卫星细胞体外扩增培养体系，并探索其低、中、高代次细胞增殖、分化等生物学特性，结论如下：（1）本研究选取鲁西黄牛四肢骨骼肌，采用机械分离法、联合酶消化法及差速贴壁法，成功分离获得牛SCs，优化了牛SCs体外扩增的最佳培养体系，并将牛SCs成功传至23代，冻存后牛SCs仍具有较高的细胞活率。（2）免疫细胞化学染色检测牛SCs标志物表达，结果显示，P4、P9、P20代牛SCs均为Desmin、MyoD阳性表达；RT-PCR检测牛SCs标志物表达，结果显示P4、P9、P20代牛SCs均为Desmin、Pax7、c-Met、Myf5阳性表达，且灰度分析结果显示，不同代次SCs同一标志物表达量差异不显著，符合SCs标志物表达情况。（3）P4、P9、P20代牛SCs生长曲线均呈标准“S”型，分别经历了潜伏期，对数生长期和平台期...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：94 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
Wnt信号通路Fig.1-1Wntsignalingpathways注：A:经典Wnt信号通路；B：Ca2+依赖的非典型Wnt信号通路；C：JNK依赖的非典型Wnt信号通路
图 2-1 原代培养 SCs 形态Fig.2-1 Cellular morphology of primary cultured SCs分离获得的细胞为圆形；B:差速培养 2h 后，贴壁的细胞为成纤维细胞，SCs 仍为悬浮的圆养 24h 后，贴壁的 SCs 形态；D:生长至约 80%的 SCs P0 代单层细胞形态。（40×）鲁西黄牛 SCs 培养体系的优化用 4 种不同的培养体系对原代牛 SCs 培养后，细胞表现出不同的增殖细胞处于生长潜伏期时，生长特性没有明显区别，但细胞进入生长殖能力出现显著变化，在培养体系Ⅰ培养下，细胞增殖缓慢，在培养下，细胞增殖速度均较培养体系Ⅰ要快，但两种体系对细胞增殖的，SCs 在培养体系Ⅳ的培养下，细胞增殖迅速，较其他三种体系更能增殖，是牛 SCs 在体外培养的最佳培养体系。
30鲁西黄牛胚胎骨骼肌卫星细胞分离培养及生物学特性研究注：A-X:P0 代至 P23 代 SCs 形态；D-K: P3 代至 P10 代 SCs,胞体饱满且折光性较强；L-Q: P11 代至 P16 代 SCs，仍具有较强的折光性；R: P17 代 SCs，折光性减弱，少数细胞内出现空泡；U：P20 代 SCs，出现明显衰老现象，大量细胞出现空泡，细胞立体感减弱；X：P23 代 SCs，胞质空泡明显，细胞立体感消失，几乎停止生长。（40×）2.3.4 鲁西黄牛 SCs 冻存与复苏牛 SCs 冻存前与复苏后的细胞在形态上无明显差异（如图 2-4），但随着细胞代次的增加，细胞的冻存活率逐渐降低（表 2-1）。方差分析结果表明，P4、P9 代 SCs冻存前后细胞活率差异显著（0.01＜P＜0.05），表明细胞经过冻存后冻存液会对细胞产生一定的损伤，但细胞代次低，细胞活力强，所以冻存液对细胞的损伤相对较小；而 P20 代 SCs 冻存前后细胞活率差异极显著（P＜0.01），表明冻存过程对 P20 代 SCs的损伤较大。A1 B1 C1
【参考文献】：
期刊论文
[1]wnt/β-catenin信号通路对动物卫星细胞向不同肌纤维类型分化的作用[J]. 史新娥,刘月光,杨秋梅,陈宗正,杨公社. 中国农业科学. 2012(07)
[2]利用单根肌纤维法分离和培养猪骨骼肌卫星细胞及其成肌诱导分化[J]. 刘月光,史新娥,沈清武,袁媛,杨秋梅,高晓娟,陈宗正,杨公社. 农业生物技术学报. 2011(05)
[3]大鼠肌肉卫星细胞的分离、鉴定与诱导分化[J]. 焦泽华,魏著英,白春玲,段彪,程磊,李光鹏. 农业生物技术学报. 2011(02)
[4]蛋鸡骨骼肌卫星细胞分离培养及鉴定[J]. 郑素月,樊宝良,张庆桥. 中国畜牧兽医. 2011(02)
[5]北京油鸡骨骼肌卫星细胞的分离、培养、鉴定及成肌诱导分化的研究[J]. 李方华,侯玲玲,马月辉,庞全海,关伟军. 中国农业科学. 2010(22)
[6]哺乳动物成体干细胞的研究进展[J]. 邓守龙,彭涛,吕自力,王亮,王安江,曹文广. 中国畜牧兽医. 2009(10)
[7]不同浓度PRP对骨骼肌干细胞成骨分化的影响[J]. 单连成,王刚,张长青,曾炳芳. 中国修复重建外科杂志. 2009(08)
[8]牛肌源性干细胞的培养和鉴定[J]. 韩颖,孔庆然,尹智,魏延昌,张鑫淼,汪亦男,刘忠华. 东北农业大学学报. 2008(12)
[9]蛋肉鸡骨骼肌卫星细胞的特性比较及分析[J]. 刘侠,陈岩. 现代生物医学进展. 2008(12)
[10]bFGF植入失神经骨骼肌对肌卫星细胞增殖与肌萎缩影响的实验研究[J]. 许蕙,朱悦,辛畅泰. 中国修复重建外科杂志. 2008(12)
本文编号：3497750
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：94 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
Wnt信号通路Fig.1-1Wntsignalingpathways注：A:经典Wnt信号通路；B：Ca2+依赖的非典型Wnt信号通路；C：JNK依赖的非典型Wnt信号通路
图 2-1 原代培养 SCs 形态Fig.2-1 Cellular morphology of primary cultured SCs分离获得的细胞为圆形；B:差速培养 2h 后，贴壁的细胞为成纤维细胞，SCs 仍为悬浮的圆养 24h 后，贴壁的 SCs 形态；D:生长至约 80%的 SCs P0 代单层细胞形态。（40×）鲁西黄牛 SCs 培养体系的优化用 4 种不同的培养体系对原代牛 SCs 培养后，细胞表现出不同的增殖细胞处于生长潜伏期时，生长特性没有明显区别，但细胞进入生长殖能力出现显著变化，在培养体系Ⅰ培养下，细胞增殖缓慢，在培养下，细胞增殖速度均较培养体系Ⅰ要快，但两种体系对细胞增殖的，SCs 在培养体系Ⅳ的培养下，细胞增殖迅速，较其他三种体系更能增殖，是牛 SCs 在体外培养的最佳培养体系。
30鲁西黄牛胚胎骨骼肌卫星细胞分离培养及生物学特性研究注：A-X:P0 代至 P23 代 SCs 形态；D-K: P3 代至 P10 代 SCs,胞体饱满且折光性较强；L-Q: P11 代至 P16 代 SCs，仍具有较强的折光性；R: P17 代 SCs，折光性减弱，少数细胞内出现空泡；U：P20 代 SCs，出现明显衰老现象，大量细胞出现空泡，细胞立体感减弱；X：P23 代 SCs，胞质空泡明显，细胞立体感消失，几乎停止生长。（40×）2.3.4 鲁西黄牛 SCs 冻存与复苏牛 SCs 冻存前与复苏后的细胞在形态上无明显差异（如图 2-4），但随着细胞代次的增加，细胞的冻存活率逐渐降低（表 2-1）。方差分析结果表明，P4、P9 代 SCs冻存前后细胞活率差异显著（0.01＜P＜0.05），表明细胞经过冻存后冻存液会对细胞产生一定的损伤，但细胞代次低，细胞活力强，所以冻存液对细胞的损伤相对较小；而 P20 代 SCs 冻存前后细胞活率差异极显著（P＜0.01），表明冻存过程对 P20 代 SCs的损伤较大。A1 B1 C1
【参考文献】：
期刊论文
[1]wnt/β-catenin信号通路对动物卫星细胞向不同肌纤维类型分化的作用[J]. 史新娥,刘月光,杨秋梅,陈宗正,杨公社. 中国农业科学. 2012(07)
[2]利用单根肌纤维法分离和培养猪骨骼肌卫星细胞及其成肌诱导分化[J]. 刘月光,史新娥,沈清武,袁媛,杨秋梅,高晓娟,陈宗正,杨公社. 农业生物技术学报. 2011(05)
[3]大鼠肌肉卫星细胞的分离、鉴定与诱导分化[J]. 焦泽华,魏著英,白春玲,段彪,程磊,李光鹏. 农业生物技术学报. 2011(02)
[4]蛋鸡骨骼肌卫星细胞分离培养及鉴定[J]. 郑素月,樊宝良,张庆桥. 中国畜牧兽医. 2011(02)
[5]北京油鸡骨骼肌卫星细胞的分离、培养、鉴定及成肌诱导分化的研究[J]. 李方华,侯玲玲,马月辉,庞全海,关伟军. 中国农业科学. 2010(22)
[6]哺乳动物成体干细胞的研究进展[J]. 邓守龙,彭涛,吕自力,王亮,王安江,曹文广. 中国畜牧兽医. 2009(10)
[7]不同浓度PRP对骨骼肌干细胞成骨分化的影响[J]. 单连成,王刚,张长青,曾炳芳. 中国修复重建外科杂志. 2009(08)
[8]牛肌源性干细胞的培养和鉴定[J]. 韩颖,孔庆然,尹智,魏延昌,张鑫淼,汪亦男,刘忠华. 东北农业大学学报. 2008(12)
[9]蛋肉鸡骨骼肌卫星细胞的特性比较及分析[J]. 刘侠,陈岩. 现代生物医学进展. 2008(12)
[10]bFGF植入失神经骨骼肌对肌卫星细胞增殖与肌萎缩影响的实验研究[J]. 许蕙,朱悦,辛畅泰. 中国修复重建外科杂志. 2008(12)
本文编号：3497750
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