鸡卵泡膜细胞中与膜联蛋白A2相互作用细胞蛋白的筛选及功能分析
发布时间：2021-11-16 10:01
膜联蛋白A2（AnnexinA2,ANXA2）是属于钙依赖性膜磷脂联结蛋白家族中的一员,在动物的多种组织与细胞内广泛存在,主要参与细胞生长、增殖、凋亡、囊泡运输、离子通道、细胞骨架形成等功能。研究表明,鸡卵泡膜细胞不仅能分泌雌激素,还能调控卵泡膜细胞中ANXA2的表达,并且卵泡膜中ANXA2基因的表达上调与卵泡发育密切相关。为探索ANXA2在鸡卵泡膜中发挥的作用,本研究首先对鸡ANXA2基因进行克隆和生物信息分析,通过构建鸡ANXA2基因重组原核载体,进行重组蛋白His-ANXA2的原核表达和纯化,同时利用His pull-down和质谱技术从鸡卵泡膜细胞中筛选与鸡ANXA2相互作用的细胞蛋白。1鸡ANXA2基因的克隆与生物信息学分析通过RT-PCR从鸡卵泡膜细胞中扩增ANXA2基因CDS区,将其亚克隆至原核表达载体pET-32a（+）构建重组原核表达载体pET-32a-ANXA2,并运用生物信息学软件对鸡ANXA2进行生物信息学分析。结果显示,鸡ANXA2基因编码区全长为1020 bp,共编码339个氨基酸,理论pI为6.92,分子量约为38.6 Ku。鸡ANXA2蛋白具有丰富的二级...
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
体外培养的鸡卵泡膜细胞
用特异性引物从鸡胚成纤维细胞总RNA反转录的cDNA中通过PCR扩增得到约1053 bp的特异性扩增条带(图1.2A),与预期目的片段大小一致。对获得的重组原核表达载体经过XhoⅠ和Bam HⅠ酶切电泳,获得约5900 bp的载体条带和1053 bp的目的基因条带(图1.2B)。将获得的阳性重组原核表达载体送公司测序,比对结果发现鸡ANXA2基因正确插入到原核表达载体pET-32a(+),并且未发生碱基的突变,说明成功构建重组原核表达载体pET-32a-ANXA2。3.3 鸡ANXA2基因的生物信息学分析
鸡ANXA2基因开放阅读框长度为1020 bp,共编码339个氨基酸,其中含量较高的氨基酸有亮氨酸(35个,占比10.3%)、赖氨酸(33个,占比9.7%)、天冬氨酸(27个,占比8.0%),含量较少的氨基酸是组氨酸(1.2%)、半膀胺酸(1.5%)、脯氨酸(1.8%);带负电荷的氨基酸残基总数(Asp+Glu):53。带正电荷的氨基酸残基(Arg+Lys)总数:53。ANXA2蛋白在哺乳动物网状细胞(体外)的半衰期为30 h,;酵母体内小于20 h;体内大肠杆菌小于10 h;不稳定指数(II)计算为33.61,这说明蛋白质是稳定的。3.3.2 鸡ANXA2蛋白二级结构分析
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡膜联蛋白A2在DF-1细胞中的表达及亚细胞定位[J]. 龙耀,郭徵力,陈纯露,邓珊珊,熊建民,袁超,高洪波,段志强. 中国家禽. 2019(08)
[2]膜联蛋白A2磷酸化与功能调控研究进展[J]. 李辰跃,顾操,赵世红. 第二军医大学学报. 2019(02)
[3]α-烯醇化酶在肿瘤中的研究进展[J]. 徐信,陈博. 国际肿瘤学杂志. 2018 (05)
[4]Deciphering the role of hedgehog signaling in pancreatic cancer[J]. Dongsheng Gu,Kelly E Schlotman,Jingwu Xie. The Journal of Biomedical Research. 2016(05)
[5]鸡卵巢中ANXA2基因表达调控研究[J]. 朱桂玉. 山东农业大学学报(自然科学版). 2014(03)
[6]大鼠抗小鼠重组膜联蛋白A2单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 江淼,沈飞,包红雨,张丽意,谢丽倩,赵益明,阮长耿. 苏州大学学报(医学版). 2011(06)
[7]膜联蛋白A2参与病毒复制循环研究进展[J]. 陈江涛,吉艳红,王光祥,尚佑军,刘艳红,刘湘涛. 中国人兽共患病学报. 2010(06)
[8]Annexin A2的结构和功能及其与疾病的关系[J]. 陆秋涯,黄立东,陆佩华. 医学分子生物学杂志. 2008(02)
硕士论文
[1]鸡ANXA2基因在卵泡发育中的表达及调控研究[D]. 陈欣.曲阜师范大学 2015
[2]Annexin A2蛋白单克隆抗体制备及其时间分辨荧光免疫分析方法的初步建立[D]. 尹江丽.南方医科大学 2014
[3]猪源膜联蛋白A2的克隆、表达及其多克隆抗体的制备[D]. 陈江涛.中国农业科学院 2010
本文编号：3498659
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
体外培养的鸡卵泡膜细胞
用特异性引物从鸡胚成纤维细胞总RNA反转录的cDNA中通过PCR扩增得到约1053 bp的特异性扩增条带(图1.2A),与预期目的片段大小一致。对获得的重组原核表达载体经过XhoⅠ和Bam HⅠ酶切电泳,获得约5900 bp的载体条带和1053 bp的目的基因条带(图1.2B)。将获得的阳性重组原核表达载体送公司测序,比对结果发现鸡ANXA2基因正确插入到原核表达载体pET-32a(+),并且未发生碱基的突变,说明成功构建重组原核表达载体pET-32a-ANXA2。3.3 鸡ANXA2基因的生物信息学分析
鸡ANXA2基因开放阅读框长度为1020 bp,共编码339个氨基酸,其中含量较高的氨基酸有亮氨酸(35个,占比10.3%)、赖氨酸(33个,占比9.7%)、天冬氨酸(27个,占比8.0%),含量较少的氨基酸是组氨酸(1.2%)、半膀胺酸(1.5%)、脯氨酸(1.8%);带负电荷的氨基酸残基总数(Asp+Glu):53。带正电荷的氨基酸残基(Arg+Lys)总数:53。ANXA2蛋白在哺乳动物网状细胞(体外)的半衰期为30 h,;酵母体内小于20 h;体内大肠杆菌小于10 h;不稳定指数(II)计算为33.61,这说明蛋白质是稳定的。3.3.2 鸡ANXA2蛋白二级结构分析
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡膜联蛋白A2在DF-1细胞中的表达及亚细胞定位[J]. 龙耀,郭徵力,陈纯露,邓珊珊,熊建民,袁超,高洪波,段志强. 中国家禽. 2019(08)
[2]膜联蛋白A2磷酸化与功能调控研究进展[J]. 李辰跃,顾操,赵世红. 第二军医大学学报. 2019(02)
[3]α-烯醇化酶在肿瘤中的研究进展[J]. 徐信,陈博. 国际肿瘤学杂志. 2018 (05)
[4]Deciphering the role of hedgehog signaling in pancreatic cancer[J]. Dongsheng Gu,Kelly E Schlotman,Jingwu Xie. The Journal of Biomedical Research. 2016(05)
[5]鸡卵巢中ANXA2基因表达调控研究[J]. 朱桂玉. 山东农业大学学报(自然科学版). 2014(03)
[6]大鼠抗小鼠重组膜联蛋白A2单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 江淼,沈飞,包红雨,张丽意,谢丽倩,赵益明,阮长耿. 苏州大学学报(医学版). 2011(06)
[7]膜联蛋白A2参与病毒复制循环研究进展[J]. 陈江涛,吉艳红,王光祥,尚佑军,刘艳红,刘湘涛. 中国人兽共患病学报. 2010(06)
[8]Annexin A2的结构和功能及其与疾病的关系[J]. 陆秋涯,黄立东,陆佩华. 医学分子生物学杂志. 2008(02)
硕士论文
[1]鸡ANXA2基因在卵泡发育中的表达及调控研究[D]. 陈欣.曲阜师范大学 2015
[2]Annexin A2蛋白单克隆抗体制备及其时间分辨荧光免疫分析方法的初步建立[D]. 尹江丽.南方医科大学 2014
[3]猪源膜联蛋白A2的克隆、表达及其多克隆抗体的制备[D]. 陈江涛.中国农业科学院 2010
本文编号：3498659
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