鸭疫里氏杆菌DPP IV缺失株的生物学特性研究和aroA缺失株的构建

发布时间：2021-11-16 22:03

　　鸭疫里氏杆菌病是由鸭疫里氏杆菌（Riemerella anatipestifer, RA）引起的目前严重危害养鸭业的重要接触性传染病之一,特征是败血性渗出,临床剖检症状主要表现为全身浆膜炎性渗出。该病呈世界范围分布,给世界各国的养鸭业造成了重大的经济损失。目前把RA分为21个血清型,因为血清型众多,而各个血清型之间缺乏有效的交叉保护,使用疫苗免疫预防该病困难重重,一旦感染此病,将给鸭场带来难以估量的损失,因此我们迫切需要安全有效的疫苗来防治此病。使用分子生物学手段,研究鸭疫里氏杆菌的致病和免疫机制,对预防该病具有重大意义。本研究以血清1型鸭疫里氏杆菌云梦株（RA-YM）为亲本株,通过构建重组自杀性质粒,采用结合转移方法构建了RA-YM株的aroA基因缺失株,为后续研究鸭疫里氏杆菌aroA基因的功能奠定基础。同时,对本实验室已构建的鸭疫里氏杆菌DPPⅣ缺失株的生物学特性进行了研究。取得的主要研究结果如下：1鸭疫里氏杆菌DPP Ⅳ缺失株的生物学特性研究经生化鉴定,鸭疫里氏杆菌DPP Ⅳ缺失株和亲本株的生化特性并无变化。将鸭疫里氏杆菌DPP Ⅳ缺失株和亲本株在TSB培养基中培养,测定其生长曲... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
    1 RA病原学研究进展
        1.1 分类地位
        1.2 生物学特性及血清型
        1.3 分子生物学研究进展
    2 RA流行病学研究进展
    3 RA临床症状及诊断方法
        3.1 临床症状
        3.2 诊断方法
    4 RA的防治研究进展
        4.1 药物防治
        4.2 疫苗防治
    5 细菌突变株构建方法的研究进展
        5.1 自然突变
        5.2 人工诱导
        5.3 分子生物学方法
第二章 鸭疫里氏杆菌DPPⅣ缺失株生物学特性的研究
    1 目的和意义
    2 材料
        2.1 菌株与细胞
        2.2 主要试剂
        2.3 实验动物
        2.4 主要溶液的配制
        2.5 主要仪器
    3 生物学特性的研究
        3.1 鸭疫里氏杆菌DPPⅣ基因缺失株生化特性鉴定
        3.2 鸭疫里氏杆菌DPPⅣ基因缺失株生长曲线的测定
        3.3 鸭疫里氏杆菌DPPⅣ基因缺失株LD_(50)的测定
        3.4 鸭疫里氏杆菌DPPⅣ基因缺失株的粘附入侵试验
    4 结果分析
        4.1 鸭疫里氏杆菌DPPⅣ基因缺失株的生化鉴定
        4.2 鸭疫里氏杆菌DPPⅣ基因缺失株生长曲线的测定
        4.3 鸭疫里氏杆菌DPPⅣ基因缺失株LD_(50)的测定
        4.4 鸭疫里氏杆菌DPPⅣ基因缺失株的粘附入侵试验
    5 讨论
第三章 鸭疫里氏杆菌aroA基因缺失突变株的构建
    1 目的和意义
    2 材料
        2.1 菌株和质粒
        2.2 主要分子生物学及生化试剂
        2.3 主要溶液的配制
        2.4 主要仪器设备
    3 实验方法
        3.1 RA-YM aroA基因左右臂的克隆与鉴定
        3.2 壮观霉素抗性基因(Spc)的扩增
        3.3 重组自杀性质粒pRE112-LSR的构建
        3.4 RA-YM aroA基因缺失菌株的构建及其筛选鉴定
        3.5 RA-YM aroA基因缺失株生化特性鉴定
        3.6 RA-YM aroA基因缺失株生长曲线的测定
    4 结果与分析
        4.1 RA-YM aroA基因左右臂的克隆
        4.2 壮观霉素抗性基因(Spc)的扩增
        4.3 构建重组自杀性质粒pRE112-LSR
        4.4 RA-YM aroA基因缺失菌株的筛选和鉴定
        4.5 RA-YM aroA基因缺失株的生化鉴定
        4.6 RA-YM aroA基因缺失株生长曲线的测定
    5 讨论
结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]鸭疫里默氏菌的gyrA基因的检测与变异位点的分析[J]. 刘颖,苏敬良,刘文华.  中国兽医杂志. 2007(01)
[2]鸭疫里默氏菌一个可能新型的鉴定[J]. 张大丙,郑献进,曲丰发.  中国预防兽医学报. 2006(01)
[3]鸭疫里默氏菌16SrDNA基因的PCR-RFLP分析[J]. 曲丰发,张大丙,郑献进,郭玉璞.  中国兽医杂志. 2005(10)
[4]间接免疫组化法检测鸭疫里默氏杆菌感染和抗原定位[J]. 刘维平,程安春,汪铭书,陈孝跃,周毅,朱德康,刘菲,孟琼华,黄诚,宋涌.  中国兽医学报. 2005(04)
[5]PCR法快速检测鸭疫里氏杆菌的研究[J]. 杨建远,邓舜洲,何后军.  江西农业大学学报. 2005(03)
[6]鸭疫里默氏菌的药物敏感性检测[J]. 刘颖,苏敬良,刘文华,李云格.  中国兽医杂志. 2005(05)
[7]三肽囊素Bursin对鸭疫里氏杆菌病灭活苗免疫效果的影响[J]. 毛娅卿,翁崇鹏,刘烈发,章振华,谌南辉.  江西农业大学学报. 2005(02)
[8]鸭疫里默氏菌铝胶佐剂与铝胶复合佐剂4价灭活疫苗的比较[J]. 程安春,汪铭书,郭宇飞,方鹏飞,刘兆宇,陈孝跃,周毅.  中国兽医学报. 2005(02)
[9]血清10型鸭疫里默氏菌4个亚型的分析[J]. 张大丙.  畜牧兽医学报. 2005(02)
[10]鸭疫里默氏杆菌大肠杆菌二联蜂胶苗的研制[J]. 吕敏娜,黄承锋,张毓金.  中国兽医杂志. 2005(01)

博士论文
[1]鸭疫里氏杆菌免疫诊断方法及在感染鸭肝脏差异表达基因的研究[D]. 周祖涛.华中农业大学 2009

硕士论文
[1]鸭疫里氏杆菌野生型质粒的分离、序列分析和DPP Ⅳ缺失株的构建[D]. 彭晓娅.华中农业大学 2011
[2]鸭疫里默氏杆菌特异性单克隆抗体的研制以及生物被膜和OmpA缺失株的研究[D]. 周小进.扬州大学 2010
[3]利用SCOTS技术筛选鸭疫里氏杆菌体内外差异表达的基因[D]. 郑娟.华中农业大学 2008



本文编号：3499650