生物反应器培养MDCK细胞增殖甲型H3N2流感病毒的研究
发布时间：2021-11-17 20:50
流感即流行性感冒,是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染性疾病。流感病毒属于正黏科病毒,可分为甲、乙、丙三种类型。甲型H3N2流感病毒是最常见的季节性流感病毒,也是目前多价流感疫苗中主要组成部分。流感疫苗以鸡胚培养法生产的传统疫苗为主,这种传统生产工艺虽然成熟,但存在产量不稳定、生产周期长、病毒易变异、易引起过敏反应等缺点。相对于鸡胚,生物反应器大规模生产细胞基质流感疫苗工艺生产过程操作简单且易于控制,生产周期短,自动化程度高,疫苗质量稳定、安全,具有绝对优势。而MDCK细胞为目前公认的对流感病毒敏感的细胞株之一。本研究将甘肃省动物细胞工程技术研究中心保存的MDCK细胞,按照《中华人民共和国药典》（三部）对生产疫苗用细胞要求,从生物学特性、微生物污染和遗传特性鉴定建立MDCK细胞库,其复苏活力为96%,培养48h细胞生长致密单层,形态多呈三角形和不规则多角形,与冻存前的形态基本一致;生长曲线呈“S”型,最大增殖密度为5.45×105cells/mL,倍增时间为23.2h,连续培养10代时形态和生长速度保持一致;真菌、细菌、支原体和内、外源病毒因子检测为阴性;染色体众...
【文章来源】：西北民族大学甘肃省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
甲型流感病毒的结构示意图
疽馔糩97]Fig1-1 Structure of the influenza virus3.3 甲型流感病毒在宿主细胞中的增殖过程甲型流感病毒在宿主细胞中的增殖到成熟过程可以分为以下几个步骤（图1-2）：(1)病毒吸附：病毒 HA 经蛋白酶水解活化后识别宿主细胞表面的唾液酸-α-2, 6-半乳糖(SA-α-2, 6-GaL)受体并与之结合，病毒吸附于宿主细胞表面[98]；(2)脱衣壳：病毒吸附于宿主细胞表面后，通过受体－配体介导的网格蛋白依赖性胞吞作用穿过细胞膜，病毒粒被吞入饮泡，饮泡膜与溶酶体融合后，激活M2 离子通道，使 H+进入饮泡，导致饮泡中的 pH 迅速降至 5.0 左右，饮泡中这种极酸性环境使固定在病毒的 M1 蛋白上的 vRNPs 释放到宿主细胞质中，病毒脱去衣壳；(3)病毒 RNA 的转录和复制：病毒的转录复制过程只有在 vRNPs 进入细胞和后才开始[99]。因此 NP 蛋白引导宿主细胞质中的 vRNPs 通过核孔至细胞核内时，RdRp 催化病毒 RNA 开始转录和复制
图 2-1 MDCK 细胞形态(48h,10×)A：复苏后细胞形态 B：传代后细胞形态Figure 2-1 The morphology of MDCK cells (48h,10×)A:The morphologyafter resuscitation B:The morphologyafter passg
【参考文献】：
期刊论文
[1]2007—2017年中国甲型H3N2流感病毒HA基因特征分析[J]. 徐姿,柯美霞,崔大伟,王胜军. 临床检验杂志. 2018(12)
[2]动物细胞生物反应器大规模培养技术研究进展[J]. 阿尔祖古丽·阿依丁,阿依木古丽,乔自林,马桂兰. 甘肃畜牧兽医. 2018(11)
[3]甲型流感研究进展[J]. 苏伟,张复春. 新发传染病电子杂志. 2018(03)
[4]不同基质流感疫苗的生产工艺及质量控制[J]. 李光谱,张艳,张飞齐,白朋勋. 中国生物制品学杂志. 2019(03)
[5]流感疫苗的研究进展[J]. 窦晓霞,王家敏,李倬. 西北民族大学学报(自然科学版). 2018(01)
[6]动物细胞规模化培养技术现状[J]. 楚品品,蒋智勇,勾红潮,宋帅,李淼,李艳,李春玲,蔡汝健. 动物医学进展. 2018(02)
[7]应用固定床式生物反应器大规模制备慢病毒[J]. 徐文涛,解国放,解正刚. 中国生物制品学杂志. 2018(01)
[8]A型流感病毒研究进展[J]. 邹积振,程凯慧,陈为京,于志君. 安徽农业科学. 2017(32)
[9]细胞培养微载体及其在生物医药领域的应用[J]. 梅建国,庄夕栋,张颖,庄金秋,苗立中,吴信明,刘吉山,谢金文,丁壮,沈志强. 生物技术. 2017(05)
[10]MDCK细胞悬浮培养技术在流感疫苗中的应用[J]. 杨思思,汪一名,李媛媛. 科技创新与生产力. 2017(10)
博士论文
[1]基于MDCK细胞高密度培养的甲型流感病毒疫苗生产工艺开发与优化[D]. 黄锭.华东理工大学 2016
[2]封闭连续细胞培养生产流感病毒工艺过程关键技术的研究[D]. 罗凤山.上海交通大学 2008
硕士论文
[1]无血清悬浮培养MDCK细胞生产H9亚型禽流感疫苗的关键控制点探究[D]. 彭雯娟.华东理工大学 2017
[2]用于口蹄疫疫苗生产的BHK悬浮细胞培养工艺的开发[D]. 汪梁.华东理工大学 2016
[3]用于流感疫苗生产的MDCK悬浮细胞流加培养工艺的开发[D]. 贾涵婧.华东理工大学 2015
[4]基于MDCK细胞培养的流感疫苗研究[D]. 王石磊.上海交通大学 2012
本文编号：3501623
【文章来源】：西北民族大学甘肃省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
甲型流感病毒的结构示意图
疽馔糩97]Fig1-1 Structure of the influenza virus3.3 甲型流感病毒在宿主细胞中的增殖过程甲型流感病毒在宿主细胞中的增殖到成熟过程可以分为以下几个步骤（图1-2）：(1)病毒吸附：病毒 HA 经蛋白酶水解活化后识别宿主细胞表面的唾液酸-α-2, 6-半乳糖(SA-α-2, 6-GaL)受体并与之结合，病毒吸附于宿主细胞表面[98]；(2)脱衣壳：病毒吸附于宿主细胞表面后，通过受体－配体介导的网格蛋白依赖性胞吞作用穿过细胞膜，病毒粒被吞入饮泡，饮泡膜与溶酶体融合后，激活M2 离子通道，使 H+进入饮泡，导致饮泡中的 pH 迅速降至 5.0 左右，饮泡中这种极酸性环境使固定在病毒的 M1 蛋白上的 vRNPs 释放到宿主细胞质中，病毒脱去衣壳；(3)病毒 RNA 的转录和复制：病毒的转录复制过程只有在 vRNPs 进入细胞和后才开始[99]。因此 NP 蛋白引导宿主细胞质中的 vRNPs 通过核孔至细胞核内时，RdRp 催化病毒 RNA 开始转录和复制
图 2-1 MDCK 细胞形态(48h,10×)A：复苏后细胞形态 B：传代后细胞形态Figure 2-1 The morphology of MDCK cells (48h,10×)A:The morphologyafter resuscitation B:The morphologyafter passg
【参考文献】：
期刊论文
[1]2007—2017年中国甲型H3N2流感病毒HA基因特征分析[J]. 徐姿,柯美霞,崔大伟,王胜军. 临床检验杂志. 2018(12)
[2]动物细胞生物反应器大规模培养技术研究进展[J]. 阿尔祖古丽·阿依丁,阿依木古丽,乔自林,马桂兰. 甘肃畜牧兽医. 2018(11)
[3]甲型流感研究进展[J]. 苏伟,张复春. 新发传染病电子杂志. 2018(03)
[4]不同基质流感疫苗的生产工艺及质量控制[J]. 李光谱,张艳,张飞齐,白朋勋. 中国生物制品学杂志. 2019(03)
[5]流感疫苗的研究进展[J]. 窦晓霞,王家敏,李倬. 西北民族大学学报(自然科学版). 2018(01)
[6]动物细胞规模化培养技术现状[J]. 楚品品,蒋智勇,勾红潮,宋帅,李淼,李艳,李春玲,蔡汝健. 动物医学进展. 2018(02)
[7]应用固定床式生物反应器大规模制备慢病毒[J]. 徐文涛,解国放,解正刚. 中国生物制品学杂志. 2018(01)
[8]A型流感病毒研究进展[J]. 邹积振,程凯慧,陈为京,于志君. 安徽农业科学. 2017(32)
[9]细胞培养微载体及其在生物医药领域的应用[J]. 梅建国,庄夕栋,张颖,庄金秋,苗立中,吴信明,刘吉山,谢金文,丁壮,沈志强. 生物技术. 2017(05)
[10]MDCK细胞悬浮培养技术在流感疫苗中的应用[J]. 杨思思,汪一名,李媛媛. 科技创新与生产力. 2017(10)
博士论文
[1]基于MDCK细胞高密度培养的甲型流感病毒疫苗生产工艺开发与优化[D]. 黄锭.华东理工大学 2016
[2]封闭连续细胞培养生产流感病毒工艺过程关键技术的研究[D]. 罗凤山.上海交通大学 2008
硕士论文
[1]无血清悬浮培养MDCK细胞生产H9亚型禽流感疫苗的关键控制点探究[D]. 彭雯娟.华东理工大学 2017
[2]用于口蹄疫疫苗生产的BHK悬浮细胞培养工艺的开发[D]. 汪梁.华东理工大学 2016
[3]用于流感疫苗生产的MDCK悬浮细胞流加培养工艺的开发[D]. 贾涵婧.华东理工大学 2015
[4]基于MDCK细胞培养的流感疫苗研究[D]. 王石磊.上海交通大学 2012
本文编号：3501623
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3501623.html
