牛α干扰素在毕赤酵母中的高效分泌表达及活性研究

发布时间：2021-11-17 20:53

　　我国是养牛大国，但由于多种传染病的影响，严重制约了养牛业的发展，如：奶牛乳腺炎、口蹄疫、牛病毒性腹泻等。研究表明，重组牛干扰素（boIFN-）在体外具有抗水疱性口炎病毒、口蹄疫病毒、牛病毒性腹泻病毒等多种病毒的作用。干扰素广泛的抗病毒和多种免疫调节功能，使干扰素对重大传染病具有一定的预防和控制作用。高效表达高活性的boIFN-将有利于疾病的预防和控制。巴斯德毕赤酵母表达系统作为一种成熟的真核表达工具，已成功高效分泌表达多种蛋白，本研究采用毕赤酵母高效分泌表达牛干扰素并进行活性分析研究，为牛干扰素的大规模应用奠定了基础，为牛常见疾病的预防和控制提供了实验依据。本研究首先对boIFN-基因进行优化，主要通过密码子偏嗜性优化，G+C含量调整，AT富含区调整等几个方面。将优化后的opti-boIFN-基因克隆于毕赤酵母专用分泌型表达载体pPIC9K，构建重组质粒pPIC9K-opti-boIFN-，电转毕赤酵母感受态GS115，通过MD板（营养缺陷型）和不同浓度的YPD-G418板筛选阳性克隆进行诱导表达，取诱导上清SDS-PAGE电泳、western blot分析。同时采用单因素实验方法，分... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

boIFN-基因密码子使用分析

毕赤酵母密码子使用分析

优化后基因与原基因序列比对Fig1.3Nucleotidesequencealignmentbetweenopti-boIFN-andorig-boIFN-

【参考文献】：
期刊论文
[1]牛γ干扰素的表达及其抗病毒活性测定[J]. 徐正中,陈祥,单锋丽,孟闯,孙林,黄金林,潘志明,耿士忠,焦新安.  生物工程学报. 2011(02)
[2]牛α干扰素在新城疫病毒La Sota疫苗株中的高效稳定表达及抗病毒活性检测[J]. 葛金英,丁玉林,解希帝,曹有才,刘娣,步志高.  黑龙江畜牧兽医. 2009(09)
[3]牛γ-干扰素在重组杆状病毒中的表达及其抗病毒活性的测定[J]. 秦立廷,王喜军,胡森,刘思当,步志高,李志中,陈伟业,葛金英.  微生物学报. 2007(03)

博士论文
[1]重组牛、猪和鸡β干扰素在CHO细胞中的高效稳定表达及其生物学活性研究[D]. 陈伟业.南京农业大学 2007



本文编号：3501626