circSNX29通过Wnt5a/Ca 2+ 信号通路调控牛肌细胞增殖、分化的机制研究

发布时间：2021-11-18 18:12

　　肌生成是一个复杂而精确的过程,并受到一些非编码RNA和信号通路的高度调控。环状RNAs（circRNAs）是一类新型内源性非编码RNA,在绝大多数真核生物转录后水平发挥调节功能。虽然在多个物种和组织中已鉴定出一些cirRNAs,但其调控的分子机制仍不太明确。在本研究中,利用牛骨骼肌circRNAs测序数据,筛选并鉴定了一个来自宿主SNX29基因的候选circRNA,并将其命名为circSNX29,并进一步探究其在肌肉发育过程中的调控作用。超表达circSNX29促进成肌细胞分化,抑制细胞增殖,而干扰circSNX29抑制其分化,促进增殖。随后,利用RNAhybrid进行生物信息学预测发现,circSNX29可能吸附到miR-744,具有9个潜在的结合位点。利用双荧光素酶报告分析实验,结果显示,circSNX29能够直接与miR-744竞争性结合,并有效地扭转miR-744对Wnt5a和CaMKIIδ的抑制作用。重要的是,通过KEGG通路富集分析、Western blotting、钙离子荧光探针和CamKII活性检测等实验,结果发现,超表达Wnt5a和circSNX29通过增加CamKI... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
前言
文献综述
    第一章 非编码RNA在骨骼肌中的研究进展
        1.1 骨骼肌的功能与肌生成
        1.2 miRNAs研究进展
            1.2.1 miRNAs产生的概述
            1.2.2 miRNAs的作用机制
            1.2.3 肌生成相关miRNAs
        1.3 肌生成相关信号通路
        1.4 circRNAs研究进展
            1.4.1 circRNAs的发现
            1.4.2 circRNAs的产生及分类
            1.4.3 circRNAs的分子功能
试验研究
    第二章 牛肌生成相关miR-744 通过靶向抑制Wnt5a调控肌细胞增殖和分化
        2.1 材料与方法
            2.1.1 实验材料准备
            2.1.2 牛肌原代细胞分离培养及冻存
            2.1.3 载体构建
            2.1.4 双荧光素酶报告分析
            2.1.5 增殖试验
            2.1.6 免疫荧光试验
            2.1.7 总RNA提取及RT-qPCR
            2.1.8 总蛋白提取和Western blotting试验
            2.1.9 数据分析
        2.2 结果与分析
            2.2.1 秦川牛骨骼肌中miR-744 的鉴定
            2.2.2 超表达miR-744 促进成肌细胞增殖
            2.2.3 超表达miR-744 抑制成肌细胞分化
            2.2.4 miR-744 直接靶向Wnt5a基因
            2.2.5 超表达Wnt5a抑制细胞分化,并促进细胞增殖
        2.3 讨论
        2.4 小结
    第三章 circ SNX29 调控成肌细胞增殖与分化的机制研究
        3.1 材料与方法
            3.1.1 实验材料准备
            3.1.2 牛肌原代细胞分离及培养
            3.1.3 核质分离试验
            3.1.4 总RNA提取及RT-qPCR
            3.1.5 载体构建
            3.1.6 增殖及周期测定试验
            3.1.7 免疫荧光试验
            3.1.8 miR-744 Sensor试验及荧光素酶报告分析
            3.1.9 总蛋白提取和Western blotting试验
            3.1.10 数据分析
        3.2 结果与分析
            3.2.1 秦川牛骨骼肌中circSNX29 的鉴定
            3.2.2 circSNX29 主要表达于细胞质
            3.2.3 circSNX29 竞争性结合miR-744 调控Wnt5a的表达
            3.2.4 circSNX29 通过竞争性结合mi R-744 促进肌细胞分化
            3.2.5 circSNX29 通过竞争性结合mi R-744 抑制肌细胞增殖
        3.3 讨论
        3.4 小结
    第四章 circ SNX29 通过吸附miR-744 激活Wnt5a/Ca~(2+)信号通路调控成肌细胞增殖及分化
        4.1 材料与方法
            4.1.1 牛肌原代细胞分离及培养
            4.1.2 试验仪器与试剂
            4.1.3 总RNA提取及RT-qPCR
            4.1.4 细胞内Ca~(2+)浓度测定
            4.1.5 CamKII激酶活性检测
            4.1.6 总蛋白提取及Western blotting试验
            4.1.7 KEGG富集分析
            4.1.8 数据分析
        4.2 结果与分析
            4.2.1 利用KEGG数据库和Omicsbean筛选Wnt5a/Ca~(2+)信号通路
            4.2.2 超表达circSNX29和Wnt5a通过激活Wnt5a/Ca~(2+)信号通路调控成肌细胞增殖分化
        4.3 讨论
        4.4 小结
结论与创新点
    结论
    创新点
参考文献
附录
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]27nt-miRNA对间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化的影响[J]. 沈凤,杨鹏,陶晓静,颜渊鸳,李丹,欧和生.  生物工程学报. 2019(02)
[2]中国黄牛选育改良及肉牛种业发展建议[J]. 昝林森,梅楚刚,王洪程.  中国牛业科学. 2016(06)
[3]秦川牛种质资源保护利用、存在问题及对策建议[J]. 昝林森,王洪程,梅楚刚,王应海.  中国牛业科学. 2014(06)
[4]从中国黄牛的历史谈现代黄牛的选育[J]. 王雅春,陈幼春,张沅.  中国牛业科学. 2012(03)



本文编号：3503368