山羊IL-10蛋白在金黄色葡萄球菌感染免疫反应中调节机制的研究
发布时间：2021-11-18 18:18
为探究金堂黑山羊白介素-10蛋白（IL-10）在金黄色葡萄球菌感染免疫反应中的调节机制,本研究构建了重组表达质粒pET32a-IL-10,经诱导后表达纯化获得山羊重组IL-10蛋白（rIL-10）,SDS-PAGE和western blot鉴定结果显示,山羊IL-10在大肠杆菌中以包涵体形式表达,重组蛋白大小约为27 ku。每组5只通过金黄色葡萄球菌感染小鼠试验研究rIL-10的免疫调节作用,将15只SPF小鼠随机分为A、B和C组,A组为正常对照组,B和C组腹腔注射500μL金黄色葡萄球菌（1×108cfu/mL）,感染24 h后C组腹腔注射200μg/kg rIL-10,感染48 h后检测各组小鼠血清学指标和3种炎症因子在其6种组织中的转录水平,结果显示,B组小鼠血清丙二醛MDA含量极显著高于A和C组（p<0.01）,总抗氧化能力T-AOC和谷胱甘肽过氧化物GSH-PX酶活性极显著低于A和C组（p<0.01）;IL-1β基因转录水平在B组小鼠心、肝、肺和肾中极显著高于A组（p<0.01）,在C组小鼠心、肝、脾和肺中低于B组（p<0.01）,在脾和肾中低于A组（...
【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(11)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
重组质粒p ET32a-IL-10酶切鉴定
重组菌p ET32a-IL-10/DE3经IPTG诱导后SDS-PAGE检测，结果显示出现约为27 ku的目的重组蛋白条带，且目的蛋白主要以包涵体形式表达（图2A）。经纯化复性后，SDS-PAGE显示在约27 ku处有单一条带（图2B），表明得到了纯化的r IL-10。Western blot鉴定结果显示出现特异性条带（图2C），进一步表明表达得到r IL-10。2.3 r IL-10对各组小鼠血清学指标的影响
利用T-AOC检测试剂盒（ABTS法）、GSH-PX测定试剂盒（比色法）和MDA测定试剂盒（TBA法）分别测定各组小鼠血清T-AOC、GSH-PX和MDA含量，结果显示，B组小鼠血清MDA含量增加，极显著高于A组（p<0.01),T-AOC和GSH-PX酶活性下降，极显著低于A组（p<0.01）。C组小鼠MDA含量下降，极显著低于B组（p<0.01），与A组小鼠差异不显著。C组小鼠T-AOC增加，极显著高于B组（p<0.01），与A组差异不显著，C组小鼠GSH-PX极显著高于A组和B组（p<0.01）（图3）。表明经金黄色葡萄球菌感染致使小鼠抗氧化能力减弱，机体受到了一定的损伤，但经r IL-10处理后小鼠的机体损伤得到了一定的修复。2.4 r IL-10对炎症因子转录水平的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]急性胰腺炎患者血清IL-6、IL-10水平变化及其与淋巴细胞自噬凋亡的相关性[J]. 潘静,覃月秋,徐晨阳,梁云轩,宋嗣恩,季科,杨复锵,周喜汉,黄赞松. 山东医药. 2019(27)
[2]阿奇霉素联合卡介菌多糖核酸对糖尿病合并金黄色葡萄球菌肺炎的疗效[J]. 李衍生,陈焕明,李英海. 医学理论与实践. 2019(14)
[3]山羊皮下脓肿的病原分离与鉴定[J]. 张斯旂,刀筱芳,李垚,马媛,杨发龙. 中国畜牧兽医. 2019(03)
[4]金堂黑山羊白介素10基因的克隆及表达分析[J]. 方庆,王利. 中国畜牧兽医. 2018(12)
[5]扎布耶盐山羊金黄色葡萄球菌分离鉴定及药敏试验[J]. 何冰梅,马弘财,德吉. 畜牧与饲料科学. 2018(11)
[6]羊葡萄球菌病的防治[J]. 钟彩娃,王琪. 中兽医学杂志. 2017(02)
[7]鸡白介素10（chIL-10）单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 高俊峰,柳亚楠,王永强,曹红,李晓齐,郑世军. 中国兽医杂志. 2016(12)
[8]猪IL-10基因的原核表达纯化及功能鉴定[J]. 高丽,曹丽. 中国兽医杂志. 2016(05)
[9]斜带石斑鱼IL-10基因的克隆及其原核表达[J]. 肖周婷,黄郁葱,简纪常,鲁义善,吴灶和. 生物技术通报. 2015(09)
[10]牛源金黄色葡萄球菌感染小鼠后药物敏感性变化及其诱导的氧化应激[J]. 杨峰,王旭荣,田永刚,王玲,李新圃,罗金印,李宏胜. 动物医学进展. 2013(12)
硕士论文
[1]枯草芽孢杆菌glnA和glnR基因的鉴定及其对氨氮的应答[D]. 吴开年.西南民族大学 2019
[2]感染金黄色葡萄球菌后小尾寒羊乳腺组织及外周血中TLRs和CK的表达[D]. 陈佳佳.甘肃农业大学 2018
[3]分枝杆菌LpqT蛋白可抑制巨噬细胞炎性因子的表达及凋亡以促进细菌在体内生存[D]. 李凤格.苏州大学 2017
本文编号：3503376
【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(11)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
重组质粒p ET32a-IL-10酶切鉴定
重组菌p ET32a-IL-10/DE3经IPTG诱导后SDS-PAGE检测，结果显示出现约为27 ku的目的重组蛋白条带，且目的蛋白主要以包涵体形式表达（图2A）。经纯化复性后，SDS-PAGE显示在约27 ku处有单一条带（图2B），表明得到了纯化的r IL-10。Western blot鉴定结果显示出现特异性条带（图2C），进一步表明表达得到r IL-10。2.3 r IL-10对各组小鼠血清学指标的影响
利用T-AOC检测试剂盒（ABTS法）、GSH-PX测定试剂盒（比色法）和MDA测定试剂盒（TBA法）分别测定各组小鼠血清T-AOC、GSH-PX和MDA含量，结果显示，B组小鼠血清MDA含量增加，极显著高于A组（p<0.01),T-AOC和GSH-PX酶活性下降，极显著低于A组（p<0.01）。C组小鼠MDA含量下降，极显著低于B组（p<0.01），与A组小鼠差异不显著。C组小鼠T-AOC增加，极显著高于B组（p<0.01），与A组差异不显著，C组小鼠GSH-PX极显著高于A组和B组（p<0.01）（图3）。表明经金黄色葡萄球菌感染致使小鼠抗氧化能力减弱，机体受到了一定的损伤，但经r IL-10处理后小鼠的机体损伤得到了一定的修复。2.4 r IL-10对炎症因子转录水平的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]急性胰腺炎患者血清IL-6、IL-10水平变化及其与淋巴细胞自噬凋亡的相关性[J]. 潘静,覃月秋,徐晨阳,梁云轩,宋嗣恩,季科,杨复锵,周喜汉,黄赞松. 山东医药. 2019(27)
[2]阿奇霉素联合卡介菌多糖核酸对糖尿病合并金黄色葡萄球菌肺炎的疗效[J]. 李衍生,陈焕明,李英海. 医学理论与实践. 2019(14)
[3]山羊皮下脓肿的病原分离与鉴定[J]. 张斯旂,刀筱芳,李垚,马媛,杨发龙. 中国畜牧兽医. 2019(03)
[4]金堂黑山羊白介素10基因的克隆及表达分析[J]. 方庆,王利. 中国畜牧兽医. 2018(12)
[5]扎布耶盐山羊金黄色葡萄球菌分离鉴定及药敏试验[J]. 何冰梅,马弘财,德吉. 畜牧与饲料科学. 2018(11)
[6]羊葡萄球菌病的防治[J]. 钟彩娃,王琪. 中兽医学杂志. 2017(02)
[7]鸡白介素10（chIL-10）单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 高俊峰,柳亚楠,王永强,曹红,李晓齐,郑世军. 中国兽医杂志. 2016(12)
[8]猪IL-10基因的原核表达纯化及功能鉴定[J]. 高丽,曹丽. 中国兽医杂志. 2016(05)
[9]斜带石斑鱼IL-10基因的克隆及其原核表达[J]. 肖周婷,黄郁葱,简纪常,鲁义善,吴灶和. 生物技术通报. 2015(09)
[10]牛源金黄色葡萄球菌感染小鼠后药物敏感性变化及其诱导的氧化应激[J]. 杨峰,王旭荣,田永刚,王玲,李新圃,罗金印,李宏胜. 动物医学进展. 2013(12)
硕士论文
[1]枯草芽孢杆菌glnA和glnR基因的鉴定及其对氨氮的应答[D]. 吴开年.西南民族大学 2019
[2]感染金黄色葡萄球菌后小尾寒羊乳腺组织及外周血中TLRs和CK的表达[D]. 陈佳佳.甘肃农业大学 2018
[3]分枝杆菌LpqT蛋白可抑制巨噬细胞炎性因子的表达及凋亡以促进细菌在体内生存[D]. 李凤格.苏州大学 2017
本文编号：3503376
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