鸡马立克氏病发病过程中HSP60表达和mRNA转录的动态变化及其相关性研究

发布时间：2021-11-19 03:18

　　热休克蛋白（heat shock proteins, HSPs）是组织细胞在应激因素刺激下所产生的一组高度保守的蛋白家族，它不仅在机体各种应激状态下会过量表达，在某些肿瘤组织中也会出现异常表达，参与肿瘤细胞的增殖、凋亡、耐药机制及与肿瘤相关的免疫反应,与肿瘤的发生、发展密切相关。而作为重要代表成员之一的HSP60，对其在肿瘤发病学中的表达和作用的研究则较少，尤其在禽肿瘤性疾病中的研究国内尚未见报道。基于以上背景，本研究取1日龄SPF雏鸡分为MDV-RB1B病毒接种组，HVT疫苗免疫组及无感染、无免疫空白对照组，3组均依次接种ND＋H9AI灭活和ND弱毒疫苗，成功建立鸡MD肿瘤模型。各组定期采外周血通过HA/HI方法测定血清中ND和H9AI的抗体滴度，反映MDV引起的免疫抑制情况，ELISA方法检测血清中HSP60抗体含量的动态变化；定期剖杀采集主要器官组织，制作石蜡切片，HE染色以观察组织病理学变化，免疫组织化学染色检测HSP60在各器官组织中的分布，ELISA检测组织内HSP60含量的动态变化，实时FQ RT-PCR技术定量检测组织内HSP60mRNA的转录水平。分析在肿瘤发病机体内... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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符号说明
中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 热休克蛋白在肿瘤中的研究进展
    1.2 热休克蛋白 60（HSP60）的分布
    1.3 HSP60 的分子生物学特点
        1.3.1 HSP60 的基因特点
        1.3.2 HSP60 的转录调控
        1.3.3 HSP60 mRNA 的翻译表达
        1.3.4 HSP10
    1.4 HSP60 的生物学功能
        1.4.1 HSP60 的结构特点
        1.4.2 HSP60 的分子伴侣机制
        1.4.3 HSP60 与蛋白构象的形成及修复
        1.4.4 HSP60 与蛋白转运
        1.4.5 HSP60 与细胞应激
    1.5 HSP60 引起的免疫反应
    1.6 HSP60 与肿瘤
        1.6.1 HSP60 在肿瘤中的表达
        1.6.2 HSP60 与肿瘤细胞凋亡
        1.6.3 HSP60 与肿瘤治疗
        1.6.4 HSP60 与肿瘤免疫
    1.7 马立克氏病概况
    1.8 本课题研究的目的及意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要试剂和仪器
        2.1.2 主要试剂的配制
        2.1.3 玻片的处理
        2.1.4 病毒
        2.1.5 疫苗
        2.1.6 实验动物
    2.2 方法
        2.2.1 鸡马立克氏病动物模型的建立
        2.2.3 MD 发病鸡肿瘤组织中 HSP60 定位检测
        2.2.4 MD 发病鸡组织中 HSP60 表达水平动态变化检测（ELISA）
        2.2.5 MD 发病鸡组织中 HSP60 mRNA 转录水平动态变化检测
        2.2.6 分析及统计
3 结果与分析
    3.1 MD 动物模型的建立
        3.1.1 MD 发病鸡剖检变化
        3.1.2 MD 发病组织的病理检查结果
        3.1.3 MD 对 ND 和 H9 流感体液免疫影响的检测结果
    3.2 MD 发病鸡血清中 HSP60 抗体动态检测结果
    3.3 MD 发病鸡肿瘤组织中 HSP60 的定位和分布情况
    3.4 MD 发病鸡组织中 HSP60 表达水平的动态变化结果
        3.4.1 标准曲线
        3.4.2 心脏中 HSP60 的表达
        3.4.3 肝脏中 HSP60 的表达
        3.4.4 脾脏中 HSP60 的表达
        3.4.5 肺脏中 HSP60 的表达
        3.4.6 肾脏中 HSP60 的表达
    3.5 MD 发病鸡组织细胞中 HSP mRNA 转录水平的动态变化结果
        3.5.1 标准曲线制作
        3.5.2 荧光定量标准曲线
        3.5.3 HSP60mRNA 转录水平的变化
4 讨论
    4.1 鸡马立克氏病肿瘤模型的成功建立
        4.1.1 MD 动物模型成功确定
        4.1.2 MD 的免疫抑制作用
    4.2 MD 发病鸡 HSP60 的高表达和组织定位
        4.2.1 MD 发病鸡 HSP60 的高表达
        4.2.2 MD 发病鸡 HSP60 的组织定位
    4.3 MD 发病鸡 HSP60mRNA 的高转录
        4.3.1 一步法 RT-PCR 实时荧光染料法
        4.3.2 MD 发病鸡 HSP60mRNA 的高转录
5 结论
参考文献
致谢
硕士期间发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]蛋鸡内脏型马立克氏病的病理学诊断[J]. 李娟,孙成友,李德龙,刘思当.  中国家禽. 2012(14)
[2]马立克氏病的病理组织学诊断[J]. 翁善钢.  今日畜牧兽医. 2011(12)
[3]马立克氏病病毒感染鸡羽髓上皮细胞差异蛋白质组学研究[J]. 丛锋,刘长军,张艳萍,李志杰,张锋,成云,杨文闯,许娜娜.  中国预防兽医学报. 2011(06)
[4]马立克氏病病毒体内复制动力学研究进展[J]. 贺君君,滕丽琼,韦平.  中国家禽. 2011(05)
[5]热休克蛋白HSP60基因在耐药白血病中的表达研究[J]. 雷博.  当代医学. 2011(03)
[6]鸡马立克氏病的诊断与防治[J]. 王桂英.  中国畜禽种业. 2010(01)
[7]种鸡马立克氏病和淋巴白血病的病理学诊断[J]. 丁衍涛,王庆文,刘静.  中国动物检疫. 2009(12)
[8]内脏型鸡马立克氏病的病理学诊断[J]. 郑素玲.  科技信息. 2009(28)
[9]人脑胶质瘤中HSP-60,70的表达[J]. 葛岩,王医术,张海英,高婷,瘳翔宇,李玉林.  中国实验诊断学. 2009(09)
[10]鸡马立克病研究进展[J]. 褚秀玲,苏建青,付本懂,王鲁,王春元,申海青,韦旭斌.  动物医学进展. 2009(01)



本文编号：3504177