副鸡禽杆菌外膜蛋白gcbG的原核表达及荚膜转运基因HctC缺失株的构建

发布时间：2021-11-19 06:40

　　鸡鼻炎是由副鸡禽杆菌引起的以鸡肿头肿脸为主要症状的急性呼吸道传染病，主要引起育成鸡生长发育受阻和淘汰率增加，且造成蛋鸡产蛋量明显下降，给我国养禽业造成了巨大损失。因此，进行Apg新型疫苗的研发，研制出对鸡安全、有效并能迅速产生免疫力的基因工程疫苗为当前研究的主要任务。本研究对B型标准株gcbG基因进行了克隆、测序，大小为495bp，将其插入pGEX-5X-1原核表达质粒中，构建pGEX-5X-gcbG原核表达载体，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，获得gcbG蛋白原核表达菌株；对gcbG蛋白进行表达、最佳表达条件的优化以及表达产物的免疫原性分析，结果表明，本实验成功地在体外表达了APg血清B型gcbG蛋白，大小约为44ku,该蛋白在IPTG浓度为1mM/L，温度为28℃，表达时间为5h，表达量最高，且为包涵体表达。纯化gcbG重组蛋白包涵体，进行Westernblotting检测，结果表明，目的蛋白与Apg鸡阳性血清有特异性免疫反应。对B型标准株HctC基因进行了克隆、测序，大小为1164bp，以副鸡禽杆菌标准株0221为实验基础，利用转座子采用定点克隆的方法，扩增其全长片段，... 

【文章来源】：新疆农业大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

gcbG基因的PCR扩增250bp

重组质粒pGEX-5X-gcbG的酶切鉴定495bp

SDS-PAG鉴定检测gcbG蛋白在大肠杆菌中的表达Fig.2-4SDS－PAGEanalysisofproteinexpressedbyProkaryoticexpressioninE.coli

【参考文献】：
期刊论文
[1]重组肽疫苗防控鸡传染性鼻炎[J]. 朱静.  中国家禽. 2012(23)
[2]副猪嗜血杆菌EZ-Tn5转座子插入突变体库的构建及减毒株的筛选[J]. 贺云霞,徐慧,叶飞,孙慧玲,王宏俊,龚玉梅,张莉,黄秀芬,张培君.  安徽农业科学. 2011(13)
[3]副鸡禽杆菌河南株的分离及PCR鉴定[J]. 苗立中,沈志强,王艳,吴忆春,李峰,林初文.  畜牧与兽医. 2010(02)
[4]副鸡禽杆菌抗原表位的筛选与鉴定[J]. 王宏俊,龚玉梅,高亚萍,柳川,张培君.  中国兽医科学. 2009(07)
[5]利用转座子建立细菌单基因突变株库的策略和方法[J]. 丛延广,胡福泉.  微生物学免疫学进展. 2008(02)
[6]Modesto株副鸡禽杆菌血凝素的原核表达及其生物活性鉴定[J]. 王宏俊,安烨,龚玉梅,陈小玲,张培君.  生物技术通讯. 2008(02)
[7]胸膜肺炎放线杆菌apxIC基因插入失活突变株构建及免疫原性分析[J]. 徐福洲,史爱华,陈小玲,杨兵,王金洛.  微生物学报. 2007(05)
[8]B型副鸡嗜血杆菌血凝素基因的克隆表达及生物活性鉴定[J]. 王宏俊,张培君,龚玉梅,杨汉春.  畜牧兽医学报. 2007(01)
[9]A型副鸡嗜血杆菌血凝素基因的克隆表达及其产物的生物学活性鉴定[J]. 王宏俊,张培君,龚玉梅,李永清,陈小玲,杨汉春.  中国兽医科学. 2006(10)
[10]肺炎链球菌体内诱导基因的筛选及初步鉴定[J]. 孟江萍,尹一兵,张雪梅,黄远帅,蓝锴.  微生物学报. 2006(04)

硕士论文
[1]副鸡禽杆菌体内诱导基因的筛选研究[D]. 梁玉荣.河北工程大学 2012
[2]副猪嗜血杆菌hhdA基因缺失株的构建及胞外丝氨酸蛋白酶免疫原性的研究[D]. 张念章.中国农业科学院 2011
[3]副猪嗜血杆菌aroA基因鉴定分析及其转移载体的构建研究[D]. 薛晓晶.首都师范大学 2008
[4]延边地区鸡传染鼻炎油乳苗的研制[D]. 吴继秋.延边大学 2005



本文编号：3504489